放射人員外周血淋巴細胞標本制備對染色體畸變結果的影響因素

李 青

（遼陽市疾病預防控制中心，遼寧 遼陽 111000）

放射線是通過利用不穩定元素的衰變過程中釋放出的具有較強穿透性的粒子束如β粒子、γ射線以及常見的X射線等，對工業設備質量、地下礦物情況以及電鍍厚度等進行檢測，從而在多個領域得到了廣泛的應用，但放射線對人體均具有不同程度的傷害。長期低劑量的接觸放射線會導致放射人員的外周血淋巴細胞發生畸變，主要會表現出淋巴細胞染色體畸變陽性率以及微核陽性率的上升，從而對放射人員的機體健康造成不良影響。從事放射工作人員在入職、在職期間及離職要進行定期的職業健康檢查，以確定射線對人體損傷程度[1-2]。臨床主要通過對放射人員的外周血淋巴細胞畸變進行檢測以判斷射線對受檢者機體的傷害程度。

染色體制備過程復雜，實驗中的影響因素很多，并且目前各地方實驗室對外周血淋巴細胞微核檢測的標準仍在探索階段，為提高染色體分裂相檢測結果的準確性，對遼陽市各醫療機構及各企業接觸放射線的工作人員共計553名（男482名，女71名，年齡在20～55歲，放射工作工齡在6個月至30年不等）的外周血培養發現，其中83例培養收獲后外周血淋巴細胞標本在油鏡下檢測染色體分裂相數量少、分散度不好，有重疊，染色體上、下臂短，影響染色體核型分析?，F將可能存在的原因分析如下：

1.一方面培養基培養時間太短，未轉化的、脹大的淋巴細胞較多，分裂相少，通過多次培養發現延長5～7 h培養時間，油鏡下 鏡檢發現收獲的染色體分裂相清晰、分散度更好。

2.另方面培養溫度影響，溫度＜（37±0.5） ℃細胞生長速度減慢，影響細胞分裂周期，這樣規定培養時間內收獲染色體的分裂相就少，影響染色體畸變分析。溫度高于（37±0.5） ℃時，細胞受損或死亡。

3.采集的血液未及時接種到培養基，會造成細胞的死亡，即使之后再接種到RPMI1640細胞培養液中，細胞分裂中期的分裂相也會非常少的，影響染色體畸變分析。

4.在收獲細胞前必須確保所有步驟均是無菌操作，預防細菌或病毒的污染。體外細胞失去了機體免疫機制的保護而容易受到病原菌感染而死亡，因此需要全力確保檢測過程對污染情況的嚴格防控，可使用無菌注射器進行接種，并用酒精對培養裝置進行反復消毒。

5.秋水仙素具有阻止細胞分裂過程中的紡錘絲形成的作用，并能使已經形成的微管解聚、促使DNA復制以及有關蛋白質的合成過程，從而使細胞分裂過程停留在分裂中期，能夠令檢測人員良好的觀察染色體的形態。秋水仙素的濃度越高或作用時間越長，會導致染色體的形態變短變粗，不利于觀測染色體的真實形態，同時秋水仙素的濃度加大，紅細胞的凝集作用增強，甚至可能發生溶血，不利于淋巴細胞生長，因此需要對秋水仙素的濃度以及作用的時間進行嚴格控制，以獲得適宜的染色體形態[3]。

6.在對細胞進行染色時，應控制考緩沖液的酸堿性，采用堿性緩沖液能夠有效提高被乙酸浸潤后酸堿度下降的淋巴細胞的著色效果，為避免大量的樣本玻片架承載玻片染色時，反復浸泡會導致染液堿度下降，可適時補充強堿以維持染液有效的堿度。

7.低滲過程是染色體制備過程中非常重要的一個步驟，在加入低滲液之后需要立即對其進行吹打以沖散細胞團塊，并進行輕柔以防止細胞破碎。低滲的時間一般為15 min左右，若低滲處理時間過長，可能導致細胞膜破碎而丟失染色體；若低滲處理時間過短，則會導致細胞膨脹不夠而使染色體的分散情況不良好，容易呈現為團狀，不能對染色體進行準確的計數分析。在低滲處理之后，細胞已經膨脹而容易出現過早破裂的情況，從而導致分裂的細胞丟失，因此需要在低滲處理后控制好操作力度，維持細胞的完整性，并能使所得到的染色體輪廓清晰并利于染色。

8.在滴片時，需要控制好距離、滴加量以及制片方式，應當選取病理級的玻片并冰凍4 h以上后為冰片，以使細胞良好的附著在玻片上利于染色體分散；在進行滴片操作時，需要先吸取少量的細胞懸液并在玻片上方25 cm左右滴下，每一片玻片3～4滴即可，滴完后在酒精燈外焰過火并晾冷。滴片后需要控制好加熱溫度[4-9]，避免溫度不足導致染色體分散情況差，或溫度抬高導致染色體形態發毛、不清晰，并且使分裂相不完整。

人休淋巴細胞染色體畸變率，是人體輻射損傷程度的黃金標準，想要保障人體淋巴細胞染色體分裂相分析結果準確性，制備過程是最關鍵的步驟，制備染色體過程復雜而繁瑣，要嚴格按照全血直接培養法的操作規程來操作，提高染色體制備的成功率，為人工制備標本和人工分析判斷畸變提供保障。