UPLC-MS/MS 檢測4種蔬菜中的二嗪磷

二嗪磷又名地亞農、二嗪農，具有良好的內吸傳導作用，能夠抑制昆蟲體內的乙酰膽堿酯酶合成，對防治菜青蟲、棉蚜、三化螟和地下害蟲等有良好的效果。然而，二嗪磷對人的神經系統會產生不良影響。基于世界衛生組織國際癌癥研究機構2017年10月27日公布的致癌物清單顯示，二嗪磷在2A類致癌物清單中。二嗪磷殘留量直接影響到農產品的質量安全。

目前，二嗪磷殘留量的測定多用氣相色譜法和氣相色譜-質譜法等，但其前處理較復雜，靈敏度也不高。液相色譜-質譜法有處理簡單、靈敏度高等優點，可以彌補氣相色譜或者氣相色譜-質譜法的不足。目前，使用液相色譜-質譜法檢測二嗪磷的殘留研究報道較少，而對于蔬菜中二嗪磷的測定則未有液相色譜-質譜法相關方面的報道。本文分別選取瓜類、茄果類、葉菜類和豆類蔬菜中的典型代表黃瓜、番茄、小白菜和豇豆4種蔬菜為試樣，使用超高效液相色譜-串聯質譜（UPLC-MS/MS）在多反應離子監測（MRM）模式下進行快速檢測，分析了UPLC-MS/MS測定4種蔬菜中二嗪磷農藥的殘留量，以期為提高蔬菜中二嗪磷殘留檢測的準確性提供參考。

一、材料和方法

（一）儀器設備

Waters Acquity H-class超高效液相色譜儀。BEH C18 2.1 mm×50 mm×1.7μm色譜柱（美國Waters公 司 ）。Waters Xevo TQ-S micro三重四級桿質譜儀，電噴霧離子源ESI。法國默克Synergy?UV超純水制備系統，德國 IKA T18 digital 高速分散機。Dragonlab渦旋，Fisher公司）。乙酸、氯化鈉（分析純，上海國藥集團公司）。農藥標準品：二嗪磷（質量分數為100 μg/mL，農業農村部環境保護科研監測所）。樣品前處理凈化劑PSA、GCB和MgSO4（Agilent公司）。供試蔬菜為黃瓜、番茄、小白菜和豇豆。

（二）試驗方法

1.基質的制取方法。取蔬菜樣品可食用部分，4種蔬菜各稱取3 kg左右，用干凈的布擦去表面的附著物，采用對角線分割法，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣。準確稱取10 g試樣于離心管中，加入20 mL乙酸-乙腈溶液，搖勻后用均質器于 10 000 r/min 均 質 30 s，加 入 5 g氯化鈉后再均質 30 s。10 000 r/min離 心 5 min，移取上層提取液3 mL，加入裝有凈化劑的離心管中，渦旋混合 1 min，10 000 r/min 離心5 min，移取上清液經 0.22 μm 微孔濾膜過濾，作為基質備用。

2.標準溶液的配制。分別移取100 μg/mL 的二嗪磷標準品 1 mL 置于 10 mL 和 100 mL 的容量瓶中，用乙腈為溶劑定容，配制成10 μg/mL和1 μg/mL的混合標準儲備液。

3.純溶劑加標準溶液的配制。用純溶劑乙腈將混合標準儲備液逐級稀釋配制成 0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL的純溶劑加標準溶液。

4.基質加標準溶液的配制。用基質制取法制得的4種蔬菜基質分別將混合標準儲備液稀釋配制成 0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL 的基質加標準溶液。

（三）質譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），多反應監測（MRM）。毛細管電壓為 3.0 kV，離子源溫度為 150 ℃，錐孔反吹氣流量為50 L/h，脫溶劑氣溫度為 500 ℃，流速為 1000 L/h，碰撞氣為氬氣。具體參數見表1。

二、結果與分析

（一）標準曲線

因樣品中的干擾物影響目標化合物的離子化，使得目標化合物在儀器上的響應發生增強或抑制的現象，從而產生基質效應，影響目標化合物測定的準確性。為了解不同蔬菜基質對二嗪磷測定結果產生的影響，本試驗分別用乙腈溶液、4種不同蔬菜空白基質溶液配成一系列的標準溶液，用高效液相質譜儀檢測。結果表明，4種不同蔬菜的基質標樣峰面積均小于乙腈標樣的峰面積，說明這4種蔬菜中的基質對二嗪磷均有抑制作用。本試驗為消除基質效應的抑制作用，采用不同蔬菜對應不同的基質配制的標準曲線計算結果，以待測物濃度為橫坐標，待測物定量離子的峰面積為縱坐標，繪制線性方程（見表2）。在 0.5～50 ng/mL 濃度范圍內均具有良好的線性關系，線性相關系數＞0.99。

（二）分析方法的準確度、靈敏度和精密度

分別在制備好的黃瓜、番茄、小白菜和豇豆等4種空白蔬菜樣本中添加二嗪磷標準溶液。添加濃度分 別 為 0.01 mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg，每個 添加水平設5 個重復，按照樣品添加試驗進行提取和凈化，進行檢測并計算回收率。二嗪磷在黃瓜中的平均添加回收率為97.5%～103.0%，相對標準偏差為0.60%～2.81%；在番茄中的平均添加回收率為98.7%～102.9%，相對標準偏差為2.01%～3.26%；在小白菜中的平均添加回收率為96.9%～104.2%，相對標準偏差為1.81%～2.64%；在豇豆中的平均添加回收率為96.3%～109.9%，相對標準偏差為1.81%～1.94%（見表3）。

表1 質譜參數

表2 不同基質中二嗪磷的線性方程、相關系數

表3 不同蔬菜中二嗪磷添加回收試驗結果

三、討論

本文建立了二嗪磷在黃瓜、番茄、小白菜和豇豆等蔬菜中使用UPLC-MS/MS檢測其殘留的方法。該方法前處理簡單、回收率高，添加濃度為 0.01～0.1 mg/kg，平均回收率為96.3%～109.9%，相對標準偏差為0.60%～3.26%。準確度和靈敏度均符合農藥殘留的分析要求，同時也為檢測二嗪磷在其他蔬菜中的殘留提供了參考。