微柱凝膠法檢測血型及配血出現(xiàn)雙群結(jié)果原因分析

張 川

(重慶市第七人民醫(yī)院檢驗科 400054)

微柱凝膠技術目前已廣泛應用于醫(yī)院臨床輸血紅細胞血清學檢測，其中輸血前血型/交叉配血試驗是最常規(guī)的工作之一。微柱凝膠法在血型/交叉配血試驗中紅細胞凝集反應結(jié)果判讀上可能出現(xiàn)：++++、+++、++、+、+/-、-、溶血、雙群(D.P)共8種結(jié)果，在這些判讀結(jié)果中，D.P雙群結(jié)果就是微柱凝膠頂部和底部均能看見紅細胞，D.P雙群結(jié)果雖然出現(xiàn)的概率非常小，但D.P雙群是困擾實驗人員判定血型/交叉配血結(jié)果的干擾因素，給最后報告帶來非常大的不確定性[1]。本文著重探討微柱凝膠技術檢測ABO-RH(D)血型/交叉配血判讀結(jié)果出現(xiàn)D.P雙群結(jié)果的原因，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 15 846例血型標本來自本院2013-2015年門診及住院患者血樣；3 692例交叉配血受血者標本來自本院臨床輸血患者血樣，所有獻血員標本來自重慶市血液中心。

1.2儀器與試劑 西班牙Grifols公司Diana專用離心機(DG Spin)、DIANA專用孵育器(DG Therm)。西班牙Grifols公司Diana血型確認卡(Diana confirm)、Diana抗人球蛋白卡(Diana Coombs),紅細胞稀釋液采用本院制備的生理鹽水。

1.3方法

1.3.1標本預處理 血型標本采用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，3 000 r/min離心5 min備用；交叉配血標本：受者標本(EDTA-K2抗凝)、取獻血員血袋辮子血(枸櫞酸鈉抗凝)3 000 r/min離心5 min備用。

1.3.2微柱凝膠法血型試驗 正定ABO-RH(D)血型,取Diana血型確認卡(Confirm)1張，在抗A-抗B-抗D-CTL 4孔各加入1%紅細胞懸液50 μL，放入DIANA專用離心機990 r/min離心9 min，按試劑說明書判讀結(jié)果。

1.3.3微柱凝膠交叉配血試驗 取Diana抗人球蛋白卡(Coombs)1張，標注好主側(cè)和次側(cè)，主側(cè)先加入獻血員1%紅細胞懸液50 μL，再加入患者血漿25 μL,次側(cè)先加入患者1%紅細胞懸液50 μL，再加入患者血漿25 μL,凝膠卡置Diana 37 ℃專用孵育器孵育15 min，孵育好的凝膠卡用Diana專用離心機990 r/min離心9 min，按試劑說明書判讀結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1ABO-RH(D)血型結(jié)果雙群結(jié)果分布 見表1。在送檢的15 846例血型正定型ABO-RH(D)標本中，紅細胞凝集反應出現(xiàn)76例雙群結(jié)果，占送檢標本的0.47%，其中攜帶污染39例(51.32%),凝膠卡破損25例(32.89%),A3亞型5例(6.58%),B3亞型4例(5.26%),白血病患者2例(2.63%),骨髓移植患者1例(1.32%)。

表1 ABO-RH(D)血型結(jié)果雙群結(jié)果分布

注：N為正常判讀Normal；D.P為雙群模式

2.2交叉配血結(jié)果雙群結(jié)果分布 見表2。在送檢的3 692例交叉配血標本中，紅細胞凝集反應出現(xiàn)33例雙群結(jié)果，占送檢標本的0.89%,其中辮子血抗凝不全19例(57.58%),凝膠卡破損12例(36.36%),紅細胞破碎2例(6.06%)。

表2 交叉配血結(jié)果雙群結(jié)果分布

注：N為正常判讀Normal；D.P為雙群模式

3 討 論

微柱凝膠法目前作為紅細胞免疫血清學檢測方法普遍應用于臨床[2],其工作原理：結(jié)合抗原抗體反應與凝膠分子篩技術，通過調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠水平控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許游離紅細胞通過，達到分離凝集紅細胞和游離紅細胞的目的。在微柱凝膠法的結(jié)果判讀上，D.P雙群結(jié)果雖然少見，但對凝集反應結(jié)果的判定D.P雙群結(jié)果干擾最大。本文應用微柱凝膠法檢測近3年送檢標本的ABO-RH(D)血型和交叉配血，對出現(xiàn)的D.P雙群結(jié)果進行研究和分析，探討形成雙群結(jié)果的原因，取得了比較滿意的結(jié)論[3-4]。

ABO-RH(D)血型檢測結(jié)果76例雙群結(jié)果中39例攜帶污染，換實驗人員復查結(jié)果正常，經(jīng)循證分析原因是抗D攜帶污染CTL(自身對照)孔，主要是加樣槍尖、凝膠卡覆膜攜帶污染造成；25例凝膠卡破損，換新批號的凝膠卡離心后復查結(jié)果正常，經(jīng)觀察比較凝膠卡內(nèi)緩沖液揮發(fā)、有氣泡、斷膠，造成破損的主要原因是凝膠卡運輸不妥和保存不當；5例A3亞型，經(jīng)復查D.P雙群依然明顯，進一步使用進口抗-A1單克隆血清試管法確認A3亞型，原因是A3亞型紅細胞A3抗原與抗-A抗體發(fā)生弱的凝集造成；4例B3亞型，復查血型D.P雙群依然明顯，循證對照后進一步試驗確認B3亞型，原因是B3亞型紅細胞B3抗原與抗B發(fā)生弱凝集反應造成；2例白血病，患者都是A型血M4型白血病，復查血型結(jié)果D.P雙群結(jié)果明顯，原因是M4型A型白血病患者在疾病活動期紅細胞表面抗原減弱，可能呈A2或A3型，其中A3抗原會與抗A形成弱凝集反應；1例骨髓移植患者，復查血型結(jié)果D.P雙群結(jié)果明顯，經(jīng)過循證分析原因是異基因骨髓移植，患者紅細胞生成期紅細胞血型系統(tǒng)表態(tài)呈嵌合狀態(tài)，從而造成D.P雙群模式出現(xiàn)。

交叉配血檢測結(jié)果33例雙群模式結(jié)果中19例辮子血抗凝不全，辮子血重新離心后復查結(jié)果正常，原因是血漿中纖維蛋白在離心時析出，阻隔少量紅細胞下降，出現(xiàn)假陽性，即次側(cè)“紅線”現(xiàn)象；12例凝膠卡破損，換新批號凝膠卡充分離心復查D.P雙群不再出現(xiàn)，原因是凝膠卡保存不妥、運輸不當造成緩沖液揮發(fā)、氣泡、斷膠；2例紅細胞破損，D.P雙群出現(xiàn)在次側(cè)，經(jīng)觀察比較患者紅細胞有輕微溶血，洗滌患者紅細胞上清液鏡下觀察有破碎的紅細胞碎片，洗滌患者紅細胞后復查D.P雙群不再出現(xiàn)[5-7]。

通過本文的探討與分析，出現(xiàn)D.P雙群模式的主要原因是攜帶污染、抗凝不全、凝膠卡破損等外在因素造成，為減少D.P雙群模式出現(xiàn)，需要實驗人員規(guī)范標準操作，加強樣品預處理、妥善保存和運輸凝膠卡。紅細胞本身抗原變化引起的D.P雙群模式出現(xiàn)概率很小，更需要謹慎細致地進行綜合分析加以循證。有關彌散性血管內(nèi)凝血、臨床治療藥物引起ABO-RH(D)血型結(jié)果D.P雙群、紅細胞染菌引起的交叉配血D.P雙群本研究未曾觸及，希望能在今后的臨床工作中進一步分析和探討。