1例豬瘟病毒RT-PCR檢測方法的建立

孟莉

（重慶三峽職業學院 重慶 404001）

1 前言

豬瘟是目前危害養豬產業的一種主要傳染病，也是給我國養豬業帶來嚴重威脅的一種疾病，健康豬在感染了豬瘟病毒（CSFV）后臨床表現多為發熱、食欲減退、精神不振、咳嗽、結膜炎以及圍產期死亡、流產等[1]。

豬瘟的病原體是CSFV，它屬黃病毒科瘟病毒屬，是一種有囊膜的正鏈核糖核酸（RNA）病毒[2，3]。 目前，CSFV診斷研究已深入到分子水平，用RT-PCR方法能快速、準確地檢測出豬瘟病毒。CSFV基因組長約12.5 kb，含有一個開放性閱讀框架（ORF），這個ORF翻譯成含3 898個氨基酸殘基的蛋白。蛋白的順序為 Npro、C、Erns（E0）、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B，其中，C、E0、E1 和 E2 為結構蛋白，其余為非結構蛋白，E0和E2最具有免疫防制研究價值。E2是CSFV的主要免疫原，它與羊邊界病毒（BDV）、牛病毒性腹瀉（BVDV）都存在較強的交叉免疫反應。

2 材料和方法

2.1 豬瘟病料和標準毒株

2.1.1 豬瘟病料

取疑似豬瘟的淋巴結病料13份，病料來自重慶萬州、開縣、梁平、云陽、城口等地豬場。

2.1.2 細胞和豬瘟標準毒株

豬腎細胞（PK-15）系、猴腎上皮細胞（Marc-145）、乳倉鼠腎細胞（BHK-21）（西南大學畜牧獸醫學院動物生物技術重點實驗室）；CSFV標準株（中國獸醫藥品監察所）；豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）疫苗、口蹄疫病毒（FMDV）疫苗、豬細小病毒（PPV）（中牧實業有限公司）；偽狂犬病毒（PRV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、圓環病毒2型（PCV2）（武漢科前動物生物制品有限責任公司）。

2.2 儀器

凝膠成像系統（BIORAD，USA）；PCR 儀（C1000 Touch）；電泳槽（BIORAD，USA）；電泳儀（BIORAD，USA）；冷凍離心機（BIORAD，USA）。

2.3 主要試劑

RNA提取試劑Trizol（上海生工生物工程有限公司）；Ex Taq 酶（5 U/μL）、三磷酸脫氧核糖核苷 dN TP（2.5 mmol/L）、PCR Mix（2.5 mmol/L）、DNA Maker DL2000（分子量分別為 100bp、250bp、500bp、750bp、1 000 bp、2 000 bp）、二乙基焦碳酸酯（DEPC）處理水（大連寶生物工程有限公司）；……