微生物標(biāo)本培養(yǎng)前行涂片革蘭染色鏡檢的臨床價值探討

章瑀穎

（涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院檢驗科 四川 西昌 615000）

目前，隨著細(xì)菌耐藥性的不斷升高，同時國家進(jìn)一步深入開展整治抗菌藥物，微生物檢測在發(fā)揮著重要作用，臨床上對微生物檢測結(jié)果的依賴性日益增加。對于感染性疾病，微生物培養(yǎng)、檢驗及藥物敏感性的結(jié)果日益成為指導(dǎo)疾病診斷和治療的重要依據(jù)之一。檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性直接關(guān)系到醫(yī)生的用藥是否有效，影響著患者的治療效果和健康水平[1-2]。然而有何及時有效篩除不合格樣本，發(fā)現(xiàn)標(biāo)本留取過程中污染情況十分重要，可有效降低標(biāo)本培養(yǎng)誤差及減少資源浪費。故本研究旨在探討微生物標(biāo)本培養(yǎng)前開展涂片革蘭染色鏡檢的意義，為臨床檢驗工作提供一定的參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年3月—2018年3月期間在涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院門診和病區(qū)進(jìn)行采集并送至檢驗科進(jìn)行微生物培養(yǎng)的微生物標(biāo)本200例納入研究，本研究中所有樣本均為采樣人員嚴(yán)格遵循無菌操作進(jìn)行。其中，110例為通過自然咳痰法收集的痰液標(biāo)本；40例為通過采集患者的尿液獲得的尿液標(biāo)本；分泌物標(biāo)本30例；其他標(biāo)本共計20例。其中，實驗組在培養(yǎng)前進(jìn)行革蘭染色鏡檢，對照組直接給予微生物標(biāo)本培養(yǎng)。兩組標(biāo)本的類型、數(shù)量等資料比較，差異均不顯著（P＞0.05）。

1.2 方法

涂片革蘭染色鏡檢：用無菌棉簽取痰液、分泌物以及膿液標(biāo)本中膿性、血性或黏性的部位；尿液等則取新鮮中段尿樣本置于無菌離心管，低速（1500r/min）離心10～15min，取沉淀待用。取一塊潔凈的載玻片，于中央滴一滴0.9% NaCl的溶液，用無菌棉簽蘸取適量樣本，用無菌針混合均勻后自然晾干。風(fēng)干標(biāo)本，然后置于酒精燈上加熱干燥，之后采取革蘭染色、鏡檢[1]。

標(biāo)本培養(yǎng)與鑒定：在無菌的環(huán)境中，將痰液標(biāo)本接種在血平板、巧克力板等無菌培養(yǎng)基中，分泌物、尿液等標(biāo)本則接種至血平板、麥康凱平板上，接種完成后置于33～37℃、5.0% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24~48 h后觀察菌落、優(yōu)先致病菌等，隨后挑取菌落給予涂片、革蘭染色以及鏡檢操作，用ATB微生物儀器進(jìn)行鑒定。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

合格標(biāo)本及污染標(biāo)本的評定如下：

合格標(biāo)準(zhǔn)：痰液標(biāo)本其外觀呈膿性、血陽性及粘稠性，在低倍鏡下觀察白細(xì)胞不少于25個、鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)量不大于10個的標(biāo)本定義為合格。對于某些標(biāo)本，雖然白細(xì)胞數(shù)量小于25，但在低倍鏡下觀察到明顯的致病菌形態(tài)或明顯致病菌染色形態(tài)，實驗人員需立即進(jìn)行記錄培養(yǎng)并回報上述實驗結(jié)果[2]。

尿液標(biāo)本需在油鏡下觀察，通常需要觀察10個油鏡視野然后計算平均值。若平均每個高倍鏡視野下出現(xiàn)1個以上的細(xì)菌，則表明具有較大感染的可能性，建議重新留取標(biāo)本送檢。同時顯微鏡下觀察細(xì)菌的種類，若細(xì)菌的種類數(shù)大于3，則可能出現(xiàn)標(biāo)本被污染的情況，需實驗人員重新留樣觀察[3]。

分泌物標(biāo)本：無菌環(huán)境中采集標(biāo)本，如果出現(xiàn)較多的鱗狀上皮細(xì)胞，則提示標(biāo)本采集過程出現(xiàn)污染的可能性，或者鏡檢時觀察到2～3種細(xì)菌，也表明標(biāo)本存在被污染的可能性[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

選用軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。陽性率以%表示，采用2檢驗分析，以P＜0.05為差異對比有顯著性。

2.結(jié)果

實驗組培養(yǎng)前涂片革蘭染色，其中有11例標(biāo)本為不合格標(biāo)本，培養(yǎng)結(jié)果顯示陽性57例，陽性率為28.5%，而對照組未進(jìn)行涂片革蘭染色，直接進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果陽性67例，陽性檢出率為33.5%，以上差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.12，P＜0.05）。

3.討論

目前在微生物標(biāo)本檢測過程中進(jìn)行革蘭染色，隨后通過顯微鏡對微生物標(biāo)本進(jìn)行觀察，通過形態(tài)、染色特征等鏡檢結(jié)果可確定標(biāo)本中是否含致病菌，對于臨床鑒別、確定致病菌具有一定的意義。醫(yī)院人流量大且細(xì)菌較多，樣本留取過程中可能會出現(xiàn)樣本污染的情況，若未及時排除則可能出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。對于微生物標(biāo)本培養(yǎng)前涂片革蘭染色鏡檢，可及時發(fā)現(xiàn)標(biāo)本中的異常情況，尤其提前篩除不合格的樣本，提高微生物標(biāo)本培養(yǎng)的質(zhì)量，降低患者的經(jīng)濟(jì)損失及有效減少醫(yī)療資源的浪費[5]。

在本研究中，實驗組陽性57例，陽性率為28.5%，對照組陽性67例，陽性檢出率為33.5%，以上差異對比有顯著性（P＜0.05）。微生物標(biāo)本培養(yǎng)前涂片革蘭染色鏡檢與培養(yǎng)結(jié)果有明顯的相關(guān)性，臨床上可以通過此結(jié)果得到感染信息，對臨床用藥起到一定的參考作用。兩組結(jié)果的顯著差異性說明先通過革蘭染色鏡檢后再培養(yǎng)，能夠明顯減小微生物培養(yǎng)的陽性率，這與已有的研究結(jié)果保持一致[3,5]。

綜上，微生物標(biāo)本培養(yǎng)前給予涂片鏡檢能夠明顯提升培養(yǎng)質(zhì)量，降低培養(yǎng)假陽性的發(fā)生。