5-氮-2-脫氧胞苷對人膀胱癌細胞株5637細胞生長及RUNX3基因甲基化的影響

王 磊

（江西衛生職業學院，江西南昌，330052）

RUNX3(human runt—related transcription factor 3)基因是近來研究較多的一個腫瘤抑制基因，該基因是位于染色體lp36，全長67kb，內有啟動子p1、p2兩個、外顯子6個和開放閱讀框1290bp[1]。在這2個啟動子中富含有GC，特別是在p2啟動子中GC的含量為64%，容易出現甲基化改變[2]。對于基因的甲基化和去甲基化現象，這是細胞生長和分化的重要程序，可是在腫瘤的發生發展中則會發生紊亂。研究中，通過在使用不同濃度的去甲基化藥物5-Aza-CdR對膀胱癌5637細胞株處理后，檢測RUNX3基因的甲基化情況、表達變化、對細胞增殖及凋亡的影響，進而可能為膀胱癌的早期診斷與檢測、治療以及預后提供依據，尋找新的治療靶點。

1、實驗材料

膀胱癌細胞株5627細胞。

2、實驗方法

2.1 細胞培養、分組 將處于對數生長期的5637細胞株接種到細胞培養板，分為 A、B、C、D4個組別。

2.2 加入不同濃度5－Aza－CdR培養 4組分別加入未加藥的細胞株作為對照組(A組)、加入低濃度（1umol/l）(B組)、中濃度（16umol/l）(C 組)、高濃度（64umol/l）(D 組)的 5－Aza－CdR，繼續培養，收集上述幾組實驗組細胞待測。

2.3 流式細胞儀 檢測各個組別的細胞凋亡情況。

2.4 甲基化特異性PCR(MSP)方法 檢測給藥前后RUNX3基因甲基化的差異。

2.5 RT－PCR法 檢測用藥前后RUNX3基因mRNA表達的變化。

2.6 Western blot檢測 用藥前后RUNX3蛋白表達水平的差異。

3、統計學處理

采用SPSS19.0統計學軟件對所有數據進行分析處理，PCR數據和流式細胞數據均采用Welch檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

4、實驗結果

4.1 不同濃度5-Aza-CdR對膀胱癌5637細胞增殖的影響 與對照組相比較，膀胱癌5637細胞用5-Aza-CdR處理后，細胞的增殖受到抑制，差異有統計學意義（P＜0.05）。不同濃度的5-Aza-CdR作用下，細胞增殖抑制程度有差異性，有統計學意義（P＜0.05）?！?br>