一例調入豬肉非洲豬瘟病毒檢測

毛懷志 張艷紅 康建生

（1，山西省動物疫病預防控制中心 030027；2，山西省畜牧遺傳育種中心 030027）

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度傳染性疾病。該病病程短，死亡率高，對養豬業危害甚大，有著重要的社會經濟學意義，2018 年8 月3 日我國非洲豬瘟疫情在遼寧首發，之后在多個省份相繼發生。特別是2018 年10 月在山西省發生以來，由于對病豬和感染豬的撲殺，加之豬后續生產力不足，大幅度降低了豬肉產品的供應能力，造成豬肉價格持續上漲，人民生活消費上漲，引發一系列社會深層次問題。

為穩定市場供應，保證人民生活，確實做好山西省非洲豬瘟防控工作，山西省農業農村廳、公安廳等多部門積極配合進行非洲豬瘟防控，2019 年9 月山西省市場監督管理局下達2019 年加工流通環節非洲豬瘟病毒檢測任務。山西省食品藥品檢驗所對平遙縣某有限公司外購生豬產品進行了非洲豬瘟抽樣檢測，9 月28 日，在抽檢的兩批共10 份豬肝樣品中均檢出非洲豬瘟疑似陽性。9 月29 日，經山西省動物疫病預防控制中心實驗室檢測確認為非洲豬瘟陽性。

1 材料

1.1 樣品

樣品來源：2019 年9 月19 日，根據山西省市場監督管理局下達2019 年加工流通環節非洲豬瘟病毒檢測任務中，山西省食品藥品檢驗所對平遙縣某有限公司外購生豬產品進行非洲豬瘟抽樣檢測，9 月28 日，在抽檢的兩批共10 份豬肝樣品中均檢出非洲豬瘟疑似陽性。

1.2 儀器設備

寧波新芝48 位高通量組織研磨儀，美國精騏有限公司SY-1220 型恒溫水浴槽，美國 Thermo 公司 Biofugestratos 型臺式高速冷凍離心機，美國ABI 公司700 型24 孔全自動核酸提取儀，QuantStudio 7 實時熒光定量PCR 儀。

1.3 試劑

廣州維伯鑫病毒總核酸提取試劑盒（磁珠法），批號2019032801；洛陽萊普生信息科技有限公司非洲豬瘟病毒實時熒光PCR 檢測試劑盒說明書，批號P190434。

2 檢測方法

2.1 樣品處理

操作步驟：

（1）根據待檢組織數量取n 個已加入1ml 的高壓滅菌PBS（0.01M，pH7.2～7.4）或生理鹽水無菌無 RNase 的 EP 管（n=待檢樣品數量，已加入滅菌鋼珠）。

（2）每份組織分別從3 個不同的位置剪綠豆大小的組織，放入EP 管中密封，并進行標記，表面消毒備用。

（3）每取一個組織塊，用2%～5%次氯酸鈉溶液浸泡消毒剪鑷等取樣器械。

（4）組織樣品的破碎利用組織研磨儀在生物安全柜外操作，使用高通量組織研磨儀進行研磨，參數為70Hz，120s，研磨2 次，將樣品制成組織勻漿懸液。

（5）將研磨完成的組織勻漿置于60℃水浴中，滅活20～30min。

（6）滅活完成后，如果可吸取上清液，則無須進行離心處理；如無法順利吸取上清液，則按照8000rpm 離心2min 進行處理。

2.2 病毒 DNA 提取

采用核酸提取儀進行DNA 提取，具體方法如下：

（1）提取試劑：廣州維伯鑫病毒總核酸提取試劑盒（磁珠法），按試劑盒說明書加入提取試劑至96 孔板相應位置。

（2）按說明書，取待檢樣品，每份待檢樣品 50μl，加入 96孔板相應位置。

（3）以上操作應在二級生物安全柜中進行。

提取結束后將提取好的DNA 與-4℃保存備用。

2.3 熒光定量PCR 擴增

采用ASFV 特異熒光定量PCR 方法進行擴增ASFV VP72基因片段。PCR 體系為 20μl：ASFV qPCR 擴增反應液 17.5μl，模板 DNA 2.5μl。設立陰陽對照。密封反應管，瞬時離心，上機擴增，按照試劑盒熒光PCR 循環條件擴增。

3 結論

9 月29 日經山西省動物疫病預防控制中心實驗室檢測，確認為非洲豬瘟陽性。

4 處置

在樣品檢測結果確認后，省農業農村廳馬上和省市場監督管理局組成聯合督導組趕到平遙縣，現場指導當地開展處置工作。

（1）對兩批陽性生豬產品全部進行無害化處理。

（2）對被污染或可能被污染的冷庫、物品、交通工具、用具、場地進行嚴格徹底消毒。

（3）對平遙縣某有限公司由湖南省調入山西省的生豬產品情況進一步開展全面排查，消除擴散風險。

5 討論

5.1 對養豬業的影響

養豬業是我國歷史悠久、最主要的畜牧業產業，豬肉一直是我國人民的第一大肉食來源，我國也是世界上豬肉生產和消費第一大國[1]。山西省豬養殖業在畜牧業養殖生產中占有重要比重，2018 年10 月山西省發生非洲豬瘟疫情以來，生豬存欄量據不完全統計減少20%。所謂“豬糧安天下”，養豬生產不但為滿足我國人民群眾的消費需求起重要作用，而且在促進農民增收、保障農村勞動力就業和發展農村經濟及推動相關產業等方面具有重要意義。

5.2 對人民生活的影響

豬肉價格已成為食品類甚至是中國物價的標桿[2]。由于生豬供應緊張，豬肉價格上漲，2019 年10 月山西省市場豬肉價格較2018 年底上漲2 倍左右，豬肉價格上漲導致其他畜產品價格也隨之上漲，直接影響人民生活質量水平。

5.3 加強生豬及生豬產品的調運

能從豬肉產品中檢出非洲豬瘟病毒說明ASFV 已形成一定的污染面。為做好山西省非洲豬瘟防控工作，要嚴格落實生豬及其產品指定通道運輸制度，生豬及其產品調入山西省必須經指定通道運輸，并加蓋山西省動物及其產品指定通道專用章。

5.4 持續做好非洲豬瘟防控工作

目前國內ASF 疫情仍呈點狀散發態勢，因豬肉制品調入而傳播ASF 的風險較高，因此，應警惕通過污染病毒的豬肉制品而引發疫情的可能[3]。鑒于目前ASF 防控形勢仍較嚴峻，今后仍需重點排查養殖場、生豬交易市場、屠宰場等高風險場點，同時根據高速公路收費制度變化，及時調整生豬及其產品指定通道設置方案，科學設立監督檢查站。