不同保存溫度和時間對血細胞分析結果的影響*

夏炳妍，周玉明，燕丕宏，譚宏偉，高 軍，王國艷,王美蓉，封建凱，宿振國，張玉強

(濱州醫學院煙臺附屬醫院檢驗科，山東煙臺 264003)

臨床上血細胞分析是最基礎的血液檢測方法，是很多臨床疾病診斷的依據之一[1-2]。血細胞分析會受多種因素的干擾，包括采集血液的手法、被檢測者的身體狀況和采集血液時的體位、標本采集后的保存條件等[3-5]。如標本獲得后不能即刻進行檢測，往往需要將血標本進行保存，而標本的保存溫度與保存時間對血常規檢測結果有何影響，需系統研究分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 共收集本院臨床科室送檢的120例患者標本，男、女各60例，年齡20～40歲。120份血液標本分為3組，每組各40份，第1組：置于-20 ℃冰柜冷凍，第2組：置于4 ℃冰箱保存，第3組：置于20 ℃室溫保存，分別檢測即刻、1 d、3 d和7 d的血細胞參數。

1.2儀器與試劑 采用Sysmex XN 1000全自動模塊式血液分析儀進行血常規檢測。儀器采用的所有試劑均為Sysmex設備專用試劑。

1.3檢測方法 血常規檢驗是一種對血液中的紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(Hb)進行計數，以及對WBC進行分類的一種檢驗方法。采集健康體檢人員2 mL靜脈血，置于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝真空采血管中，搖勻6～8次。按照Sysmex XN 1000全自動模塊式血液分析儀使用說明書進行操作，在室內質量控制在控的情況下對血標本進行檢測。采用液壓聚焦法、SLS-血紅蛋白法、WDF通道分別測定RBC、PLT、Hb及WBC分類。分別檢測即刻、1 d、3 d、7 d的血細胞參數。

1.4檢測指標 除檢測WBC、RBC、Hb、PLT外，還對中性粒細胞(NEUT)、嗜酸性粒細胞(EO)、嗜堿性粒細胞(BASO)、淋巴細胞(LYMPH)及單核細胞(MONO)進行分類計數。

1.5統計學處理 采用SPSS18.0軟件對數據進行分析處理，方差分析對數據進行分析處理，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1RBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖1。-20 ℃冷凍條件下，保存1、3、7 d時RBC數量逐漸降低，差異有統計學意義(P<0.05)。4 ℃低溫保存條件下，保存1、3、7 d時RBC數量無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)。20 ℃室溫保存條件下，保存1、3 d時RBC數量無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)，保存7 d時RBC數量開始有所升高，差異有統計學意義(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖1 RBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.2WBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖2。-20 ℃冷凍條件下，保存1 d時WBC數量逐漸降低，在1～7 d時WBC數量與即刻測定結果比較依然降低，但無持續降低趨勢，差異均有統計學意義(P<0.05)。4 ℃低溫保存條件下，保存1 d內WBC數量無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)，保存1～7 d時WBC數量稍微降低。20 ℃室溫保存條件下，保存1、3、7 d時WBC數量持續升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖2 WBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.3PLT在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖3。-20 ℃冷凍條件下，保存1、3 d時PLT數量無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)，保存7 d時PLT大幅度升高，差異有統計學意義(P<0.05)。4 ℃低溫和20 ℃室溫保存條件下，保存1、3、7 d時PLT數量無明顯變化，差異均無統計學意義(P>0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖3 PLT在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.4Hb在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖4。-20 ℃冷凍條件下，保存1、3、7 d時Hb水平無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)。4 ℃低溫保存條件下，保存1、3 d時Hb水平無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)，保存3～7 d時Hb水平逐漸升高，差異有統計學意義(P<0.05)。20 ℃室溫保存條件下，保存1、3 d時Hb水平無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)，在3～7 d時Hb水平開始有所升高，差異有統計學意義(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖4 Hb在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.5-20 ℃冷凍條件下，不同保存時間WBC分類計數情況 見圖5。NEUT：保存1 d后，細胞數量逐漸降低，在1～7 d時細胞數量與即刻測定結果比較依然降低，但無持續降低趨勢，差異均有統計學意義(P<0.05)。LYMPH：保存1 d后，細胞數量逐漸升高，在1～7 d時細胞數量與即刻測定結果比較依然升高，但無持續升高趨勢，差異均有統計學意義(P<0.05)。MONO:保存1 d后細胞數量逐漸降低，在1～7 d時細胞數量與即刻測定結果比較依然降低，但無持續降低趨勢，差異均有統計學意義(P<0.05)。EO和BASO細胞數量均無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.64 ℃低溫條件下，不同保存時間WBC分類計數情況 見圖6。NEUT：保存1、3、7 d時細胞數量逐漸降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。LYMPH：保存1、3、7 d時細胞數量逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。MONO：保存1、3 d后，細胞數量逐漸升高，在3～7 d時細胞數量與即刻測定結果比較依然升高，但無持續升高趨勢，差異均有統計學意義(P<0.05)。EO和BASO細胞數量無明顯變化，差異均無統計學意義(P>0.05)。

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

圖5 -20 ℃冷凍條件下，不同保存時間WBC分類計數情況

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

圖6 4 ℃低溫條件下，不同保存時間WBC分類計數情況

2.720 ℃室溫條件下，不同保存時間WBC分類計數情況 見圖7。NEUT：保存1、3、7 d時細胞數量逐漸降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。LYMPH：保存1、3、7 d時細胞數量逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。MONO：保存1 d后，細胞數量逐漸升高，在保存1～3 d時細胞數量與即刻測定結果比較依然升高，但無持續升高趨勢，在保存3～7 d時細胞數量逐漸降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。EO和BASO細胞數量無明顯變化，差異均無統計學意義(P>0.05)。

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

圖7 20 ℃室溫條件下，不同保存時間WBC分類計數情況

2.8標本在不同時間、不同溫度條件下外周血圖片 見圖8。-20 ℃冷凍條件下保存，1、3、7 d后RBC大部分溶解破裂，因此外周血圖片基本看不到完整的RBC。4 ℃低溫條件下保存，3 d后鏡下可見分葉核，7 d內RBC數量基本無變化。20 ℃室溫條件下保存，3 d后WBC多為單個核細胞。

圖8 不同時間、不同溫度下外周血涂片

3 討 論

血常規檢測是一種對全血標本進行檢測的方法，主要包括血液中的RBC、WBC、PLT數量及Hb水平，以及對WBC進行分類計數。血常規檢測在臨床上是一種基本的輔助診斷手段，若要獲得較為準確的血細胞分析結果，需要考慮多方面的因素，例如：靜脈血的采集過程和采集方法、采血管抗凝劑、血液保存環境等[6]。在實際工作中，標本需要暫時保存的情況很多，例如：標本檢測過程中，儀器出現故障；有時需要將標本轉送到第三方實驗室檢驗，運送的過程中需要對標本進行保存。

20 ℃室溫條件下，在真空管內保存的標本隨著保存時間延長，平均紅細胞體積會逐漸升高，紅細胞比容也會隨之升高，但紅細胞平均血紅蛋白濃度會逐漸降低。隨著標本保存時間延長，細胞有自身的代謝，而且保存環境也有所改變，細胞體積、細胞核與胞漿比例、細胞活性都會隨之發生變化，此時WBC分類計數的準確性會大大降低，有可能機器根本無法正常分類[7]。PLT很容易集合在一起形成大顆粒，而用來檢測的機器只能通過PLT大小來辨別出PLT，這樣就可能導致機器將集合在一起的PLT當成小RBC來計數[8]。

可能導致標本干擾的因素很多，如WBC凝集、冷凝蛋白、冷球蛋白、纖維蛋白、巨大PLT會影響WBC測定；RBC凝集、小紅細胞癥、WBC增多、巨大PLT會影響RBC計數；高脂血癥、異常蛋白會干擾Hb測定；RBC凝集、小RBC、WBC增多、嚴重糖尿病、尿毒癥、球形RBC會影響紅細胞比容測定；PLT凝集、假性PLT減少、巨型PLT、小紅細胞癥、分裂的RBC、WBC碎片、冷凝蛋白、冷球蛋白等會影響PLT測定。

在本試驗中隨機抽取了查體中心的120例健康體檢者的EDTA-K2抗凝靜脈血標本120份，將120份標本分為3組，每組各40份，第1組：置于-20 ℃冰柜冷凍，第2組：置于4 ℃冰箱保存，第3組：置于20 ℃室溫保存，分別檢測即刻、1 d、3 d和7 d時的血細胞參數。

本研究發現，血常規標本最適合在4 ℃低溫條件下保存，標本保存1 d時RBC、WBC、PLT和Hb檢測結果無明顯變化，但對WBC分類有影響,在20 ℃室溫條件下保存1 d時WBC數量逐漸升高，RBC基本無明顯變化，由此可得出，在血細胞分析中，RBC比WBC保持結果無明顯變化的時間長，WBC結果的穩定性受環境的影響很大[9]。三磷酸腺苷會促使PLT集合在一起，大量二磷酸腺苷來自于臨床上三磷酸腺苷的分解，而二磷酸腺苷是一種PLT誘導劑，會促使PLT發生聚集，因此，PLT計數的準確性會受到影響[10]。

因此，在臨床工作中采集標本后應該立即送檢，檢驗科從采集標本到實驗室檢測標本的時間不應該超過1 d，如果要保存標本應該放在4 ℃條件下保存。血常規標本最適合在4 ℃低溫條件下保存，標本保存1 d時對RBC、WBC、PLT和Hb結果無明顯影響，但對WBC分類計數有影響。在-20 ℃和20 ℃室溫下，NEUT逐漸減少，LYMPH逐漸增多；在4 ℃下1 d內NEUT、LYMPH無明顯變化，1 d后NEUT逐漸減少，LYMPH逐漸增多。

本文探討了血液標本在不同保存時間與保存溫度條件下血細胞各項參數變化情況，研究結果提示，血常規標本最適合在4 ℃低溫條件下保存，并且臨床上采集標本后立即送檢結果最好。但臨床送檢的標本不可能馬上得到檢測，即刻檢測雖在理論上可行，但缺乏操作性。臨床標本均是在20 ℃室溫放置當天檢測完畢，因此，研究20 ℃室溫下24 h內不同時間點血細胞各項參數的變化更能貼近臨床現狀。下一步將對此進行詳細研究，為更適合臨床操作的保存條件提供理論基礎。