廣西牛片形吸蟲病流行病學(xué)調(diào)查分析

霍孔林,陸晨陽,白安斌,周緒正,張吉麗,張繼瑜,吳健敏

（1.廣西獸醫(yī)研究所 廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室,廣西 南寧 530001;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸藥創(chuàng)制重點實驗室,甘肅 蘭州 730050）

廣西壯族自治區(qū)屬于亞熱帶季風(fēng)氣候,擁有大面積的草地及草坡,規(guī)模肉牛養(yǎng)殖具有較好的發(fā)展前景。隨著廣西養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,規(guī)模化、集約化的肉牛養(yǎng)殖場逐漸增多,隨之而來疾病的防控工作,顯得尤為重要。其中,片形吸蟲（Fasciola spp.）是一種具有極大危害性的寄生于哺乳動物肝臟膽管中的一類大型吸蟲,其長期消耗宿主的營養(yǎng)且造成病理損傷,使宿主飼料報酬降低,增重速度減緩,嚴重時甚至造成死亡[1]。廣西為片形吸蟲病高發(fā)地區(qū),該病對廣西肉牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成了嚴重阻礙。為了摸清廣西牛片形吸蟲病的流行情況及其特點,我們通過采集糞便,采用水洗沉淀法以及動物剖檢對片形吸蟲在廣西的流行做一個綜合的評判,為防控該病流行提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 從2016年7月份到2017年7月份隨機在廣西8個不同地級市的規(guī)模牛場和散養(yǎng)戶中采新鮮牛糞1 571頭份。同時屠宰時隨機抽取50頭試驗牛進行剖檢,觀察病變并采集新鮮肝臟組織及蟲體。

1.2 方法

1.2.1 糞樣采集及蟲卵計數(shù) 將收集到的新鮮糞便放置自封袋中,每份樣品不少于20 g,4℃低溫保存,迅速寄送到實驗室進行蟲卵檢查。采用尼龍篩水洗沉淀法進行檢查,其操作步驟如下:（1）取糞便20克加清水500 mL,攪勻成糞液;（2）過80目銅篩過濾,濾液收集于燒杯中;（3）再過260目篩網(wǎng),反復(fù)沖洗,最后將篩網(wǎng)內(nèi)殘留物沖洗下來,留在燒杯中靜置沉淀待檢;（4）棄上清,留25 mL,充分混勻,用移液器立即吸取200 μL混液均勻涂抹在載玻片上,在光學(xué)顯微鏡下計蟲卵數(shù)。將顯微鏡所觀察到的蟲卵進行計數(shù),并參考相關(guān)文獻對檢測的片形吸蟲進行形態(tài)學(xué)分析及鑒定[2],若觀察到有片形吸蟲蟲卵,即判斷為陽性。

1.2.2 剖檢及蟲體采集 按蠕蟲檢查方法進行剖檢。肉眼觀察肝臟、膽囊及膽管并記錄外觀及內(nèi)部變化,選取部分肝臟病變組織保存于10%福爾馬林溶液中固定,按照常規(guī)方法制作病理組織切片。與此同時,小心地把蟲體找出,進行鑒定和分類計數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 廣西牛片形吸蟲感染情況調(diào)查結(jié)果 本次牛主要片形吸蟲流行病學(xué)調(diào)查共檢測糞便1 571份,分別來自南寧、柳州、梧州、北海、崇左、河池、百色和貴港。糞便檢查診斷結(jié)果表明,牛片形吸蟲感染在廣西較為嚴重,各地感染率在37.5% ～87.8%之間,平均EPG（每克糞便中的寄生蟲蟲卵數(shù)量）在10.2～162.9之間,且感染情況存在較大差異,如表1所示。

2.2 廣西牛片形吸蟲蟲卵觀察結(jié)果 在顯微鏡視野下對蟲卵進行形態(tài)學(xué)的分析及鑒定,所觀察到的蟲卵呈長卵圓形,黃褐色,有卵蓋,卵殼光滑且薄,整體呈半透明,雙層。卵內(nèi)有一個胚細胞及充滿了卵黃細胞（見中插采版圖1）,并隨機抽取其中30個蟲卵進行測量,其大小為 133 μm ～ 190 μm ×74 μm ～90 μm。

表1 廣西不同地區(qū)片形吸蟲感染率

2.3 牛片形吸蟲感染器官的主要病變觀察

2.3.1 肝臟眼觀變化及組織切片結(jié)果 在所剖檢的牛中85%以上的肝臟均有較明顯的眼觀病變:肝臟整體顏色變暗,有突起,指觸感變硬,肝臟表面覆蓋灰白色纖維性組織（見中插彩版圖2A）,且局部發(fā)生炎癥。嚴重時有大塊的化膿灶或壞死灶（見中插彩版圖2B）,表面有膿液滲出,且刀切開感松軟。在肝組織切片結(jié)果中顯示,肝竇狀隙擴張淤血、肝細胞發(fā)生彌漫性脂肪變性（見中插彩版圖2C）,以及少量的炎性細胞浸潤（見中插彩版圖2D）。提示肝臟脂肪代謝發(fā)生障礙和功能異常,可能與片形吸蟲感染有關(guān)。

2.3.2 膽囊及淋巴結(jié)病變觀察 在所剖檢的牛膽囊中可以觀察到,血管增粗且充血（見中插彩版圖3A）;膽管口附近發(fā)生炎癥且有炎性滲出物;淋巴結(jié)腫大、充血。切開膽囊時感膽囊壁變厚、增粗,膽汁變濃并伴隨著惡臭流出,在膽囊內(nèi)壁有大面積的炎癥反應(yīng),在膽囊腔內(nèi)有大量的片形吸蟲蟲體（見中插彩版圖3B）,體長在20 mm～50 mm,呈竹葉狀,顏色鮮紅（見中插彩版圖3C）。每個膽囊有1～39條蟲體不等,每個膽囊以3～28條居多。且在屠宰的過程中發(fā)現(xiàn),年齡越大的牛,膽囊內(nèi)出現(xiàn)蟲體的概率越大。

3 討論

3.1 調(diào)查結(jié)果 本次調(diào)查采用尼龍篩水洗沉淀法以及蠕蟲檢查方法對廣西部分地區(qū)牛群片形吸蟲感染情況進行調(diào)查,結(jié)果顯示,廣西牛群感染片形吸蟲的現(xiàn)象比較普遍,平均感染率達69.3%,與王冬英等[3]報道的廣西水牛感染率在60% ～80%,黃牛感染率在60%左右的結(jié)果較為一致。與韋志鋒等[4]報道的39.6%、R.S.Law son.Dope.Passi等[5]報道的51.70%有一定的差異,可能與本次調(diào)查對象以散養(yǎng)為主有關(guān)。南寧、梧州和崇左地區(qū)感染率高于70%,可能與其養(yǎng)牛集中區(qū)域較靠近沼澤濕地或者河灘附近放牧的牛群容易誤食入囊蚴而導(dǎo)致在體內(nèi)大量積累發(fā)育成為成蟲,使牛機體紊亂甚至死亡。而且在調(diào)查走訪中發(fā)現(xiàn),養(yǎng)殖戶的驅(qū)蟲意識薄弱,95%以上的牛未用過驅(qū)蟲藥,也是造成此次調(diào)查陽性率偏高的原因之一。

3.2 片形吸蟲感染牛病變組織觀察情況 本次調(diào)查以廣西片形吸蟲陽性率較高地區(qū)牛群為對象,通過剖檢病變組織觀察以及病理組織切片的方法對牛的肝臟和膽囊膽管進行觀察,從病理學(xué)以及形態(tài)學(xué)角度為牛感染片形吸蟲診斷提供了依據(jù)。

王冬英[3]的研究結(jié)果表明,膽囊檢測法是一種操作簡單、經(jīng)濟且結(jié)果可靠的確診片形吸蟲感染的流行病學(xué)調(diào)查方法。其調(diào)查結(jié)果顯示,切開膽囊膽管后即聞到惡臭,膽汁變濃,偶有絮狀物,膽囊壁有壞死灶,或發(fā)生鈣化或出血;膽囊和膽管內(nèi)有片形吸蟲1～52條不等,與我們此次剖檢結(jié)果相似。本次調(diào)查觀察到感染片形吸蟲牛的肝臟表面變硬,有突起,有的切面區(qū)域變硬,與吳文德[6]剖檢調(diào)查結(jié)果相似,但所不同的是,其試驗牛肝病理切片中觀察到的是肝臟組織纖維化,已觀察不到肝臟組織結(jié)構(gòu);毛細血管增生,周邊是成纖維細胞,間有紅細胞,或有些區(qū)域肝細胞表現(xiàn)水泡狀變性。而本調(diào)查觀察到的是竇狀隙擴張淤血、肝細胞發(fā)生彌漫性脂肪變性,有少量炎性細胞浸潤。造成其試驗結(jié)果的差異,有待更深入的研究。

3.3 結(jié)論 通過對廣西地區(qū)牛的片形吸蟲的調(diào)查分析發(fā)現(xiàn),廣西片形吸蟲病感染較為嚴重,已對廣西牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展造成了重大的影響,我們應(yīng)提高養(yǎng)殖戶的防控意識,加強和重視片形吸蟲的防治工作。