雜交選育加工專用金針菇菌株的初步研究

李昕竺 曾先富 熊維全

（成都市農林科學院園藝研究所，四川成都611130）

金針菇（Flammulina velutipes），又稱冬菇、樸菇、毛柄金錢菌等，其菌蓋滑潤、菌柄細長脆嫩，形美味鮮，營養價值和保健功效顯著，且具益智作用和觀賞價值，開發利用前景廣闊[1]。我國已開發出很多金針菇的休閑即食食品及飲料，如罐頭、火腿腸、醬制品、果脯、果凍、酸奶、乳飲料、發酵酒、保健飲料等[2-4]。

當前金針菇加工企業所用加工原料主要為工廠化生產及常規袋料栽培，并以菇體顏色為重要商品性狀。以外觀和商品性狀作為篩選原料的重要指標，忽視了原料口感，出現加工原料與加工要求脫節、產品質量不穩定、產品口感不足等一系列問題，這些已成為制約我國金針菇加工產業發展的瓶頸。

筆者在前期篩選出口感脆嫩、產量較高的F3-1和色澤鮮亮的川金7號的基礎上[5]，進行兩個菌株單孢雜交，以咀嚼口感為主要指標，兼顧營養和產量指標，初步獲得品質優良的新加工專用金針菇菌株。

1 材料與方法

1.1 供試材料

①金針菇菌株：黃色金針菇F3-1（成都市農林科學院保藏，試驗編號c表示），白色金針菇川金7號（四川省農科院品種，試驗編號d表示）。②培養基：PDA培養基（去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1000 mL，pH 7）。栽培培養料為玉米芯42%，麩皮20%，玉米粉5%，細木屑30%，白糖1%，石膏1%，石灰1%。料含水量60%，初始pH6.5。

1.2 試驗方法

1.2.1 孢子的分離和單核菌絲的鑒定

將生長成熟的金針菇鮮子實體于無菌環境下剪去菌柄，有菌褶的一面平貼于滅菌的培養皿上，放置于18～20℃的無菌室，保持環境濕度，過夜收集孢子印[6]。以梯度稀釋法將孢子液濃度稀釋至約103個∕mL，兩個親本各取100 μL孢子液均勻涂布于PDA平板培養皿中，倒置放于24℃培養箱中培養3～5 d。觀察孢子萌發情況，待培養基上出現肉眼可見微小菌落時，用接種針挑取單個菌落轉接于PDA平板上，將滅菌的蓋玻片斜插入菌落邊緣培養基中，在24℃培養箱中培養2～3 d，待菌絲爬上蓋玻片后取出蓋玻片，用乳酸酚棉藍試劑染色，在普通光學顯微鏡下觀察有無鎖狀聯合，菌絲無鎖狀聯合的為所需單核體。

1.2.2 單核菌絲配對雜交

將經過顯微鏡檢查的金針菇c和d的單核體兩兩配對，在無菌條件下用滅菌的吸管吸取直徑約0.8 cm的菌塊于PDA平板上培養，兩個菌塊間距1 cm，24℃培養箱培養3～5 d。當兩個融合的單菌落中間形成突起的融合線時，在無菌環境下挑取融合處菌絲到另一PDA培養基上培養，亦將滅菌的蓋玻片斜插入菌落邊緣培養基中，在24℃培養箱中培養2～3 d，待菌絲爬上蓋玻片后取出蓋玻片，用單核菌絲檢驗方法檢驗融合是否成功，將有鎖狀聯合或雙核的菌絲轉接到PDA斜面培養基中。

1.2.3 袋栽試驗初篩

圖1 雜交菌株鎖狀聯合

表1 19個雜交菌株與親本菌絲生長速度比較

采用14 cm×33 cm的栽培袋，每袋裝折干料250 g，121℃滅菌2 h。每個雜交種直接用母種接種5袋，25℃培養室恒溫黑暗培養。待菌絲長滿菌袋后，移入菇房按照金針菇子實體生長要求進行出菇管理。測定記錄各菌株子實體成熟時間、產量、菌蓋直徑、菌柄直徑和長度、基部褐變等數據，綜合比較初步篩選出商品外觀較優良的雜交菌株。

1.2.4 優良雜交菌株復篩

采用1100 mL塑料栽培瓶，每瓶裝料折干約350 g，121℃滅菌2 h，待瓶體冷卻后接種。兩個親本及優良雜交種各接種10瓶，25℃培養室恒溫黑暗培養45 d，移至出菇房搔菌出菇。采用中央控制系統自動控制出菇溫度8～12℃、相對濕度80%～85%、CO2濃度為0.15%～0.25%。測定記錄金針菇子實體單瓶產量、菌蓋直徑、菌柄直徑和長度、基部褐變等數據，同時送樣檢測脆度值和營養成分。

2 結果與分析

2.1 金針菇單核菌絲雜交及雜交菌絲的鑒定

通過孢子稀釋培養、單菌落挑取、鏡檢，獲得36個c菌株的單核體和24個d菌株的單核體。

將獲得的c和d的單核體進行輪交，挑取融合部位菌絲在顯微鏡下檢測鎖狀聯合，觀察到的鎖狀聯合如圖1。

由圖1可見，雜交后形成的雙核菌絲鎖狀聯合明顯。在864對雜交組合中觀察到鎖狀聯合的有452對，配對成功率52.31%。

2.2 袋栽試驗初篩結果

袋栽試驗中452株雜交子代正常出菇的有440株，綜合子實體成熟時間、產量、菌蓋直徑、菌柄直徑和長度、基部褐變等數據，篩選出黃色、菌柄較細且白、菌蓋包裹緊實、基部褐變少的雜交菌株19個，其子實體形態如圖2所示。

2.3 優良雜交后代的評價與篩選

2.3.1 親本及優良雜交子代菌絲生長速度

優良雜交菌株用塑料瓶栽培復篩，測定其菌絲生長速度，與親本菌株菌絲生長速度比較結果如表1。

由表1可以看出，雜交親本c和d在出菇培養基上的菌絲生長速度分別為2.28 mm∕d和2.16 mm∕d，菌絲長勢較好。雜交子代菌絲生長速度較兩個親本快的菌株有 325、371、389、503、567、607，其中371、503、567的菌絲生長極為旺盛。

2.3.2 親本及優良雜交菌株的農藝性狀

復篩中親本及優良雜交菌株的農藝性狀測定結果見表2。

圖2 初篩優良雜交菌株子實體

表2 19個雜交菌株與親本的農藝性狀比較

由表2可見，與親本菌株相比，雜交子代基部褐變程度降低，只有編號375和743菌株基部褐變相對較多。19個雜交子代第一潮菇產量變幅較大，介于60～140 g∕瓶，其中產量介于兩個親本菌株之間的雜交菌株有19、241、371、375、450、503、567。綜合子實體形態等因素，得出雜交子代中性狀較優良的菌株有19、241、371、503、567號。

表3 19個雜交菌株及親本子實體主要營養成分及脆度值

2.3.3 親本及優良雜交菌株的營養成分及脆度

采集親本及優良雜交子代菌株的子實體送到專業質量檢測機構進行營養成分和脆度值的檢測。

從表3可見，雜交子代菌株子實體脆度值高于兩個親本子實體脆度值的有54、300、336、371、389、504、567，其中編號371的菌株子實體脆度值高出親本2倍多。子實體蛋白質含量介于親本c和d菌株含量值之間的有 19、325、336、371、389、429、450、567。子實體氨基酸總量介于親本c和d菌株含量值之間，或者是高于兩個親本子實體含量值的有19、54、299、300、325、371、429、503、567、607、714、743。由此可見，既提升了子實體脆度又基本保持了子實體營養價值的雜交子代菌株為371和567。

3 小結與討論

綜合菌絲生長速度、子實體形態、產量、脆度值和營養成分等指標，初步篩選出雜交子代菌株371和567，下一步還將開展分子實驗獲得其與親本菌株之間的差異性，通過反復栽培確定其穩定性，最終實現在生產上推廣應用。