茶葉茶多酚檢測方法研究進展

田玉鳳，鄭美慧，田曉靜

（西北民族大學 生命科學與工程學院，甘肅蘭州 730030）

茶葉是茶樹的芽和葉子，我國很多地方都種植，是一種理想的保健飲品。茶葉中含有豐富的茶多酚、生物堿、氨基酸、茶多糖等活性成分；微量元素（如硒、鉻、鐵、鋅等）在人體的新陳代謝和生長發育中起重要作用，如抗氧化[1-3]、提高綜合免疫力[4]、抑菌[5-6]，抗癌[7-8]、降血脂[9]、抗衰老、抗輻射等作用[10]。現已廣泛應用于食品、化妝品、醫療保健等領域[11]。

茶多酚（Tea Phlyphenols，TP）又名茶鞣質，是一類多羥基類化合物，是茶中酚類化合物的總稱。茶多酚不僅是茶葉中的主要生物活性成分[12]，而且是茶中苦味、澀味和色澤的重要來源，也是評價茶葉品質的重要指標之一[3]。茶多酚的含量對茶葉質量有很大影響，選用合適高效的檢測方法實現茶葉的品質鑒定和分級，將促進其在工業、食品和醫療領域的開發和利用。

1 檢測方法

1.1 光譜分析法

1.1.1 分光光度法

分光光度法（Spectrophotometry）是利用被測物質在特定波長下的吸收度，再根據吸光度與被測物質濃度之間的線性關系進行檢測分析的方法[13]。主要有以下幾種方法。

1.1.2 福林酚比色法

福林酚比色法（Folin-ciocalteucolorimetry，FC）是通過福林酚試劑氧化茶多酚中的-OH而顯藍色進行比色測定的。高海榮等人[14]對比福林酚比色法和重鉻酸鉀分光光度法分析信陽毛尖、鐵觀音、大紅袍及普洱餅茶4種茶葉中茶多酚總量的差異，發現福林酚比色法比重鉻酸鉀分光光度法更為有效。趙春玲等人[15]以沒食子酸乙酯為標準品，建立了一種利用硝酸鋁光度法檢測茶葉中茶多酚含量的有效方法，平均回收率100.7%，RSD為1.07%。鐘育均等人[16]建立了硅鉬藍光度法測定紅茶和綠茶茶多酚的新方法，檢測限為0.000 097 mg/mL，精密度和加標回收率是理想的。福林酚比色法快速、簡單，并且減少人體接觸試劑的機會[17]。

1.1.3 三維熒光光譜法

三維熒光光譜（Three-dimensional Fluorescence Spectrometry，3D-EEM）是利用某些物質分子受熒光照射時，發射具有不同特征和強度的熒光光譜，并在不同的激發波長上進行定性定量分析[18]。張琪瑞[19]利用三維熒光光譜結合熒光體積積分技術，分析鐵觀音和黃山毛峰兩種茶葉中的葉綠素α、茶多酚與黃酮類物質的浸出情況，結果發現在相同浸泡條件下，葉綠素α浸出量接近最大值，茶多酚與黃酮類物質含量適中，浸泡溫度可顯著影響茶多酚的浸出量。

1.1.4 近紅外光譜法

近紅外光譜法（Near Infrared Spectrometry，NIR）利用分子的振動頻譜，直接獲得與分子的內部結構、官能團和分子狀態有關的定量或定性信息[20]。趙雅等人[21]采用近紅外光法結合偏最小二乘法在1 872 nm建立了茶多酚含量預測模型，R2=0.937 8。劉輝軍等人[22]采用近紅外光譜分析技術，結合非線性偏最小二乘法，在不同的光譜區間組合建立了最佳的分析模型，相關系數R2=0.967。馬健[23]采用近紅外光譜進行采樣建模分析，建立偏最小二乘法模型，對信陽毛尖進行含量檢測，預測集的相關系數R2=0.975 5。蘆永軍等人[24]采用近紅外光譜結合定標過程檢測茶多酚中兒茶素含量，其相關系數R2=0.994 7。

1.2 色譜分析法

色譜分析法通常用于分離和測定茶湯中的茶多酚，可用于茶多酚單體的含量檢測。主要有液相色譜法、高效薄層色譜法、質譜法等。

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1.2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是根據物質在不同兩相中的分配系數不同，經洗脫劑從而使混合物中各組分分離出來。采用HPLC法會涉及到樣品的前處理問題，目前常采用溶劑萃取法對樣品進行處理，有純水[25]、甲醇、乙腈[26]、乙醇[27]、乙酸乙酯[28]等。HPLC法可同時測定多組分，可對茶多酚中的各組分測定。王增明等人[29]建立了HPLC法測定茶多酚中表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）和表兒茶素沒食子酸酯（ECG）含量的檢測方法，發現EGCG和ECG的線性范圍和相關系數分別為159.4～797.0 mg/L，R=0.999 6和40.16～120.18 mg/L，R=0.999 7，方法的精密度和重復性良好。郭佳莉等人[30]利用超聲波提取茶多酚，并采用高效液相色譜法分析測定相同產地不同級別茶葉的茶多酚，其線性范圍和相關系數分別為0.6～3.0 mg/L，R=0.999 6～0.999 9，方法的精密度和重復性較好。HPLC可以同時準確測定多組分，但操作要求高、費用較高且費時。

1.2.2 柱色譜法

柱色譜法（Column Chromatography，CC）主要基于樣品在兩相中各組分的分配系數差異，因而在流動相中的遷移速度也不同，以實現組分的分離。袁華等人[31]以粗茶多酚為原料，以硅膠為吸附劑，發現茶多酚中兒茶素含量大于90%，其中酯型兒茶素和表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量超過60%。羅超華等人[32]優化茶多酚中EGCG分離純化工藝路線，發現純品表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量超過90%。朱宇惠等人[33]利用沉淀法去除茶多酚粗品中的雜質，然后采用柱層析法純化精制茶多酚。提出了沉淀-柱層析法新方法，發現該方法對茶多酚的分離測定有一定的實用性和可行性。

1.2.3 高效薄層色譜法

高效薄層色譜法（High-Performance Thin Layer Chromatographic，HPTLC）則能較好地解決高效液相色譜法每次只能進一個樣，待測樣品數量大、耗時較多，檢測費用也高。王麗麗等人[34]以體積比12.5∶7.5∶2.2的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，可較好地分離茶葉中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、兒茶素單體。傅冬和等人[35]用乙醇-丙酮-冰醋酸（5∶5∶3）為層析展開劑在聚酞胺薄膜板上進行層析分離，可有效地分離兒茶素單體，是一種較好的分離測定方法。

1.3 電化學分析法

電化學分析法（Electrochemical Analysis，EA）是基于茶葉中茶多酚的電化學性質及其變化規律，通過電化學參數（如電位、電導、電流）與被測物質濃度間的關系進行定性定量的方法。丁亞平等人[36]結合示位法和電位分析法，根據KBrO3和KBr的歧化反應與茶多酚的溴代反應間的速度不同，提出了檢測分析痕量茶多酚的方法。朱丹等人[37]比較銀電極、碳糊電極和玻碳電極在循環伏安法的基礎上，測定茶多酚含量的有效性，發現玻碳電極具有最佳的重復性和準確性，可用于茶多酚的快速檢測。

1.4 毛細管電泳法

毛細管電泳（Electrophoresis，EC）是利用不同粒子的遷移速度，最終以不同的速度到達檢測器進行檢測，產生按時間分布的電泳圖譜[38]。夏文娟[39]利用250 mmol/LH3BO4，10 mmol/LKH2PO4、0.75 mmol/L SDS和20%乙腈組成的pH值為7.5的電泳介質，電壓、柱溫和波長分別為25 kV，20℃，200 nm，發現標樣中的4種主要茶黃素類單體可在10 min以內快速分離，具有較高檢測靈敏度。馬曉年等人[40]在含有10 mmol/L Na2B4O7、5 mmol/Lβ-環糊精和8%乙腈的運行緩沖溶液中，分離電壓、毛細管柱溫和波長分別為20 kV，25℃和200 nm，兒茶素、表兒茶素、槲皮素、山奈酚和楊梅素的含量可在14 min有效分離和檢測，說明可用于分離測定茶葉中的多種成分。

CE具有高效、快速、簡便等特點，在生命科學、藥物分析和環境科學等領域具有重要的應用前景。但是也存在一些問題，如線性范圍窄、重現性差、分析精確度不高。

2 結語

茶多酚是茶葉中主要的活性成分，具有抗癌、抗腫瘤、抗氧化、抑菌等功效，對人體的健康有重要作用，在測定茶葉中的茶多酚含量時，可根據茶多酚的性質采用多種方法測定分析，從而評價茶葉品質和分級。色譜分析法精確度較和靈敏性高，可進行多組分的檢測；光譜分析法是近幾十年來發展最迅速的分析工具之一，操作相對簡便、檢測快速、測定結果相對準確，也是傳統化學分析方法的替代方法；電化學分析法重復性和準確性好、時間短，可用于快速檢測；毛細管電泳法重復性相對較差、分析精度不高、誤差大。選取高效合理準確的檢測方法，可對茶葉進行品質鑒定和分級，促進其在食品、醫療和工業等領域的應用。