外周血中MAGE-A3mRNA的檢測(cè)與肝癌早期轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

聶 影

（吉林市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 吉林 132000）

肝癌作為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤疾病，其發(fā)病率較高，臨床分為繼發(fā)性肝癌與原發(fā)性肝癌兩類(lèi)，我國(guó)以原發(fā)性肝癌較為常見(jiàn)，其危害性較大，是臨床常見(jiàn)致死疾病之一。原發(fā)性肝癌早期無(wú)特異癥狀，患者難以早期發(fā)現(xiàn)，因而臨床早期獲診率不高，大多患者獲診時(shí)已為中晚期[1]。目前在肝癌的治療中根治性切除術(shù)應(yīng)用較多，但存在較高轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，若未及時(shí)發(fā)現(xiàn)給予治療，早期微小轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)附近組織導(dǎo)致患者5年生存率降低，為此，在肝癌患者的診療工作中，早期轉(zhuǎn)移的診斷工作尤為重要[2]。相關(guān)研究提示MAGE-A3mRNA在肝癌早期轉(zhuǎn)移的診斷中具有較高特異性，可為肝癌早期轉(zhuǎn)移的臨床診斷指標(biāo)，本文為進(jìn)一步探討MAGE-A3mRNA與肝癌早期轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，選入80例研究對(duì)象完成對(duì)比觀察，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：將2016年1月至2017年12月我院收治的40例肝癌早期轉(zhuǎn)移患者及同期在院體檢的健康人40例納入，對(duì)應(yīng)入組患者組與對(duì)照組，患者組男26例，女14例，平均（49.63±5.14）歲，對(duì)照組男25例，女15例，平均（49.68±5.32）歲，此80例研究對(duì)象均知情本次研究?jī)?nèi)容，對(duì)比兩組一般資料無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

1.2 方法：取1×107個(gè)PBMC混入Trizol試劑，再行三氯甲烷分層，異丙醇完成沉淀，利用乙醇洗滌干燥后，將RNA溶于無(wú)RNA酶的純水，利用紫外光官渡對(duì)其進(jìn)行定量后合成cDNA及RNA電泳合成。cDNA合成利用Promega公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒完成，操作嚴(yán)格按照相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。PCR反應(yīng)物嚴(yán)格按照同類(lèi)研究引物序列完成，RT-PCT反應(yīng)：25 μL反應(yīng)體積內(nèi)含有5 μL cDNA，外引物對(duì)200 nmol/L，TaqDNA聚合酶1 U，dNTP150 μmol/L，在DNA循環(huán)儀中變性3 min，溫度94 ℃ 0.5 min，55 ℃ 0.5 min，72 ℃ 1 min，完成30次循環(huán)擴(kuò)增，延伸7 min，獲取PCR產(chǎn)物后外引物改變?yōu)閮?nèi)引物，完成第二輪PCR，擴(kuò)增條件與第一輪相似。最終產(chǎn)物在2.0%瓊脂糖凝膠上電泳，于紫外燈照射下對(duì)其DNA條帶及凝膠成像分析儀照相。

1.3 觀察指標(biāo)：MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性率情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)錄入SPSS23.0軟件處理，%表示計(jì)數(shù)資料，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性情況對(duì)比：本次研究的對(duì)照組40例正常人MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)為0例、0例，對(duì)陽(yáng)性表達(dá)率為0.0%、0.0%，患者組40例患者中MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)對(duì)應(yīng)為47.5%、42.5%，對(duì)比可知患者組MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組（χ2=62.295，P=0.001；χ2=53.968，P=0.001）。

2.2 MAGE-A3mRNA與肝癌早期轉(zhuǎn)移相關(guān)性：肝癌早期轉(zhuǎn)移與患者年齡無(wú)相關(guān)性（r=0.867，P=0.069），與MAGE-A3mRNA、MAGEA1mRNA相關(guān)（r=0.812，P=0.001；r=0.632，P=0.001）。

3 討 論

原發(fā)性肝癌為全球常見(jiàn)的惡性腫瘤，我國(guó)惡性腫瘤疾病中其致死率占第二位，目前在肝癌的治療中根治術(shù)切除治療后患者易發(fā)生轉(zhuǎn)移情況，若在微小轉(zhuǎn)移時(shí)及時(shí)發(fā)現(xiàn)并對(duì)癥治療，可有效提高患者5年生存率[3-4]。

本次研究對(duì)MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA與肝癌早期轉(zhuǎn)移進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)肝癌早期轉(zhuǎn)移與MAGE-A3mRNA、MAGEA1mRNA表達(dá)陽(yáng)性率存相關(guān)性（P＜0.05），在對(duì)照組正常人的MAGEA3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性率均為0.0%。相關(guān)研究指出惡性黑色素瘤抗原家族（MAGE）為一類(lèi)腫瘤特異性抗原，MAGE-A基因僅在腫瘤、胎盤(pán)、睪丸內(nèi)表達(dá)，其他組織內(nèi)部不表達(dá)，因而正常人外周血MAGE-A3mRNA、MAGE-A1mRNA表達(dá)陽(yáng)性率為0.0%，因而通過(guò)MAGE-A3mRNA或MAGE-A1mRNA檢測(cè)即可對(duì)肝癌早期轉(zhuǎn)移患者做出準(zhǔn)確判斷[5]。

此外，本次所用巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)方法為近年來(lái)新興MAGE-A基因檢測(cè)方法較以往肝癌組織及癌旁組織檢測(cè)創(chuàng)傷更小，且檢查費(fèi)用更低，有利于減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

綜上所述，MAGE-A3mRNA表達(dá)情況與肝癌早期轉(zhuǎn)移存相關(guān)性，外周血MAGE-A3mRNA檢測(cè)可用于肝癌早期轉(zhuǎn)移的臨床診斷中。