標本狀態對糖化血紅蛋白檢測結果的影響

李熙建，何凌波，嚴 羽，張立營，陳 樸

(四川省宜賓市第一人民醫院檢驗科 644000)

糖化血紅蛋白(HbA1c)是一項反映糖尿病病情進展和評估慢性并發癥風險的一項重要指標[1]，對其相關標準及影響因素的了解、分析和掌握，以保證檢驗結果的準確性、精密性和可比性，為臨床提供有質量保障的檢驗結果，是實驗室檢驗人員的職責。HbA1c的檢測較傳統血糖檢測有較明顯的優勢，包括分析前不穩定小，生物變異小，無需空腹或特定的時間抽血等，所以在臨床上的應用更廣泛。一些資料指出，嚴重的高三酰甘油血癥、高膽紅素血癥和尿毒癥均可引起HbA1c假性升高[2-4]。這幾種情況的影響應當視不同的檢測方法學而定，不同的檢測方法檢測原理不同，抗干擾性能也不同，所以受影響的程度也不一樣。本文用具體的試驗數據來分析、驗證高三酰甘油、高膽紅素和溶血對陽離子交換高效液相色譜法(IE-HPLC)檢測HbA1c是否有影響及具體影響情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院門診、住院及健康體檢者標本80份，其HbA1c水平在2.9%～17.2%。收集多天、多例患者標本，混勻，進行檢測，其三酰甘油(TG)水平為21.6 mmol/L、膽紅素(BiL)水平為306 μmol/L。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 Arkray HA8180全自動糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑、校準品、質控品和配套耗材[愛科來國際貿易(上海)有限公司]，并按廠家要求更換防護片和分析柱，采用反相陽離子交換層析法。其校準品以國際臨床化學與檢驗醫學聯合會標準物質作為溯源終點，確保溯源至美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃值BW3626(低)、BW3625(高)，本次校準品低值為5.3%，高值為10.4%。室內質控品測定值均符合質控規則要求。

1.2.2精密度檢測 選取低、中、高值水平(4.6%、7.2%、12.1%)進行精密度試驗。不同水平每天不同時間測定5次，連續測定6 d，分別得出批內和批間變異系數(CV)。

1.2.3TG干擾試驗 將收集多天、多例患者得到的高TG混合血漿(水平為21.6 mmoL/L)，保留一部分原水平標本(20 mL),然后將該水平用生理鹽水按3∶4、2∶4、1∶4的比例進行稀釋，形成21.6、16.2、10.8、5.4 mmoL/L 4種不同的水平。然后分別加入到預先挑選出來的HbA1c試驗標本中(共80份)。將80份分為4組，每組20份，每組標本均包括低、中、高不同水平，其水平范圍在2.9%～17.0%。在每一測定標本中，分別加入上述水平的TG混合血漿1 mL，混勻，上機進行檢測，對數據進行比較分析。

1.2.4BiL干擾試驗 將收集多天、多例患者得到的BiL混合血漿(水平為306.0 μmoL/L)，按不同比例與生理鹽水進行稀釋，使BiL形成306.0、229.0、153.0、76.5 μmoL/L 4種不同水平，然后采用與TG干擾試驗相似的方法，分別加入到預先挑選出來的HbA1c試驗標本中(共80份)。80份標本分為4組，每組20份，水平范圍3.9%～17.2%，包括低、中、高不同水平。在每一測定標本中，分別加入上述水平的BiL混合血漿1 mL，混勻、檢測、分析。

1.2.5對溶血的影響 選取不同水平標本20份，HbA1c水平范圍4.1%～16.2%，然后對標本中的紅細胞進行破壞，致使其溶血，再進行檢測和數據統計，分析當有外在條件造成溶血時，其檢驗結果是否受到影響及具體影響。

2 結 果

2.1不同HbA1c水平時批內和批間精密度比較 見表1。通過對不同水平各30個精密度數據的分析發現，批內、批間CV均小于1%，說明該儀器的精密度性能優良。

表1 儀器精密度性能檢測情況

2.2不同水平TG對HbA1c檢測結果的影響 將4種不同水平(5.4～21.6 mmoL/L)的TG加入到不同水平(2.9%～17.0%)的HbA1c標本管中，采用IE-HPLC檢測HbA1c結果無明顯影響(P>0.05)，其數據的分布也是隨機波動，并未受到因加入水平的不同而出現趨勢性變化，見表2。

表2 不同水平TG對檢測結果的影響(n=20)

2.3不同水平BiL對HbA1c檢測結果的影響 將4種不同水平的BiL加入到不同水平(3.9%～17.2%)的HbA1c標本中進行測定，見表3。通過配對計量資料t檢驗示t值較低，均小于1，按t臨界值表示t0.05/2.19=2.093,得P>0.05，說明其檢測結果差異無統計學意義。從對數據的觀察分析可知，HbA1c未受不同水平BiL的干擾而出現趨勢變化。

2.4同一標本在溶血前后檢測結果的變化情況 通過對20例HbA1c不同水平(4.1%～16.2%)標本進行溶血前后檢測的數據顯示，其結果波動范圍為-0.2～0.2，差值均數0.02，差值、標本標準差0.083 4，提示IE-HPLC對HbA1c的檢測不受是否溶血的影響(t=1.073 1,P>0.05)。

表3 不同水平BiL對HbA1c檢測結果的影響(n=20)

3 討 論

HbA1c作為糖尿病最新篩查、診斷、血糖控制和療效考核的有效檢測指標，發揮著較重要的作用。實驗室工作人員致力于儀器的優化和了解各種因素對檢測方法的影響，以減小臨床誤診或漏診，來提高檢測結果的正確度是檢驗工作人員做好本職工作的重點之一。

通過試驗分析高三酰甘油、高膽紅素及溶血對IE-HPLC檢測HbA1c時的影響情況，目的在于監測該檢測方法的性能，了解檢驗過程中是否存在問題，以達到掌握、控制系統穩定性的目的。

本研究的初衷是驗證文獻[2-4]中報道的一些觀點，文中提到的嚴重高三酰甘油血癥、高膽紅素血癥對HbA1c的檢測結果有影響。作者查閱了較長一段時間的資料，均未發現相關影響的具體數據。而本文作者認為，檢測方法不同，其抗干擾的性能也會有所不同，于是才進行本研究的試驗設計和得出了一系列具體試驗數據，證明了就IE-HPLC檢測HbA1c而言，BiL、TG、溶血這幾項影響因素均不會對檢測結果造成統計學意義上的影響，其檢測值是可信的，符合臨床要求。

HA8181分析儀檢測HbA1c是通過反相陽離子交換層析法檢測，通過溶血，洗滌液稀釋的血液標本送到層析柱，層析柱根據HPLC將此標本分離為多種血紅蛋白成分，通過雙波長比色法檢測從層析柱洗脫的各成分，用微型計算機處理所得結果，從而獲得峰鑒別和水平。它的計算公式采用HbA1c峰面積/ΣHbA峰面積[5]，由于HbA1c的檢測與傳統空腹血糖和餐后2 h血糖比較，它有生物變異小，分析前不穩定小，無需空腹或特定時間抽血，受應激性(如應激、疾病相關)血糖波動的影響較小，能反映長期血糖和慢性并發癥風險，可用于指導糖尿病的管理和治療方案的調整，且已根據美國糖尿病控制和并發癥試驗或英國前瞻性糖尿病研究方法標準化和校準等優點[5]，越來越受到更多的歡迎與采用。所以，對其影響因素的探討和具體影響情況的分析，乃至更為全面的了解，就顯得尤為重要。

本研究顯示，總CV為0.77%～0.82%，而BARGA等[6]根據生物學變異數據推薦的HbA1c測定分析質量目標為日間CV<2%。我國衛生行業標準規定的實驗室內CV應不超過3%，且盡量控制在2%以內[7]。說明本儀器的精密度達到了比較優秀的水平，這是本研究進行其他試驗與分析的前提與基礎。檢驗質量的全面掌控涉及檢驗分析過程的前、中、后多個階段。采血順利與否，標本抗凝與保存，以及離心力與離心時間等原因，極易造成檢測標本溶血；而患者的飲食及身體狀況，以及一些臨床治療，也容易使標本出現脂血等情況；肝功能受損時引起糖代謝紊亂，出現糖耐量異常，甚至顯性糖尿病，長期血糖波動會進一步促進肝纖維化形成，影響肝病預后，以及其他疾病或相關并發癥的出現，均可造成BiL升高[8]。這也是本研究選取溶血、脂血、BiL作為監控和此次分析的重點和目標的原因，同時，這幾種影響因素也是在檢驗分析中最常見的影響因素。

通過本研究的數據分析，明確了對IE-HPLC，尤其對Arkray HA8180分析儀而言檢測HbA1c，當BiL<306 μmoL/L、TG<21.6 mmol/L，以及在采血、運輸過程中造成細胞外溶血，這些影響因素對檢測結果差異均無統計學意義(P>0.05)，其精密度、抗干擾性、準確性均較好，完全滿足臨床對HbA1c檢測的需求。同時也說明不同檢測方法的抗干擾能力有差別，有的抗干擾能力較強，幾乎不受其干擾因素的影響。只有對檢測方法作出正確的方法學評價，才能對檢驗結果的準確性和檢驗質量的提高做到心中有數，更好地為患者和臨床提供服務。