解毒化瘀方對S180荷瘤小鼠5-氟尿嘧啶化療的增效減毒作用研究

張潔婷，云 璐，李海僖，楊 海

(山東省青島市中心醫院，山東 青島 266042)

5-氟尿嘧啶(5-Fu)屬于細胞毒類藥物，是腫瘤化學治療的重要藥物，其抗瘤譜較廣，主要用于治療消化道腫瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、宮頸癌、膀胱癌及皮膚癌等[1]。但是由于5-Fu殺滅腫瘤細胞的非特異性，致使該藥物毒副反應較大，患者治療過程中耐受性差。近些年中藥用于腫瘤治療的研究越來越多，發現中藥可通過降低化療藥物的毒性反應和/或提高化療藥物的敏感性等發揮減毒增效作用[2-4]。解毒化瘀方是臨床使用多年的驗方，可提高患者化療耐受性及依從性，增強患者機體免疫力[5]，且實驗研究發現該組方具有促進小鼠淋巴細胞增殖、增強NK細胞殺傷力作用[6-7]。本研究觀察了解毒化瘀方對S180荷瘤小鼠5-Fu化療效果及毒副作用的影響，旨在為該方的臨床應用提供更多依據。

1 實驗資料

1.1實驗動物及瘤株 雄性昆明種健康小鼠，體質量22～24 g，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，許可證號：SCXK(魯)20140007，動物實驗經醫學實驗動物管理委員會批準。S180肉瘤腫瘤株由首都醫科大學提供，并于青島海洋生物醫藥研究院新藥篩選與評價中心實驗室由昆明小鼠體內腹水傳代保存。

1.2實驗藥物 5-Fu購于阿拉丁(批號：J1330022)。解毒化瘀方組成：黃芪、白術各18 g，茯苓、仙鶴草、魚腥草、茵陳、虎杖、淫羊藿、海藻各15 g，龍葵30 g，姜半夏、制大黃各10 g，經傳統方法煎煮后原液濃縮至480 mg/mL。每次給藥現用現取，混勻后使用，給藥期間藥物儲存在4 ℃條件下。

1.3主要實驗儀器 超凈臺(SW-CJ-2F)：蘇州凈化設備有限公司；倒置顯微鏡(BX53):日本奧林帕斯公司；十萬分之一天平(MS105DU)：瑞士梅特勒公司；離心機Thermo 21R：美國Thermo公司；超低溫冰箱(DW-86L388A):中國海爾公司；高壓滅菌鍋(MLS-3781L)：日本三洋公司；超凈純水器(AdvantageA5):美國密理博公司。

1.4實驗方法

1.4.1腫瘤接種 參照文獻[8]方法。腫瘤細胞均采用3次傳代后活化的S180肉瘤細胞，小鼠經斷頸處死后，抽取腹水，收集S180肉瘤腹水細胞，并用無菌生理鹽水稀釋成1 000萬/mL 細胞懸液。抽取細胞懸液，常規消毒后按每只0.2 mL接種于小鼠右前肢腋部皮下，每只小鼠接種200萬細胞，制備S180小鼠肉瘤的實體瘤動物模型。

1.4.2分組處理 將接種腫瘤細胞后的小鼠隨機分為生理鹽水組、10 mg/kg 5-Fu組、20 mg/kg 5-Fu組、1 200 mg/kg中藥組、2 400 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯合1 200 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯合2 400 mg/kg中藥組，每組14只。接種24 h后開始給予相應干預13 d，5-Fu腹腔注射，隔日1次；中藥灌胃，每日1次；生理鹽水組灌胃中藥同等體積的生理鹽水。

1.4.3指標觀察 ①在實驗期間記錄各組小鼠的一般情況(飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現和死亡情況等)，每日稱體質量并記錄。②末次給藥后24 h處死各組小鼠，剝離其腫瘤組織，稱取腫瘤質量，參照文獻[9]中公式計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率(%)=[1-(實驗組平均瘤質量/對照組平均瘤質量)]×100%。③同時摘取各組小鼠的胸腺及脾臟，剝離被膜，分別稱取小鼠的胸腺及脾臟質量，參照文獻[10]中公式計算胸腺及脾臟指數。胸腺指數=100×胸腺質量/體質量；脾臟指數=100×脾臟質量/體質量。

2 結 果

2.1各組S180荷瘤小鼠一般情況及體質量變化 各中藥組給藥后小鼠精神狀態、被毛光澤度、日常活動情況均優于生理鹽水組及單純5-Fu組，實驗過程中無小鼠發生變態反應。干預13 d后，20 mg/kg 5-Fu組小鼠體質量明顯低于其他組(P均<0.05)，其他各組小鼠體質量比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，見表1及圖1。

表1 各組S180荷瘤小鼠干預前及干預結束后體質量比較

注：①與20 mg/kg 5-Fu組比較，P<0.05。

圖1 實驗期間各組S180荷瘤小鼠體質量變化

2.2各組S180荷瘤小鼠腫瘤質量與腫瘤抑制率比較 10 mg/kg 5-Fu組、20 mg/kg 5-Fu組、10 mg/kg 5-Fu聯合1 200 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯合2 400 mg/kg中藥組腫瘤質量均明顯低于生理鹽水組和1 200 mg/kg中藥組、2 400 mg/kg中藥組(P均<0.05)，生理鹽水組、1 200 mg/kg中藥組、2 400 mg/kg中藥組腫瘤質量比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。20 mg/kg 5-Fu組、10 mg/kg 5-Fu聯合1 200 mg/kg中藥組、10 mg/kg 5-Fu聯合2 400 mg/kg中藥組腫瘤抑制率均明顯高于10 mg/kg 5-Fu組(P均<0.05)，且10 mg/kg 5-Fu聯合1 200 mg/kg中藥組腫瘤抑制率明顯高于20 mg/kg 5-Fu組和10 mg/kg 5-Fu聯合2 400 mg/kg中藥組(P均<0.05)。見表2。

表2 各組S180荷瘤小鼠腫瘤質量與腫瘤抑制率比較

注：①與生理鹽水組比較，P<0.05；②與10 mg/kg 5-Fu組比較，P<0.05；③與10 mg/kg 5-Fu聯合1 200 mg/kg中藥組比較，P<0.05。

2.3各組S180荷瘤小鼠胸腺指數、脾臟指數比較10 mg/kg 5-Fu組、20 mg/kg 5-Fu組胸腺指數均明顯低于生理鹽水組(P均<0.05)，2 400 mg/kg中藥組胸腺指數明顯高于生理鹽水組(P<0.05)，其他組胸腺指數與生理鹽水組比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。20 mg/kg 5-Fu組脾臟指數明顯低于生理鹽水組(P<0.05)，其他組脾臟指數比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。見表3。

表3 各組S180荷瘤小鼠胸腺指數、脾臟指數比較

注：①與生理鹽水組比較，P<0.05 。

3 討 論

目前治療惡性腫瘤的方式主要有化療、放療、手術等，其中化療在腫瘤的綜合治療中占有重要地位。但是化療藥物在殺傷腫瘤細胞的同時也存在一定的毒副反應，故如何提高治療效果、減輕毒副反應一直是臨床亟待解決的問題。相關研究表明，丹參、仙茅等多種中藥可影響腫瘤的生長代謝過程，調控機體的免疫功能和內分泌功能，可減輕腫瘤患者癥狀及化療藥物毒副作用，從而提高腫瘤患者生存周期和生活質量[11-13]。本研究所選解毒化瘀方經臨床應用顯示出較好作用，為進一步探討該方不同劑量單用和與5-Fu聯合應用的效果，筆者進行了相關動物實驗。

本實驗過程中，各組小鼠均無過敏中毒等不良反應，各中藥組小鼠的精神狀態和被毛的光澤度優于生理鹽水組，說明解毒化瘀方單用或聯合5-Fu對實驗小鼠均無明顯的毒害作用。實驗中20 mg/kg 5-Fu組小鼠體質量明顯降低，而10 mg/kg 5-Fu和不同劑量解毒化瘀方聯合應用小鼠體質量與生理鹽水組相比差異不顯著；20 mg/kg 5-Fu組腫瘤抑制率明顯高于10 mg/kg 5-Fu組，不同劑量中藥單獨給藥均無明顯抗腫瘤作用，但是不同劑量中藥聯合10 mg/kg 5-Fu用藥后腫瘤抑制率明顯高于20 mg/kg 5-Fu組，其中中藥低劑量聯合5-Fu效果更好，呈明顯的增效作用，這可能與低濃度藥液小鼠吸收更好有關。10 mg/kg 5-Fu組和20 mg/kg 5-Fu組小鼠胸腺指數均顯著降低，表明5-Fu對胸腺具有明顯的毒害作用；不同劑量中藥聯合5-Fu組，小鼠胸腺指數略高于相同劑量的5-Fu組但差異不明顯，證明中藥聯合給藥對5-Fu造成的小鼠胸腺損害具有一定的緩解作用，提示在抗腫瘤過程中解毒化瘀方有減輕5-Fu對胸腺等免疫器官損害作用的趨勢；此外，2 400 mg/kg中藥組小鼠胸腺指數明顯增高，進一步證明解毒化瘀方可提高免疫活性。對小鼠脾臟指數的觀察發現，20 mg/kg 5-Fu組脾臟指數明顯降低，而不同劑量中藥組和不同劑量中藥聯合5-Fu組脾臟指數與生理鹽水組比較差異不明顯，可見解毒化瘀方對脾臟指數影響不明顯。

綜上所述，解毒化瘀方單獨使用對S180荷瘤小鼠腫瘤生長無抑制作用，與5-Fu聯合使用具有明顯抑制腫瘤生長的作用，并可明顯降低5-Fu對免疫器官的毒害作用，為該中藥組方與化療藥物的聯合應用提供了理論支持。但該中藥組方能否降低5-Fu所致的骨髓抑制作用及其增效減毒作用機制尚不明確，有待進一步研究。