射頻消融術對原發性肝癌患者外周血免疫細胞亞群及細胞因子水平的影響研究*

侯 麗 宋曉丹

肝癌屬于消化系統的腫瘤之一，其發病率呈現逐年升高趨勢，其中原發性肝癌患者高發病年齡段在40～50歲，且男性發病率較女性高，其具體致病原因和發病機制尚未完全明確[1]。目前，多數學者認為，原發性肝癌的發病與環境因素、接觸黃曲霉素等化學致癌物質、病毒性肝炎及肝硬化等密切相關[2-4]。原發性肝癌約有＞50%的患者首發癥狀以肝區疼痛為表現，其原因主要源于癌細胞生長迅速，增大肝包膜張力[5-6]。原發性肝癌患者外周血免疫細胞亞群水平多降低，而細胞因子水平升高。大量研究表明，原發性肝癌患者進行射頻消融術療法可顯著提高患者外周血免疫細胞亞群水平，降低細胞因子水平，且臨床效果明確[7-10]。為此，本研究旨在探析原發性肝癌患者進行射頻消融術后對患者外周血細胞因子水平和免疫細胞亞群水平的影響作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年8月至2015年6月巴彥淖爾市醫院收治的100例原發性肝癌患者，其中男性64例，女性36例；年齡30～71歲，平均年齡(52.3±2.4)歲；乙肝表面抗原(HbsAg)陽性70例，HBsAg陰性30例；同時伴有不同程度的肝硬化80例，癌細胞直徑2.1～5.0 cm。根據隨機數表法將100例患者分為對照組和觀察組，每組50例。觀察組中男性32例，女性18例；年齡30～71歲，平均年齡(52.4±2.4)歲；其中HBsAg陽性35例，HBsAg陰性15例；癌細胞直徑2.1～5.0 cm。對照組中男性32例，女性18例；年齡30～71歲，平均年齡(52.3±2.3)歲； HBsAg陽性35例，HBsAg陰性15例；癌細胞直徑2.1～5.0 cm。兩組患者的性別、平均年齡、合并HBsAg陽性、肝硬化程度以及癌細胞直徑等臨床資料差異無統計學意義，具有可比性。所有病例均符合本研究的納入和排除標準，且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

(1)納入標準：①符合中華醫學會肝病科學會制定的原發性肝癌的診斷標準[11]；②經肝組織穿刺病理學活檢或甲胎蛋白、影像學檢查確診。

(2)排除標準：①合并嚴重肝、心和腎功能不全者；②精神病或不合作者；③處于哺乳期或孕產期的女性。

1.3 儀器與試劑

采用邁德S-1500型腫瘤射頻治療儀(上海邁德醫療科技有限公司)；血清T淋巴細胞亞群檢測采用Cantoll流式細胞儀(美國BD公司)；Platinum ELISA型人酶聯免疫實驗試劑盒(美國eBioscience公司)；Accute TBA-40FR型全自動生化分析儀(日本東芝醫療系統株式會社)，Somatom歡悅雙增強型全身CT螺旋機[西門子(中國)有限公司]。

1.4 治療方法

(1)觀察組。采用射頻消融術，先予以腹部CT掃描，確認進針深度、穿刺方向及腫瘤部位；常規消毒鋪巾后，局部麻醉予以2%利多卡因，在預設射頻靶點予以22 G的Chiba針為導引針，穿刺時注意避開膽管及主要血管的較大分支部位，再次進行CT確認靶點部位的導引針位置，局部切開穿刺點部位0.3 cm，射頻電極針順導引針穿刺途徑刺入靶點位置，CT掃描確定射頻電極針尖在靶點部位后，將電極子針推出，癌細胞周圍0.5～1.0 cm的正常肝組織均為電極子針覆蓋部位，射頻消融治療儀設置瓦控模式，輸出功率100 W，當阻抗超限熱凝時自動停止，對于多個或較大病灶，予以多次射頻消融術治療；術后予以常規心電監護及吸氧、禁食水8 h、預防性采用抗生素(1 d)、止血及保肝療法。

(2)對照組。進行肝動脈化學栓塞法治療，治療后收集外周靜脈血4 ml分別置入干燥管，用ELISA法檢測IL-6、IL-10、TNF-α及TGF-β血清濃度。采集2 ml外周血乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)抗凝劑，分別采集100μl抗凝血，分別加入20μl二色標記的單克隆抗體CD3-FITC/CD16+CD56-PE 20μl和三色標記的單克隆抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，混勻充分，避光室溫染色30 min，由多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質復合物(Percp)充分處理后予以檢測。

1.5 觀察與評價指標

觀察比較兩組治療后的外周血免疫細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和NK細胞指標，以及兩組細胞因子血清IL-1β、TNF-α、IL-6及和IL-10水平。

1.6 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件系統分析所有數據，計量資料采用均值±標準差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后外周血免疫細胞亞群核細胞因子水平比較

(1)兩組患者治療前外周血免疫細胞亞群指標和細胞因子水平比較，其結果無統計學意義；治療后1個月觀察組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK細胞等指標水平顯著高于對照組，其差異有統計學意義(t=8.078，t=5.916，t=5.996，t=3.216；P＜0.05)，見表1。

表1 兩組治療后1個月外周血免疫細胞亞群水平比較(x-±s)

表2 兩組治療后1個月外周血免疫細胞亞群水平和細胞因子水平比較(x-±s)

表3 觀察組不同性別患者治療1個月后對外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平的評估比較(x-±s)

表4 觀察組不同性別患者治療1個月后對細胞因子水平的評估比較(x-±s)

(2)觀察組治療后CD8+細胞水平、血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的檢測水平顯著低于對照組，差異有統計學意義(t=3.745，t=8.422，t=7.373，t=10.432，t=8.884；P＜0.05)，見表2。

2.2 觀察組不同性別患者治療前后對外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平比較

(1)觀察組中男性、女性治療前外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平對比差異無統計學意義；治療1個月后男性患者CD4+、CD4+/CD8+指標水平顯著高于女性患者，差異有統計學意義(t=2.448，t=3.684；P＜0.05)；男性患者的CD8+、CD3+和NK細胞水平顯著低于女性患者，差異有統計學意義(t=3.163，t=3.512，t=2.285；P＜0.05)，見表3。

(2)觀察組不同性別患者治療1個月后對細胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平的比較，其差異均無統計學意義(t=0.208，t=0.434，t=0.546，t=0.701；P＞0.05)，見表4。

2.3 觀察組不同年齡患者治療前后對外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平比較

(1)觀察組中年齡≤55歲和年齡＞55歲的患者治療前外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平對比差異無統計學意義；治療后1個月患者年齡≤55歲的CD4+、CD8+、NK細胞指標水平顯著高于年齡＞55歲的患者，其差異有統計學意義(t=3.188，t=4.123，t=4.146；P＜0.05)，見表5。

(2)觀察組年齡≤55的患者細胞因子IL-1β、IL-6、IL-10以及TNF-α指標水平顯著低于年齡＞55歲的患者，差異有統計學意義(t=2.671，t=2.121，t=2.607，t=2.592；P＜0.05)，見表6。

3 討論

癌細胞可經由各種途徑逃脫機體的免疫監視，而肝癌細胞可通過肝癌組織周圍的微環境改變及修飾自身表面抗原逃脫機體的免疫攻擊及識別，進而出現癌細胞免疫逃逸[12-13]。機體的抗腫瘤效應主要通過介導機體T細胞免疫來發揮作用，特別是CD4+T細胞駕到的免疫殺傷作用在抗腫瘤免疫中發揮重要功能[14-15]。大部分肝癌患者存在免疫抑制，細胞免疫功能降低，外周血常發生NK細胞數量降低及T淋巴細胞亞群紊亂，機體免疫尤其是細胞免疫的降低是肝癌復發、轉移及進展的主要原因[16-17]。

表5 觀察組不同年齡患者治療后1個月對外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平比較(x-±s)

表6 觀察組不同年齡患者治療后1個月對細胞因子水平比較(x-±s)

本研究探析對原發性肝癌患者進行射頻消融術對其外周血細胞因子水平及免疫細胞亞群的影響，研究結果顯示：治療前兩組患者外周血免疫細胞亞群和細胞因子水平差異無統計學意義；治療1個月后觀察組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK細胞等指標水平顯著高于對照組；而觀察組的CD8+細胞水平顯著低于對照組；觀察組的血清IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-10的檢測水平顯著低于對照組，與鄧俊等[18]的研究結果大體一致。

射頻消融術的基本原理：①經由針型電極輸出高頻射頻波，促使組織內離子出現快速振動摩擦產熱，局部溫度可達90～120 ℃，靶區癌細胞出現熱凝固性壞死及變性，癌細胞周圍血管閉塞凝固，進而避免出現轉移，殺死癌細胞的目的；②射頻消融術治療后機體抗腫瘤免疫功能顯著提高，主要源于射頻消融術可直接殺死惡性腫瘤，消除或減輕腫瘤負荷，促使腫瘤緩解免疫抑制，有助于機體恢復免疫功能；經滅活的腫瘤留在機體內，形成腫瘤細胞，誘導產生特異性細胞毒性T細胞，增強細胞的免疫功能；③射頻消融術為熱凝固治療，產生熱效應，暴露腫瘤細胞表面抗原簇，或改變腫瘤抗原，促使腫瘤的抗原性增強；④腫瘤的熱療原位滅活產生熱休克蛋白，尤其是HSP70，參與向T細胞呈遞腫瘤抗原，激發T淋巴細胞介導的機體細胞免疫。射頻消融術本身產生熱量可引發局部炎癥反應，炎癥細胞浸潤，增強細胞介導的免疫反應。

本研究結果顯示，CD4+、CD3+及CD4+/CD8+水平均有升高，而CD8+水平降低，表明經射頻消融術治療后顯著改善了機體的細胞免疫功能，抗腫瘤免疫功能顯著提高；而經射頻消融術后患者的外周血細胞因子水平降低，表明機體抑炎作用顯著提高[19-20]。在單獨對觀察組患者年齡、性別進行觀察時發現，男性CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平變化更明顯，而NK細胞水平明顯上升，提示男性在射頻消融治療后改善情況優于女性。在不同年齡的研究中發現，年齡≤55歲的患者CD4+、CD8+及NK細胞指標水平顯著高于年齡＞55歲的患者；年齡≤55歲的患者IL-10、IL-6、TNF-α以及IL-1β指標水平顯著低于年齡＞55歲的患者。進一步提示年齡≤55歲的患者射頻消融術治療后免疫系統改善情況更好，細胞因子水平改善更明顯，治療效果更好。

原發性肝癌患者進行射頻消融術可顯著提高其外周血免疫細胞亞群水平，降低細胞因子水平，且射頻消融術對年齡55歲及55歲以下、男性患者T細胞亞群和細胞因子水平改變程度更明顯。