漂白粉對近親真寬水蚤不同發育階段的毒性試驗

馬 靜，曹婷婷，吳 桃

（1.內蒙古阿拉善盟水產技術推廣站，內蒙古 阿拉善左旗 750306；2.江蘇省連云港市海州區漁業技術指導站，江蘇 連云港 222000；3.內蒙古鄂爾多斯市水產管理站，內蒙古 康巴什區 017000）

近親真寬水蚤是浮游甲殼動物的一個重要類群，分布廣泛，生長迅速，在水產養殖的水體環境中是許多魚類和水產經濟動物的天然餌料。但因養殖水體中近親真寬水蚤有時會侵襲魚卵或魚苗、蟹苗，故其又是魚類和經濟甲殼動物苗期的敵害，在養魚池和輪蟲培養池中，人們常使用有機磷殺蟲劑（敵百蟲）來防治其危害。在甲殼動物苗種生產中，特別是河蟹育苗過程中則大多使用漂白粉來殺除近親真寬水蚤，其濃度（有效氯）從1 mg/L到10 mg/L不等，殺除效果又依照近親真寬水蚤各發育階段和水肥度條件及溫度不同而有所差別，筆者在實際水產養殖過程中，對漂白粉殺除不同發育階段的近親真寬水蚤的效果進行了深入的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗生物：試驗生物為成體、橈足幼體、卵和無節幼體4個不同發育階段的近親真寬水蚤。近親真寬水蚤成體、橈足幼體均取自養殖生產的池塘；卵由成體死亡后脫落而得；為保持生理的一致性，無節幼體取自卵萌發出的子一代 （24 h以內）。

1.1.2 試驗用水：經300目篩絹網過濾的池塘水。

1.1.3 肥水：取自經人工培養的小球藻大量繁殖后的池塘水，生物量為0.395 mg/mL，化學需氧量（chemical oxygen demand，COD）為 42.8 mg/L，溶氧在 7.85～13.13 mg/L，pH 值在 9.58～9.98，平均室溫25℃。

1.1.4 瘦水：取自未進行人工培養小球藻的池塘水，生物量為0.003 mg/mL，COD為5.46 mg/L，溶氧在 6.75～8.01 mg/L，pH 值在 8.42～8.66， 平均室溫25℃。

1.1.5 主要儀器和藥品：主要儀器有1 000 mL燒杯若干、17 mL青霉素小瓶若干、顯微鏡、血球計數板、浮游生物計數框、電爐、量筒、坩堝、堿式滴定管、容量瓶、碘量瓶、pH計、YST MODEL-58溶氧儀、SXP-250BS-Ⅱ生化培養箱、微量可調移液槍等。此外，還有漂白粉、硫代硫酸鈉、碘化鉀、高錳酸鉀等主要藥品。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗準備：用0.1 mL的微吸管在坩堝中挑選近親真寬水蚤的成體、橈足幼體、無節幼體、卵。其中，成體選擇帶有卵袋、附肢齊全、活動正常的個體；橈足幼體與無節幼體取附肢齊全、活動正常的個體即可，無節幼體是在生物顯微鏡下用0.1 mL的微吸管準確挑選10個由卵萌發出不到24 h的子一代個體；卵來自于帶有卵袋、附肢齊全、活動正常的成體近親真寬水蚤。每一個平行組取10只個體（成體、橈足幼體、無節幼體、卵）放入17 mL青霉素小瓶中，并加入10 mL的試驗用水，將挑選好的樣本放入SXP-250BS-Ⅱ生化培養箱備用，溫度設置在5℃和25℃，光照1 000～2 000 lx。

1.2.2 試驗方法：試驗按等對數間距設計梯度[1-2]設置漂白粉有效氯濃度梯度 （該文所述濃度均為漂白粉有效氯濃度），具體情況見表1。將一定量的漂白粉溶于蒸餾水后取上清液，分別加入盛有試驗生物及卵的小瓶中進行攻毒試驗，每個樣品間加漂白粉的時間不能超過5 min，隨之再次放入SXP-250BS-Ⅱ生化培養箱進行培養，溫度設置在5℃和25℃，光照1 000～2 000 lx，試驗期間不投喂。

表1 正式試驗漂白粉有效氯濃度梯度設置mg/L

試驗在5℃和25℃時分別設肥水和瘦水2個試驗組，每個試驗組對應設1個對照組（只放試驗生物不放漂白粉），每個試驗組3個平行，經8、24、48 h后計算出近親真寬水蚤成體、橈足幼體、無節幼體在不同溫度及水肥度下漂白粉的死亡率和半致死濃度。

為了確定活體和死體帶的卵是否有萌發的能力，用殺死成體的最高濃度（有效氯10.000 mg/L）漂白粉的試驗組作為參照，來探究卵是加藥后被殺死的，還是卵在死體身上就無法繼續萌發。每隔24 h觀察卵的萌發情況，48 h后用碘液固定3個平行樣，統計卵的萌發率。對未萌發的試驗組，用過濾海水反復沖洗，轉置無漂白粉的培養液繼續觀察，觀察時間為48 h，檢驗經過漂白粉處理的卵是否還有萌發的潛力，并統計卵的萌發率。

1.2.3 測定方法：試驗有效氯含量的測定采用碘量滴定法；pH值用pH計測定；溶氧含量用YSTMODEL-58溶氧儀測定；COD用堿式高錳酸鉀法測定；判定試驗生物死亡依據李永涵等對橈足類急性毒性試驗的方法[3]；根據濃度對數與概率單位之間的關系[4-5]，計算漂白粉的半致死濃度（ LC50）。

2 結果及分析

2.1 攻毒后成體的死亡情況

試驗結果表明（見表2），有效氯濃度為1.000mg/L時，成體死亡率超過50%（半數死亡）的情況出現在24 h后的5℃瘦水中、48 h后的5℃瘦水及25℃瘦水中，死亡率分別為83.3%、96.7%和73.3%。有效氯濃度為3.200 mg/L時，除8 h后25℃肥水中死亡率為20%未超過50%外，其余的死亡率均超過50%，其中8 h后5℃肥水的死亡率達100%。有效氯濃度為3.200 mg/L時，48 h后死亡率均達100%，該濃度可作為實踐中使用漂白粉滅殺近親真寬水蚤成體的一個依據。在有效氯濃度為1.000 mg/L和3.200 mg/L 2個濃度下，出現死亡率超過50%未達100%的各試驗數據表明，相同溫度下瘦水中的死亡率高于肥水中的死亡率，相同水體中5℃時 （較低溫度）的死亡率高于25℃時（較高溫度）。

表2 使用漂白粉攻毒后成體死亡情況

表3 使用漂白粉攻毒后橈足幼體死亡情況

表4 使用漂白粉攻毒后無節幼體死亡情況

2.2 攻毒后橈足幼體的死亡情況

由表3可以看出，橈足幼體在有效氯濃度為1.000 mg/L時，在24 h時死亡率超過50%的情況出現在5℃瘦水、25℃瘦水中，死亡率分別為63.3%和53.3%；48 h時死亡率超過50%的情況出現在 5℃瘦水中（83.3%）、25℃瘦水中（100%）、25℃肥水中（56.7%）。在有效氯濃度為3.200 mg/L時，各試驗組死亡率為100%，可見橈足幼體對漂白粉耐受力相比成體較弱。而在有效氯濃度為1.000 mg/L濃度下，肥水中的死亡率在同一溫度下均低于瘦水的死亡率；但該濃度下在同一水體中不同溫度下死亡情況無明顯規律。

2.3 攻毒后無節幼體的死亡情況

由表4可以看出，有效氯濃度為0.100 mg/L時，在5℃的瘦水中的48 h死亡率達96.7%；有效氯濃度為0.320 mg/L時，5℃瘦水中在各時間點（8、24、48 h） 的死亡 率 分 別 為 93.3% 、93.3% 、100%。由此可以得出，在低溫（5℃）的瘦水中可用0.032 mg/L這個濃度滅殺無節幼體；高溫瘦水及肥水中可選用1.000 mg/L這個濃度滅殺無節幼體。無節幼體在1.000 mg/L時各試驗組全部死亡，可見無節幼體對漂白粉的耐受力相比橈足幼體較弱。在0.320 mg/L濃度下各試驗數據表明，相同溫度下瘦水中的死亡率高于肥水中的死亡率；相同水體中5℃時（較低溫度）的死亡率高于25℃時（較高溫度）。

表5 卵在使漂白粉攻毒48 h時的平均萌發率%

2.4 攻毒后卵的萌發情況

由表5可以看出，漂白粉濃度達18.000 mg/L時已嚴重影響了卵的萌發率 （瘦水中萌發率<0.1）；漂白粉濃度達32.000 mg/L時則各組卵均不能萌發，沖洗后在5℃肥水和25℃肥水中有一定的萌發率。從該結果來看，肥水中的萌發率高于瘦水中萌發率；同一水體相比，高溫水體中的萌發率高于低溫水體中的萌發率。

2.5 漂白粉對各發育階段的半致死濃度

由表6可以看出，在同一溫度、同一水體下近親真寬水蚤成體、橈足幼體、無節幼體的48 h LC50依次降低，8 h LC50與24 h LC50無明顯規律。

表6 漂白粉有效氯對近親真寬水蚤各發育階段的半致死濃度 mg/L

3 討論與結論

試驗結果表明，近親真寬水蚤各發育階段在肥水中對漂白粉的耐受力要高于瘦水中的耐受力，這是因為水肥度對有效氯衰減有一定的影響，但并非水肥度越低其有效氯衰減速率就越快 （有效氯對生物的毒性就越大），而是有一個范圍[6-7]。漂白粉有效氯衰減速率還可能受溫度及其他因素的影響，這也就解釋了該文出現經漂白粉攻毒后同一水體在不同溫度下死亡率及半致死濃度不同的現象。

如何有針對性地對近親真寬水蚤各個不同發育階段“對癥下藥”，歷來是生產中的一個難題。該文立足于此，給出了漂白粉對卵、成體、橈足幼體和無節幼體的滅殺濃度，分別為32.000、3.200、1.000～3.200 mg/L和1.000 mg/L，在生產實踐中可以該結論作為參考。依據試驗結果可判斷近親真寬水蚤的卵、成體、橈足幼體和無節幼體對漂白粉（有效氯）濃度耐受性是依次減弱的，其機理顯然與各發育階段固有的生命活力（抗藥性）有關，這與該文中成體、橈足幼體、無節幼體的48 h LC50在同一溫度、同一水體下依次降低結果同樣一致。而8 h LC50與24 h LC50無明顯規律，可能是因為漂白粉衰減過程 （衰減時間）受到多重因素的影響所致，這也是大多“殺蟲劑”為什么要采用48 h這個時間點作為藥效時間截點的原因。

有文獻表明，敵百蟲對近親真寬水蚤成體和橈足幼體的致死時間相近，無節幼體耐藥力比成體要高出近5倍，這與該試驗結果正好相反，可能與不同藥物的作用機理不同有關。而筆者認為，生產中用漂白粉滅殺成蟲后，觀察到池塘中成體已經死亡，而仍有無節幼體的存活的現象，實際上則為卵重新萌發的結果。因為，該試驗得出卵在漂白粉有效氯為32 mg/L下作用48 h，經沖洗后在肥水中有一定的萌發率。從氯對生物的毒性作用機理來看，漂白粉是通過氧化作用導致機體和卵的死亡，即細胞內的重要活性物質——酶類的含硫氫基被氯直接氧化[8-9]，對近親真寬水蚤的卵只有在合適的濃度下才能阻止其萌發。而敵百蟲則是一種神經阻斷劑類藥物，對于成體和幼體起作用，但作用于暫時無神經系統的卵，是不起殺滅作用的，并且近親真寬水蚤有著堅韌的卵袋 和卵膜，都極大地提高了卵對藥物的耐受性。