體液免疫水平與宮頸上皮內病變及早期宮頸癌的相關性①

曾 月 陳夢捷 覃 露 王 鶴

(廣西醫科大學附屬腫瘤醫院婦瘤科，南寧 530021)

宮頸上皮內病變(Cervical intraepithelial neoplasias，CIN)是宮頸癌的癌前病變，早期宮頸癌則是CIN進展后的延續過程。研究表明，高危型人乳頭狀瘤病毒(High risk human papillomavirus,HR-HPV)感染是導致宮頸上皮內病變及宮頸癌的主要因素。女性一生中感染HPV的概率約為80%，其中約1%的持續HR-HPV感染者將發展為宮頸癌患者，而大部分感染者在HPV感染后的1 ～ 2 年內會自然清除體內病毒。在病毒清除的過程中，細胞免疫發揮了重要作用。而機體系統及局部的細胞免疫反應的減弱則是HPV持續感染進而導致宮頸病變的重要因素[1]。但機體全身及局部的體液免疫與宮頸病變及早期宮頸癌之間的關系并不十分清楚。因此，本研究選取在廣西醫科大學附屬腫瘤醫院婦瘤科、廣西區婦幼保健院及柳州市工人醫院就診的103例CIN和60例早期宮頸癌患者進行回顧性分析，同時以HPV陰性且宮頸活檢正常者25例為對照組，研究CIN及早期宮頸癌與機體全身及陰道局部體液免疫變化的關系，為后續研究奠定基礎。

1 資料與方法

1.1資料 本研究選取2015年1月至2016年12月在廣西醫科大學附屬腫瘤醫院婦瘤科、廣西區婦幼保健院及柳州市工人醫院就診并有完整病歷資料的103例CIN患者，并根據宮頸病變的程度進一步分為低度鱗狀上皮內病變(Low-grade Squamous Intraepithelial Lesion，LSIL)組20例、高度鱗狀上皮內病變(High-grade Squamous Intraepithelial Lesion，HSIL) 組83例；同時收集早期宮頸癌患者60例進行回顧性分析，并以25例HPV陰性且宮頸活檢正常的患者作為對照組，所有患者均有明確的病理診斷支持。所有受檢對象應符合以下條件：①無高血壓、糖尿病、免疫系統疾病及其他惡性腫瘤等病史。②未曾進行如淋巴結切除術、脾切除術等損害機體免疫功能的手術治療。③未進行化療、放療及免疫系統治療。所有患者在治療前抽取空腹靜脈血，檢測患者的外周血中的免疫球蛋白及補體；同時收集患者陰道灌洗液，檢測陰道局部細胞因子。所有標本采集均經研究對象同意。

1.2檢測方法

1.2.1外周血免疫球蛋白及補體的檢測 所有受檢對象均于晨起空腹抽取外周血2 ml，肝素抗凝，靜置20 min以上、離心后分離上部血清，4℃保存，1 h內檢測。血清中免疫球蛋白及補體的檢測采用PEG-增強免疫比濁測試法。兩者的正常值參考范圍：IgA 0.7～3.3 g/L，IgG 8～16 g/L，IgM 0.5～2.2 g/L，C3 0.9～1.5 g/L，C4 0.2～0.4 g/L。

1.2.2陰道局部細胞因子的檢測 ①陰道灌洗液標本采集：對入選患者暴露宮頸口，用一次性10 ml無菌注射器取5 ml生理鹽水，沖洗陰道后穹窿及宮頸部，回吸收集陰道灌洗液5 ml，存放于無菌離心管內，離心10 min(2 000 r/min)，收集上清液用于 IL-2、IL-10的檢測；②灌洗液上清中IL-2、IL-10因子的檢測：采用ELISA雙抗夾心法。結果判讀為：每個標準品和標本的OD值減去空白孔的OD值；以不同濃度的標準品所對應的OD450值做縱坐標，以標準品的濃度做橫坐標，用軟件繪制標準曲線，求出相應的位置樣本中的細胞因子的含量。

2 結果

2.1外周血中抗體和補體的檢測結果 外周血清中抗體IgA、IgG、IgM和補體C3、C4的檢測結果見表1。雖然LSIL組、HSIL組和早期宮頸癌組中IgA、IgM均較對照組高，并有隨宮頸病變程度加重而升高的趨勢，但差異無顯著統計學意義(P>0.05)。同樣，IgG、IgM隨宮頸病變程度加重而變化的趨勢不明顯(P>0.05)。此外，不同實驗組與對照組之間補體C3、C4的檢測結果亦無統計學意義(P>0.05)。

表1各組外周血清中抗體和補體的檢測結果

Tab.1Detectionofantibodyandcomplementinperipheralserumofeachgroup

GroupsControl group LSILHSILEarly stage cervical cancerPCases25208360IgA1.72±0.521.93±0.822.21±0.692.28±0.610.381IgG13.47±2.4613.31±2.5712.41±2.4912.72±2.530.211IgM1.23±0.441.28±0.333.07±15.451.26±0.410.970C31.08±0.271.15±0.181.00±0.241.06±0.180.115C40.26±0.110.24±0.070.24±0.150.26±0.060.697

表2各組陰道灌洗液中細胞因子IL-2、IL-10的檢測結果

Tab.2DetectionofcytokineIL-2,IL-10ofirrigatingsolutionfromvaginaofeachgroup

GroupsControl group LSIL HSIL Early stage cervical cancerχ2PIL-2171.02±22.75173.31±19.72141.59±31.721)145.16±34.471)37.9600.000 IL-1043.91±11.1646.53±14.6153.78±18.891)55.36±20.461)17.6550.001

Note：1)Compared with control group，P<0.05.

2.2陰道灌洗液中細胞因子IL-2、 IL-10的檢測結果 陰道灌洗液中細胞因子IL-2、IL-10的檢測結果見表2。IL-2在對照組、LSIL組、HSIL組和早期宮頸癌組中的表達逐漸降低，差異有統計學意義(P=0.000<0.001)；而IL-10在對照組、LSIL組、HSIL組和早期宮頸癌組中的表達逐漸升高，差異亦有統計學意義 (P=0.001<0.05)。

3 討論

近年來，國內外學者經過不斷研究發現，除高危型HPV持續感染外，女性年齡、月經初潮年齡、性伴侶個數、人工流產次數和免疫功能異常等因素都是引起宮頸上皮內病變及宮頸癌發生的高危因素。在正常情況下，人體自身的免疫系統可以防御病原微生物的侵襲和感染，也可以處理體內出現的異常轉化細胞。機體抗腫瘤免疫由細胞免疫與體液免疫二者共同參與[2]。當機體的免疫功能失調時，機體防御功能下降，異常轉化細胞處理能力下降，可促進腫瘤的發生發展[3]。

3.1外周血中抗體和補體與宮頸病變及早期宮頸癌 免疫球蛋白是B淋巴細胞經抗原刺激增殖分化為漿細胞后合成的一種與相應抗原發生特異性結合的抗體，是衡量機體體液免疫功能的重要指標[4]。目前已有研究表明免疫球蛋白在腫瘤細胞中存在異位表達，提示免疫球蛋白可能與機體內腫瘤細胞的發生發展存在一定的關系[5]。

免疫球蛋白主要分布在血清或體內外分泌物中，在體液免疫中起著重要作用，測定免疫球蛋白的含量有助于了解人體的體液免疫功能，對臨床的診斷與治療用藥有一定的指導意義。人類免疫球蛋白可分為IgA、IgM、IgG、IgD和IgE，由于IgD、IgE在人體中含量甚微，難以檢測，故平時測定主要是以IgA、IgG、IgM三種免疫球蛋白為主。有研究表明，惡性腫瘤患者血清中免疫球蛋白含量均有不同程度的升高[5-7]。 但在本研究中，IgA、IgG、IgM在對照組和各實驗組間的差異并無統計學意義，說明宮頸上皮內病變和早期宮頸癌作為局部病變，并未對全身的體液免疫功能產生大的影響。同時，我們也注意到，IgA作為參與機體黏膜感染免疫過程的主要免疫球蛋白[5]，有隨著宮頸病變程度加重而升高趨勢，雖然可能由于病例數不足，各實驗組和對照組間的差異尚無統計學意義，但根據我們的數據推測，宮頸病變及早期宮頸癌患者血清中IgA升高可能與HPV持續感染導致宮頸及陰道黏膜病變相關。補體系統是天然免疫的重要組成部分，能有效清除異物并維持機體內免疫防御功能的穩定。一直以來，補體系統的參與被認為是抑制腫瘤發生的有效手段。但本研究中，血清補體C3和C4在對照組、LSIL組、HSIL組及早期宮頸癌組的差異并無統計學意義，同樣提示宮頸病變及早期宮頸癌作為宮頸及其周圍組織的局部病變，對全身的體液免疫變化影響不大。

3.2陰道灌洗液中細胞因子與宮頸病變及早期宮頸癌 CD4+主要是輔助性T 淋巴細胞(Th)，其主要作用即為協助B 淋巴細胞分化并產生抗體。CD4+細胞活化后可分化為Th1、Th2 和Th17 三種細胞。正常情況下，Th1和Th2在機體內保持平衡狀態。IL-2主要由Th1細胞產生，是免疫應答和免疫調節中的核心因子，可促進T細胞增殖及B細胞分泌抗體，同時可增強NK細胞、LAK細胞和CTL對病原體的殺傷活性，發揮重要的抗病毒、抗腫瘤作用。IL-2活性高低直接影響局部的免疫狀態及免疫細胞功能。而IL-10則是一種具有多種抑制抗腫瘤免疫應答作用的Th2型細胞因子，能阻斷郎罕氏細胞、巨噬細胞及腫瘤細胞的腫瘤相關抗原的提呈，同時能抑制T細胞的增殖和功能及下調IFN-γ、IL-2等Th1類細胞因子的表達，使細胞免疫應答受到抑制，從而有助于腫瘤細胞逃避機體的免疫攻擊，致細胞癌變的發生。大量研究表明，在宮頸上皮內病變和宮頸癌發生過程中均存在Th1向Th2漂移的情況[8]，這就導致了患者的機體免疫功能下降，為高危型HPV持續感染、病毒整合到上皮細胞基因組、細胞轉化和無限增殖免疫反應損傷提供了條件，同時還導致癌前或癌細胞發生免疫逃逸，加速了腫瘤的發生發展[9]。Laager等[10]研究發現隨著宮頸鱗狀上皮細胞內病變嚴重程度的增加，IL-2陽性細胞密度減低。Lee等[11]研究 HPV 感染后出現不同程度宮頸病變的婦女，發現隨著病變程度的增加出現明顯的Th1 型細胞因子下降現象。研究發現 IL-10只在宮頸鱗癌、CINⅢ組增加，差異有統計學意義，CINⅠ、CINⅡ組無明顯變化。El-Sherif 等[12]發 現 CINⅡ和 CINⅢ組織中 IL-10 明顯高于正常宮頸和CINⅠ組織，IFN-γ明顯低于正常宮頸和 CINⅠ組織，因此，認為隨著 CIN的進展，患者宮頸局部細胞因子由 Th1向Th2轉變。因此，陰道灌洗液中IL-2及IL-10的變化也可能成為早期宮頸病變進展的預警因素之一。

總之，根據我們的研究，CIN及早期宮頸癌作為宮頸局部病變，除對與黏膜免疫相關的IgA可能有一定影響外，對其他的體液免疫指標影響不大。但宮頸病變的進展可導致陰道灌洗液中IL-2下降及IL-10上升，使Th1向Th2漂移，陰道的局部免疫降低，反過來促進宮頸病變的發展。說明在CIN向早期宮頸癌進展的過程中，全身體液免疫尚未受影響，但陰道局部的體液免疫指標已發生變化，陰道灌洗液中IL-2及IL-10的變化可作為早期宮頸病變進展的預警指標之一。