狂犬病、破傷風人免疫血漿抗體效價檢測分析

雷靜，程郁菁，王川，陳鄂湘，喻劍虹，李璞

（國藥集團武漢血液制品有限公司，湖北武漢 430207）

破傷風是由破傷風桿菌侵入人體傷口造成的一種特異性感染，是致死性傳染病，其高毒力的痙攣毒素可阻斷中樞神經系統的抑制性神經遞質，引起肌肉強直和典型的全身痙攣[1]。破傷風抗毒素（TAT）是由馬血清制成的，部分人會出現過敏反應，而破傷風人免疫球蛋白（TIG）是人血制品，基本沒有過敏反應。破傷風人免疫球蛋白主要用于預防和治療破傷風，尤其適用于對破傷風抗毒素（TAT）有過敏反應者。

狂犬病毒轉移的發生起源于被感染宿主的傷口，引起咬傷傷口處唾液病毒的沉積。一旦感染發展，而沒有有效的治療，具有接近100%的致死率。但是，在被咬傷暴露傷口之前或在傷口暴露后很短時間內給予疫苗的注射，能有效避免這種結果的發生[2]。狂犬病人免疫球蛋白主要用于被狂犬或其他瘋動物咬傷、抓傷患者的被動免疫。

疫苗和免疫球蛋白是相輔相成的作用，疫苗屬于抗原，通過刺激機體產生抗體后起到有效的防護作用，需要較長時間產生抗體，但效力持久；免疫球蛋白屬于抗體，能快速起效但效力較短。近年來，臨床對血液制品的需求持續攀升，國內血液制品行業無論是原料血漿采集量，還是血液制品產量、品種都在逐年增長[3]。2017年狂免、破免產品簽發情況見表1。

表1 2017年狂免、破免產品簽發情況

了解各漿站原料血漿的狂犬病/破傷風抗體效價水平，是制備用于預防和治療狂犬病/破傷風的人免疫球蛋白產品的前提[4]。為了解疫苗接種者血清中狂犬/破傷風抗體水平，以評價血漿站的預防接種效果，現對各漿站2015—2017年狂犬疫苗/破傷風疫苗接種者進行血清抗體測定，為漿站提高抗體效價提供依據。

1 材料與方法

1.1 血漿樣品

由武穴武源單采血漿站、鄖陽單采血漿站、武生松滋單采血漿站、武生云夢單采血漿站、湖南君山單采血漿站提供。

1.2 試劑、儀器設備

人狂犬病病毒IgG抗體測定試劑盒（寧波天潤生物藥業有限公司、泰安京泰生物技術有限公司生產）、破傷風IgG抗體測定試劑盒（寧波天潤生物藥業有限公司、泰安京泰生物技術有限公司生產），試劑盒均為合格品并在有效期內使用。Opsys MR酶標儀（DYNEX Technologies, Inc.），PW-960型洗板機（深圳市匯松科技發展有限公司），CU-600型電熱恒溫水槽（武漢恒豐中欣生物科技發展有限公司）。

1.3 檢測方法

采用ELISA法，按照試劑盒說明書操作，陰性對照OD值≤0.1時，試驗成立。空白對照位置：A1；陰性對照位置：A6；9 IU/mL陽性對照位置：A2、A3；6 IU/mL陽性對照位置：A4、A5。9 IU/mL陽性對照稀釋：稀釋液10 μL+陽性對照90 μL；6IU/mL陽性對照稀釋：稀釋液 40 μL+陽性對照60 μL；樣品稀釋：稀釋液100 μL+樣品5 μL。酶標板讀板結果判定：OD值≥（A2+A3）/2，抗體效價≥9 IU/mL；（A4+A5）/2≤OD值＜（A2+A3）/2，6 IU/mL≤抗體效價＜9 IU/mL；OD值＜（A4+A5）/2，抗體效價＜6 IU/mL。

1.4 分析方法

根據檢測數據，采用柱狀圖對各漿站破傷風、狂犬病人免疫血漿抗體效價進行分析，主要對9 IU/mL以上、6～9 IU/mL的高效價血漿所占百分比進行三年的對比。

2 結果與分析

2.1 特異性免疫血漿效價檢測總數分析

2015—2017年特免血漿檢測數據見表2。從表2中可以看出，破免血漿檢測總量呈逐年上漲的趨勢，高效價血漿所占百分比也在逐漸增高，破傷風免疫情況逐漸提高。狂免血漿2016年和2017年檢測總數均比2015年下降了32%，高效價血漿所占百分比也在逐漸降低，這是由于接種疫苗時間長了免疫效果下降導致的，需要進行狂犬疫苗的加強免疫。

表2 2015-2017年特免血漿檢測數據

2.2 狂犬病特免血漿抗體效價檢測結果分析

對比武穴、鄖陽、松滋、云夢漿站三年狂免血漿檢測的數據，結果見表3。

表3 2015—2017年狂免血漿檢測數據

武穴和鄖陽的狂犬血漿檢測總數多于松滋和云夢，對幾個漿站狂犬抗體效價9 IU/mL以上、6～9 IU/mL的高效價血漿所占百分比進行三年的對比，結果見圖1、圖2，從圖中可以看出，武穴和鄖陽高效價血漿所占百分比多于松滋和云夢，說明武穴和鄖陽狂犬免疫效果較好。

圖1 狂犬抗體效價≥9 IU/mL

圖2 6 IU/mL≤狂犬抗體效價＜9 IU/mL

2.3 破傷風特免血漿抗體效價檢測結果

對比君山、松滋、云夢漿站破免血漿三年檢測總數，結果見表4。

表4 2015—2017年破免血漿檢測數據

君山的破傷風血漿檢測總數多于松滋和云夢，對幾個漿站破傷風抗體效價9 IU/mL以上、6～9 IU/mL的高效價血漿所占百分比進行三年的對比，結果見圖3、圖4，從圖中可以看出，君山高效價血漿所占百分比多于松滋和云夢，說明君山的破傷風免疫效果較好。

3 討論

從以上數據和柱狀圖可以看出：破免收漿量逐年增多，2017年比2015年增長了103%，原因是目前破免價格放開，刺激生產廠家增加投產，破免制品價格提高，預計各企業會增加產量。雖然狂免收漿量降低，但是隨著經濟的增長和狂犬病預防門診規范處置程度的提高，狂免產品的需求應該會進一步增長。武穴和鄖陽漿站高效價狂免血漿較多，君山漿站高效價破免血漿較多，武穴、鄖陽、君山三個漿站的采漿量較高，高效價血漿所占百分比也較多。

圖3 破傷風抗體效價≥9 IU/mL

圖4 6 IU/mL≤破傷風抗體效價＜9 IU/mL

狂犬病、破傷風疫苗常規免疫后進行抗體檢測十分重要，特別是對暫未產生抗體者，應及時加強免疫，確保免疫效果[5]。為了采集更多的高效價原料血漿制備出安全有效的狂犬病、破傷風人免疫球蛋白制品，使之取之于民、用之于民，建議漿站增大宣傳工作，動員更多的獻漿員，同時主動嚴格執行免疫程序，提高回采率，爭取多收獲高效價血漿。