高效液相色譜法檢測鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍含量

陳曦娟

(新蔡縣食品藥品檢驗所，河南 駐馬店 463500)

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。長期存在的高血糖，會引起各種組織功能障礙，特別是眼、腎、心臟、血管、神經等[1-2]。鹽酸二甲雙胍臨床上常用于單純飲食控制不滿意的Ⅱ型糖尿病，尤其是肥胖和伴高胰島素者，鹽酸二甲雙胍不僅有降低血糖的作用，還可能有減輕體重和高胰島素血癥的效果，具極高的研究價值[3-5]。《中國藥典》(2015年版)規定，鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍含量測定的方法為紫外-可見分光光度法[6]，其靈敏度與準確度與高效液相色譜法相比均有一定差距。本文對鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍含量采用高效液相色譜法測定，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀為美國Waterse2695系統，檢測器為Waters 2998二極管陣列檢測器，電子天平為德國賽多利斯型號CPA225D，超聲波清洗器型號為SK2510HP(上海科導超聲儀器有限公司)，電熱鼓風干燥箱型號為DHG9245A(上海一恒科學儀器有限公司)酸度計型號為FE20(梅特勒-托利多公司)，紫外-可見分光光度計型號為UV2550(日本島津公司)，甲醇為色譜純(DiKMAPURE)，磷酸二氫鈉為分析純(天津市恒興化學試劑制造有限公司)，磷酸為分析純(洛陽昊華化學試劑有限公司)，水為超純水。鹽酸二甲雙胍對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100664-201604)；鹽酸二甲雙胍片(上海上藥信誼藥廠有限公司，規格；250 mg×48片/盒，批號：48161104、48170424、48170506)。

1.2 方法

1.2.1 設置色譜分析條件

應用SYMMETRY C18液相色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調pH至3.5)-甲醇(85:15),檢測波長為233 nm，流速為1.0 mL/min；柱溫30 ℃；進樣量20 μL。按二甲雙胍峰對理論塔板數正確計算，需在2 000及以上。

1.2.2 檢測溶液制備

(1)對照品溶液制備：精密稱取在105 ℃干燥 2 h后置干燥器中放冷的鹽酸二甲雙胍約100 mg，置于100 mL的容量瓶中，加水20 mL，超聲震蕩5 min，使藥物充分溶解，加水稀釋至刻度，充分搖允，制成每毫升中含對照品1 mg的對照品溶液，備用；(2)供試品溶液制備：分別取鹽酸二甲雙胍片20片，精密稱定，分別研細，精密稱取適量(約相當于鹽酸二甲雙胍100 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入水30 mL，超聲震蕩5 min，使藥物充分溶解，用水稀釋至刻度，充分搖勻。過濾，棄去初濾液20 mL，取續濾液，精密吸取續濾液1 mL，置于50 mL的容量瓶中，用水稀釋至刻度，充分搖允，即得供試品溶液，備用。

1.2.3 測定方法

吸取對照品、供試品溶液各20 μL進行分析，依據色譜峰面積，應用外標法對樣品含量進行計算。

2 結 果

2.1 標準曲線

精密吸取待測鹽酸二甲雙胍對照品溶液1 mL，置于50 mL的容量瓶中，用水稀釋定容制成濃度為20 μg/mL的標準貯備液(1)；精密吸取待測鹽酸二甲雙胍對照品溶液5 mL，置于50 mL的容量瓶中，用水稀釋定容制成濃度為100 μg/mL的標準貯備液(2)。分別精密吸取標準貯備液(1)1.0，2.0，5.0 ,8.0，10.0 mL，置于10 mL容量瓶中；分別精密吸取標準貯備液(2)1.0，2.0，5.0 ,8.0，10.0 mL，置于10 mL容量瓶中；用水緩慢稀釋至相應刻度，按照“1.2.1”的色譜條件進樣，以峰面積(Y)作為縱坐標，以濃度(X)作為橫坐標，進行回歸分析。可得回歸方程為：Y=70 876X+1 468.6(r=0.999 8)；結果表明鹽酸二甲雙胍線性范圍2.75～89.66 μg/mL。

2.2 精密度試驗

精密吸取“2.1”項下的標準儲備液(1)，準確進樣20 μL，連續進樣6次，測定峰面積，鹽酸二甲雙胍的RSD為0.3%，色譜圖見圖1。

圖1鹽酸二甲雙胍對照品的HPLC色譜圖

2.3 重復性實驗

取批號為48161104的樣品，按照“1.2.2”中方法制備供試品6份，按照“1.2.1”色譜條件準確進樣20 μL，根據樣品的色譜圖峰面積計算相對標準偏差RSD為0.9%。顯示本組方法具有良好的重復性。

2.4 穩定性實驗

分別在0、2、4、8、12、24、48 h取批號為48161104的樣品制成的供試品溶液和“2.1”中制成的標準儲備液(1)；進樣20 μL，根據所得的色譜圖的峰面積計算RSD，結果表明：標準儲備液(1)的RSD值為0.7%；供試品組的RSD值為0.9%。對照品溶液和供試品溶液在48 h內穩定。

2.5 加樣回收率實驗

精密稱取鹽酸二甲雙胍對照品2.21、3.57、5.23、6.76、8.04、10.07 mg加入批號為48161104的樣品制成的供試品溶液(配制方法參照1.2.2步驟，濃度約為20 μg/mL)，根據“1.2.1”中的色譜條件進樣，根據峰面積進行計算，可得回收率分別為100.5%、100.3%、99.8%、100.1%、99.9%、100.1%。平均回收率為100.1%，RSD為0.26%。符合藥典規定。結果見表1。

表1 回收率實驗結果

2.6 含量測定

根據“1.2.1、1.2.2”項下步驟進行操作分別測定3批鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍含量；并按照《中國藥典》(2015年版)規定，用紫外-可見分光光度法測定該3批鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍的含量。將二者結果進行比較，檢測結果見表2。

表2 鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍標示量百分含量測定結果(%)

3 討 論

目前，《中國藥典》(2015年版)只有在鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的含量測定中采用高效液相法，其他鹽酸二甲雙胍制劑含量測定采用滴定法、紫外-可見分光光度法進行測定[6]。本文中所采用的色譜條件，流動相簡單，精密度好、穩定性高，重現性好。對二甲雙胍的測定與《中國藥典》(2015年版)比較結果準確度高，精密度好，重復性和相關性都符合相關規定。高效液相色譜法所測定的結果更能體現藥物的真實含量。建議用此種方法來測定鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍的含量。