胃癌組織中半乳糖凝集素1及趨化因子受體4的表達及其臨床意義

吳曉清 尤小蘭 汪正 唐小麗 張琪 金芝祥 王道榮（通訊作者）

（1揚州大學臨床醫學院(揚州大學附屬蘇北醫院)胃腸外科 江蘇 揚州 225001）

（2揚州大學-揚州市普通外科研究所 江蘇 揚州 225001）

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一。近年來，盡管胃癌的診斷和治療已經取得了一定的進展，但是進展期胃癌患者的五年生存率仍不足40%[1]。本實驗就Gal-1和CXCR4在胃癌中的表達進行探索研究，并分析其表達與胃癌患者術后OS之間的關系，旨在為胃癌的靶向治療提供可供參考的新靶點。

1.材料與方法

1.1 臨床資料

收集2013年1月—6月在江蘇省蘇北人民醫院胃腸外科行胃癌根治術的的胃癌患者的標本及臨床資料，共75例患者納入本研究，所有病例術前未行放、化療及其他抗腫瘤治療，臨床隨訪資料完整。本組病例中男性52例，女性23例，年齡60.07±8.91（37～77）歲。

兔抗人galectin-1、CXCR4抗體、兔抗鼠二抗（美國Santa Cruz公司）；DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司；PBS液、檸檬酸修復液、枸櫞酸鹽緩沖液、0.1%HCl、4%甲醛溶液、酒精、二甲苯、丙酮酸、樹膠等由江蘇省蘇北人民醫院實驗中心提供。

1.2 免疫組織化學染色法檢測胃癌組織的Gal-1和CXCR4的表達

所有標本均經蘇木-伊紅（HE）染色證實為胃腺癌，胃癌組織蠟塊4μm切片，置于二甲苯、梯度酒精水化，過氧化氫浸泡去除內源性過氧化氫酶，檸檬酸修復抗原，血清封閉液封閉，一抗4℃孵育過夜，二抗室溫孵育2h，DAB顯色5min，蘇木素復染，依次梯度酒精、二甲苯脫水，中性樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 染色結果的判定

在雙盲情況下，由兩位主治醫生職稱以上病理醫生獨立評分。評分標準如下：計算陽性表達的細胞在全部胃癌細胞所占的比例計分： 0分（0%～5%）， 1分（6%～25%）， 2分（26%～50%）， 3分（51%～75%）， 4分（＞75%）；按照著色強度計分：0分（陰性），1分（弱陽性），2分（中等陽性），3分（強陽性），最終評分為兩者乘積（0～12分）。

1.4 隨訪

術后3月開始隨訪登記，采用電話、信件、門診復查、建立微信群等方式進行隨訪。定期進行胸腹部CT、胃鏡或全身PET-CT、血尿糞三大常規、血生化、腫瘤標記物等檢查了解腫瘤有無局部復發或遠處轉移。隨訪截止時間為2018年10月31日。

1.5 統計學分析

應用SPSS24.0統計軟件處理數據。計數資料比較采用χ2檢驗，計量資料用均數±標準差表示，均數的比較采用獨立樣本t檢驗，采用Kaplan-Meier法進行生存分析，Log-rank法比較兩組的生存率。P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 Gal-1、CXCR4蛋白在胃癌組織中表達情況

應用IHC檢測了75例蠟塊包埋的原發性胃癌組織中Gal-1及CXCR4蛋白的表達情況，結果示Gal-1蛋白的免疫組化積分是7.05±2.65（1～12），CXCR4蛋白的IHC積分是6.41±2.24（2～12）。對免疫組化積分結果進行ROC檢驗，結果示Gal-1蛋白及CXSR4蛋白的cut-off值均為5。按照這個標準，75例患者中有59例（78.7%）Gal-1陽性表達，16例（21.3%）患者Gal-1陰性表達； 21例（28%）患者CXCR4蛋白陽性表達，54例（72%）陰性表達。

2.2 胃癌組織中Gal-1蛋白與CXCR4蛋白表達相關性分析

Pearson相關性分析顯示原發性胃癌組織中Gal-1蛋白和CXCR4蛋白的表達呈正相關（r=0.912，P＜0.05）。所有CXCR4蛋白陽性表達組織中Gal-1蛋白表達均為陽性。

2.3 胃癌組織中Gal-1、CXCR4蛋白的表達與患者的預后分析

所有患者均得到有效隨訪，中位隨訪時間為術后41（5～70）個月。其中47例患者發生胃癌相關性死亡，5年生存率37.33（28/75）。根據Gal-1表達情況，將患者分為Gal-1陽性組（n=59）和Gal-1陰性組（n=16）。Kaplan-Meier分析結果顯示，Gal-1陽性組患者的總生存期（OS）為42.63±2.758個月；Gal-1陰性組患者的OS為57.94±4.11個月；兩組之間差異有統計學意義（χ2=4.24，P＜0.05）。同樣，根據CXCR4蛋白檢測結果將患者分為CXCR4陽性組（n=54）和CXCR4陰性組（n=21）。CXCR4陽性組患者的OS為41.17±2.86個月；CXCR4陰性組患者的OS為57.68±3.57個月；兩組之間差異有統計學意義（χ2=6.57，P＜0.05）。

此外，聯合分析 Gal-1、CXCR4對胃癌患者預后的影響，將胃癌患者分為三組，其中Gal-1、CXCR4均為陰性組患者（n=16）的OS時間為57.94±4.11個月；Gal-1陽性、CXCR4陰性組患者（n=5）的OS為：55.60±6.94個月；Gal-1、CXCR4均為陽性組患者（n=54）的OS為：41.17±2.86；三組之間差異有統計學意義（χ2=6.57，P＜0.05）。

3.討論

Gal-1是由LGALS1基因編碼的含有135個氨基酸的蛋白質，在多種腫瘤細胞中都有表達[2]，參與多種腫瘤進程[3-4]。然而關于Gal-1與胃癌的預后目前罕見報道。在本研究中，我們通過免疫組織化學染色法檢查了75例胃腺癌組織樣本中的Gal-1和CXCR4蛋白表達情況。78.67%的患者Gal-1蛋白表達呈陽性，Kaplan-Meier生存分析證實Gal-1在胃癌中具有顯著的預后價值。Gal-1陽性患者的生存率顯著低于Gal-1陰性的患者。因此，檢測胃癌組織中Gal-1的表達可能有助于判斷胃癌患者的預后。

CXCR4與趨化因子12（CXCL12）結合參與體內多種生理機制，對于多種腫瘤的發展和轉移起重要作用。我們發現CXCR4蛋白的表達隨著Gal-1的過表達而增加，并且與胃癌患者不良的生存率顯著相關。

已有研究發現在腎癌細胞中Gal-1可以介導CXCR4的表達影響腎癌患者的預后，但是在胃癌細胞中Gal-1與CXCR4蛋白表達的相關性目前未見報道。CXCR4蛋白影響胃癌患者預后的機制尚不完全清楚，我們的實驗顯示CXCR4蛋白與胃癌組織中Gal-1的表達顯著相關。Gal-1和CXCR4蛋白與患者的預后具有一致性，這提示其中存在相應的聯系。我們的結果顯示Gal-1和CXCR4蛋白的過表達尤其是兩者同時存在與胃癌患者的不良生存率顯著相關。因此我們預測Gal-1和CXCR4蛋白的陽性表達提示胃癌的不良預后，Gal-1和CXCR4蛋白有望成為胃癌新的預后標志物。