血清β-D葡聚糖、半乳甘露聚糖、Cand-Tec抗原檢測在侵襲性真菌病診斷中的應用價值

張 建

內蒙古自治區巴彥淖爾市醫院檢驗科(巴彥淖爾015000)

侵襲性真菌病(Invasive fungal disease, IFD)是指真菌侵入機體的組織、血液后生長、增殖，造成組織損害、器官功能障礙以及各種炎癥反應等病理改變和和病理過程。如果感染發生在深層組織患者臨床并不會表現出明顯的特異性，這就在很大程度上耽擱診治的時間，增加治療的難度，對患者生命安全造成嚴重的威脅[1]。近年來，隨著研究的深入發現，發生IFD的患者普遍存在免疫力低下，基礎疾病嚴重，合并有其他病原微生物感染，使用傳統方法診治具有難度，患者預后不良、病死率高[2]。由此可見，尋求特異性診斷手段成為改善患者預后的關鍵，傳統的組織病理學或無菌腔道液體培養真菌陽性檢出率低、耗時長，對準確診造成困擾[3]。本研究中分析了血清β-D葡聚糖(βDG)、半乳甘露聚糖(GM)抗原、Cand-Tec抗原聯合診斷IFD的應用價值，旨在為提高臨床診斷準確率提供依據。

資料與方法

1 一般資料 將我院2017年8月至2018年7月期間收治的疑似侵襲性真菌病住院患者136例作為研究對象，根據相關診斷標準確定是否發生侵襲性真菌病分為感染組82例和未感染組54例，感染組男50例，女32例，平均年齡(53.75±6.84)歲；非感染組男32例，女22例，平均年齡(54.13±6.91歲)。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：所有患者臨床表現為體溫超過37.5℃，使用廣譜抗生素初步治療5 d以上癥狀未改善，生化檢查中性粒細胞持續性減少超過8 d以上，經影像學檢查出現肺部感染或其他新發病灶。

2 研究方法 血清βDG：使用北京金山川科技發展公司生產的GK T25M Set動態真菌檢測試劑盒進行診斷，首先使用真空采血管采集患者4 ml靜脈血，使用3000 r/min的離心機離心5 min獲得上層血清，吸取0.1 ml加入至0.9 ml樣品處理液中，充分混勻后70℃孵育10 min，然后立即置于冰水混合物中5 min，吸取0.2 ml上述待檢血清樣品加入酶反應主劑中，然后轉移到玻璃反應管，插入MB-80微生物快速動態檢測系統進行反應，在90 min后獲得血清中βDG的水平。

GM抗原：使用法國Marnes-la-Coquette公司生產的Platelia曲霉診斷試劑盒進行檢測，操作步驟嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行，最后在450 nm波長的酶標儀上進行讀數，獲得GM抗原的檢測數值；

Cand-Tec抗原：使用美國Ramco Laboratories公司生產的Cand-Tec念珠菌檢測試劑進行檢測具體操作方法按照說明書進行。

3 統計學方法 使用SPSS19.0對獲得的數據完成統計學分析處理，計算各種檢測項目的靈敏度、特異度和符合度。以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 三項指標單獨診斷和聯合診斷能力比較 感染組患者βDG陽性檢出率為52.44%，GM陽性檢出率為69.51%，Cand-Tec陽性檢出率為80.49%，三者聯合檢出率為91.46，組間比較差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2 三項指標診斷能力分析 以βDG水平為20 pg/ml作為臨界值時檢測靈敏度為52.44%，特異度為86.59%，符合度為70.73%；GM以0.5作為臨界值時靈敏度為69.51%，特異度為79.27%，符合度為75.61%；Cand-Tec檢測靈敏度為80.49%，特異度為95.12%，符合度為85.37%，三者聯合檢測時靈敏度、特異度和符合度分別為95.12%，98.78%、92.68%，均明顯高于三項指標單獨檢測值，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 三項指標單獨診斷和聯合診斷能力比較[例(%)]

表2 三項指標診斷能力分析[例(%)]

討 論

βDG檢測的是真菌的組成部分細胞壁上的主要成分(1-3)-β-5-葡聚糖，在人體感染真菌后會經過一系列免疫反應，βDG從真菌細胞壁中釋放出來，量少的話會被機體清除。這種試驗能夠檢測念珠菌屬、曲霉屬等多種真菌引起的侵襲性感染的診斷，但是并不能有效的進行菌種的鑒別診斷，在患者使用纖維素膜進行血液透析治療、靜脈輸注過免疫球蛋白、凝血因子或其他血制品、原發鏈球菌血癥和在處理標本時存在外界感染的狀態下容易出現假陽性[4]。本研究結果顯示，單獨使用βDG檢測的靈敏度為52.44%，特異度為86.59%，符合度為70.73%。

GM試驗檢測的物質是半乳甘露聚糖，用于侵襲性真菌感染的早期診斷，臨床上進行造血干細胞的患者具有較高的診斷敏感性。該檢測的主要原理是由于曲霉菌所特有的細胞壁多糖成分為β(1-5)呋喃半乳糖殘基，在菌絲生長過程中該物質會從菌絲的最頂端釋放出來，GM的含量和侵襲的真菌量呈正相關，因此，可反應出感染的嚴重程度[5-6]。但是如果患者使用過半合成的青霉素類抗生素藥物、患兒為新生兒或兒童、合并自身免疫性肝炎等情況下容易出現假陽性[7]。但是曲霉菌將GM釋放入血液循環中后并不會持續存在，在一段時間內很快被機體徹底清除掉，或者患者在檢測之前使用了抗真菌藥物、病情不嚴重等情況時極易出現假陰性的現象[8-9]。在進行臨床經驗回顧和總結時發現，有些醫生對于IFD的高危人群或疑似患者未經確診就給予廣譜抗真菌藥物控制病情的進展，這種操作在一定程度上會降低IFD的發生率，但是會嚴重影響非培養的檢測結果[10]。目前我國制定的IFD診治指南中已經將連續兩次GM診斷陽性作為真菌感染的標準，但是在實際治療過程中早期使用藥物進行經驗性治療的過程中會對血清GM的水平產生影響，水平降低后會出現假陰性，因此這個指南中的部分內容需要進一步完善[11-12]。本研究結果顯示，單獨檢測GM時的靈敏度為69.51%，特異度為79.27%，符合度為75.61%。

Cand-Tec抗原是念珠菌的結構蛋白抗原，對熱不穩定，含有細胞壁甘露聚糖和胞壁抗原的成分，有學者從89例患者體內采集的130份標本使用Cand-Tec抗原和βDG抗原檢測的結果進行比較發現，靈敏度和特異性相對較低[13]；十年前德國學者研究提出，使用乳膠凝集試驗檢測Cand-Tec抗原、間接血紅素凝集試驗檢測抗體的截斷值為1：16、1：640，診斷的靈敏度和特異度都不高，但是兩者聯合診斷的靈敏度高達100.00%[14]。本研究結果顯示，Cand-Tec檢測靈敏度為80.49%，特異度為95.12%，符合度為85.37%，該結果明顯高于文獻報道[15]，主要可能是由于經過長達十余年的時間中，診斷技術和設備都發生了出現了明顯的進步，而且Cand-Tec抗原檢測對特殊念珠菌的診斷具有特殊的意義。

βDG和GM抗原檢測對象不是同一種物質，物質分泌過程和代謝水平之間存在差異，二者并不能相互取代。研究結果顯示，三個項目檢測聯合后靈敏度、特異度和符合度分別為95.12%，98.78%、92.68%，均明顯高于三項指標單獨檢測值，說明單獨一項指標進行檢測時會影響結果的準確度，而血清βDG、GM抗原和Cand-Tec抗原聯合后會提高IFD診斷敏感性。

綜上所述，血清βDG、GM抗原和Cand-Tec抗原聯合應用能夠提高IFD診斷的敏感度、特異度和符合度，均高于單獨選擇某種試驗，在實際工作中建議三者聯合使用，同時可結合其他檢測方法和技術進行綜合診斷進一步提高診斷的準確率。