免疫組化標(biāo)志物Her-2和腫瘤標(biāo)志物在胃癌診斷中的價值分析*

侯潔心 ，郭 萍

1.陜西省友誼醫(yī)院病理科(西安710068)，2.陜西省友誼醫(yī)院消化內(nèi)科(西安710068)

胃癌是腫瘤科常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率及病死率在全球范圍內(nèi)僅次于肺癌，但在我國卻位居首位。臨床通常采用胃鏡組織活檢進(jìn)行胃癌的確診，但該方式技術(shù)要求高、患者耐受低、診斷費(fèi)用高，且容易造成早期胃癌漏診[1]。在人體中血清腫瘤標(biāo)志物早于臨床癥狀表達(dá)，因此可作為腫瘤早期診斷的重要指標(biāo)，但目前并未發(fā)現(xiàn)診斷效率高的單項(xiàng)標(biāo)志物[2-3]。此外，免疫組化標(biāo)志物也是惡性腫瘤早期診斷、治療及預(yù)后判斷的重要標(biāo)志[4]。人類表皮生長因子受體2(HER-2/neu)是機(jī)體內(nèi)的原癌基因，與多種腫瘤發(fā)生和預(yù)后均具有相關(guān)性，其陽性表達(dá)在胃癌、肺癌和結(jié)直腸癌等均有存在[5-6]。本研究就免疫組化標(biāo)志物Her-2與腫瘤標(biāo)志物糖類抗原199(CA199)、CA242、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)聯(lián)合檢測對早期胃癌診斷的臨床效果進(jìn)行了觀察分析。

資料與方法

1 一般資料 選擇2014年6月至2018年1月陜西省友誼醫(yī)院接收的胃鏡檢出患者78例作為研究對象，其中男41例、女37例；年齡29～75歲，平均(55.62±12.58)歲；病變類型：腺癌69例(高度分化9例、中度37例、低分化18例、未分化5例)、印戒細(xì)胞癌9例。納入排除標(biāo)準(zhǔn)：受試者均經(jīng)胃鏡檢查證實(shí)，且對本研究內(nèi)容詳細(xì)知曉；排除伴發(fā)血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等對腫瘤相關(guān)標(biāo)志物測定產(chǎn)生干擾的相關(guān)疾病者。

2 研究方法 患者胃黏膜標(biāo)本均由胃鏡取材，3.7%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片厚度4 μm，烤片、脫蠟，免疫組織化學(xué)染色，Envision二步法測定兩組患者胃黏膜Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA表達(dá)狀況，其中一抗包括鼠抗人單克隆抗體Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA顯色試劑盒(試劑盒及抗體均購自于上海滬震生物科技有限公司)。采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為判定結(jié)果的陰性對照組，胃癌Her-2表達(dá)陽性片則作為陽性對照。所有染色結(jié)果均由病理科2名經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師以雙盲原則進(jìn)行評定。胃黏膜活檢標(biāo)本Her-2表達(dá)判讀標(biāo)準(zhǔn)如表1；CA199、CA242、AFP、CEA判讀標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃至黃褐色顆粒狀著色則為陽性，綜合陽性細(xì)胞占比及著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量處理，即細(xì)胞未著色或著色細(xì)胞數(shù)目占總細(xì)胞數(shù)目比<10%為(—)；著色細(xì)胞占比10%～25%為(+)；著色細(xì)胞占比26%～50%為(++)；著色細(xì)胞占比>51%為(+++)，陽性即+～+++。每張切片選擇5個高倍視野進(jìn)行免疫組化結(jié)果判讀。

表1 胃黏膜Her-2免疫組化染色判讀標(biāo)準(zhǔn)

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理數(shù)據(jù)。各類計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)因子為α=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 兩組5項(xiàng)標(biāo)志物免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 見表2。免疫組化分析結(jié)果顯示，胃癌患者胃黏膜組織中腫瘤標(biāo)志物CEA表達(dá)陽性率最高，其次為CA199、CA242。而免疫組化Her-2及腫瘤標(biāo)志物AFP表達(dá)陽性率均相對較低，與腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199、CA242表達(dá)陽性率比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199、CA242表達(dá)陽性率間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 兩組5項(xiàng)標(biāo)志物免疫組織化學(xué)染色結(jié)果[例(%)]

注：與CA199比，*P<0.05；與CA242比，#P<0.05；與CEA比，▲P<0.05

2 胃癌免疫組化標(biāo)志物Her-2和腫瘤標(biāo)志物陽性率比較 見表3。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤細(xì)胞分化程度降低，胃癌免疫組化Her-2和腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242、AFP、CEA檢測陽性率呈明顯升高趨勢(P<0.05)。免疫組化Her-2和腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242、AFP、CEA在腺癌患者中檢測陽性率與印戒細(xì)胞癌間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 免疫組化標(biāo)志物Her-2和腫瘤標(biāo)志物對胃癌的診斷評價 見表4。單項(xiàng)免疫組化標(biāo)志物Her-2及腫瘤標(biāo)志物AFP靈敏度均明顯低于腫瘤標(biāo)物CA199、CA242、CEA(χ2=46.968～67.089，P<0.05)。但Her-2與AFP對胃癌診斷靈敏度間及CA199、CA242、CEA三者在胃癌診斷中的靈敏度間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與單獨(dú)Her-2檢測相比，Her-2+CA242、Her-2+CA199、Her-2+CEA聯(lián)合檢測靈敏度明顯均明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.026、4.210、4.286，P<0.05)。

表3 胃癌免疫組化標(biāo)志物Her-2和腫瘤標(biāo)志物陽性率比較[例(%)]

注：不同分化程度間比較，*P<0.05

表4 免疫組化標(biāo)志物Her-2和腫瘤標(biāo)志物診斷胃癌的靈敏度(%)

討 論

Her-2/neu基因是一種細(xì)胞原癌基因，主要定位于細(xì)胞膜，少量可在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，在細(xì)胞正常分裂及生長中扮演一定角色。Her-2/neu在胚胎發(fā)育時即開始表達(dá)，正常成年人組織中其表達(dá)強(qiáng)度弱。病理狀態(tài)下，Her-2過表達(dá)具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，同時了促進(jìn)腫瘤心血管再生、增加腫瘤細(xì)胞侵襲力等功效[7]。研究顯示，在腺癌中，常見到Her-2基因擴(kuò)增、RNA和蛋白質(zhì)過表達(dá)，而在非癌組織中卻未檢測到，提示其在胃癌發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移方面具有重要作用[8-9]。通常對Her-2基因表達(dá)水平測定癌癥原發(fā)病灶手術(shù)標(biāo)本為準(zhǔn)，但對于早期診斷患者無此標(biāo)本，如何形成檢測Her-2陽性表達(dá)成為癌癥患者早期診斷的難題。李惠等對胃癌活檢標(biāo)本及手術(shù)標(biāo)本中Her-2表達(dá)水平進(jìn)行免疫組化及原位雜交擴(kuò)增發(fā)現(xiàn)，胃鏡活檢標(biāo)本Her-2狀態(tài)評估可作為胃癌手術(shù)大標(biāo)本的替代品[10]。因此本研究中所選標(biāo)本為胃經(jīng)活檢標(biāo)本。CEA是一類具有人體胚胎抗原特異度的酸性糖蛋白類物質(zhì)，在各類腫瘤疾病診斷中得到廣泛應(yīng)用[11-12]。CA199是一類對消化道腫瘤具有高度特異性的抗原物質(zhì)。報(bào)道顯示，其與腫瘤大小、浸潤程度及淋巴轉(zhuǎn)移狀況等具有相關(guān)性，可作為消化道腫瘤診斷及預(yù)后判斷的可靠指標(biāo)[13]，但其敏感度不如CEA，該結(jié)果與本研究相一致[14]；CA242為酸化的黏蛋白，主要存在于胚胎組織，正常人群和良性組織病變患者血清表達(dá)量低，但惡性消化道腫瘤病變部位含量明顯增加，因此可作為惡性腫瘤診斷的指標(biāo)之一[15]。汪桂霞報(bào)道顯示，CA242胃癌診斷敏感性僅28.53%，而其與CA242、CA199和CEA聯(lián)合檢測，敏感性達(dá)86.78%[16]。AFP是一類癌胚糖蛋白，是一個肝細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)志物，但某些情況下，其在良性肝病變患者中也有異常表達(dá)，且一些病理學(xué)和免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其對惡性腫瘤的意義不僅在于對干細(xì)胞癌的診斷，部分胃腺癌患者可分泌AFP，尤其是男性胃竇部位。

本研究中，入選者胃黏膜組織中Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA均出現(xiàn)陽性表達(dá)，尤其是腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242、CEA表達(dá)陽性率明顯高于免疫組化標(biāo)志物Her-2及腫瘤標(biāo)志物AFP。說明胃黏膜組織中免疫組化標(biāo)志物Her-2和腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242、AFP、CEA的異常升高可能預(yù)示初期癌發(fā)生或組織癌前病變發(fā)生，其可作為胃癌早期診斷的輔助指標(biāo)。胃癌組織分化程度低或未分化者胃鏡標(biāo)本中Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA表達(dá)檢測陽性率均明顯高于分化程度中高分化者。提示上述免疫組化標(biāo)志物和腫瘤標(biāo)志物陽性表達(dá)與胃癌病理分化程度具有高度相關(guān)性。上述5項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)檢測敏感度均較低，尤其是Her-2靈敏度才達(dá)到15.38%，但其分別U與CA199、CA242、CEA聯(lián)合檢測時靈敏度均明顯提高，使得三項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物靈敏度均在83 %以上。提示，使用免疫組化與腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可提高胃癌早期診斷的靈敏度。

綜上所述，胃鏡活檢組織中Her-2的免疫組化分析及腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242、AFP、CEA在胃癌的普查、診斷及腫瘤細(xì)胞分化程度等方面占有重要位置，但各項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)檢測靈敏度較低，其Her-2與腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可顯著提高其靈敏度。