熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA和ELISA法檢測乙肝病毒標志物的臨床價值

劉 嬌 王大明 宋春麗 劉 青 肖利佳 柯娟玉

南方醫科大學深圳醫院臨床醫學檢驗中心，廣東深圳 518000

乙肝作為一種病毒性肝炎，是我國臨床上一類傳染性疾病，對患者的生命健康造成極大威脅[1-2]。在對該項疾病進行診斷時，主要是采用HBV-M診斷方法，來判定患者的病情嚴重及傳染度情況，通過檢測結果能夠直觀的反映出患者的免疫應答狀態[3-4]。近年來，隨著生物學及醫學領域的快速發展，RT-PCR被廣泛應用于臨床疾病診斷中，能夠高效的檢測出乙肝患者的各項指標，為臨床治療工作的開展提供可靠的依據[5-6]。本文將4355例乙肝患者作為研究對象，探究熒光定量PCR法及ELISA法在乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒標志物（HBV-M）中的臨床診斷價值，現報道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

本研究選取于2016年1月～2018年2月在本院檢測出來的乙肝患者共4355例，男2532例，女1823例，年齡6～68歲，平均（42.3±2.5）歲。身高108～180cm，平均（162.3±2.5）cm；體重為16.2 ～ 100kg，平均（50.0±3.5）kg。在本次檢測中，所使用的檢測儀器為基因擴增分析儀（廠家：伯樂Bio-Rad，型號CFX96），ELISA試劑盒（默沙克生物apom）。納入標準：（1）經診斷，患者被診斷為乙肝病毒患者，在近期內未接受抗病毒治療者；（2）患者自愿參與到本次調查中，并簽署知情同意書者。排除標準：（1）患有嚴重精神疾病者；（2）同時伴有甲、丙、丁等其他類型的肝炎患者；（3）并發囊腫及惡性腫瘤患者；（4）存在嚴重心腦血管疾病患者。

1.2 方法

在本次檢測中，主要是采用HBV免疫學檢測方法，使用ELISA法對患者進行HBV-M模式的定性檢測，檢測的乙肝病毒主要包括乙型肝炎e抗體、乙型肝炎病毒表面抗原、乙肝表面抗體等，在對檢測結果進行對比時，主要是運用酶標儀進行比色，在開展一系列的操作工作時，要求嚴格按照試劑說明書的要求，對檢測結果進行評定。在操作過程中應嚴格按照說明書中的評定結果及檢驗操作要求做好各項操作。采用HBV-DNA定量測定方法，使用FQ-PCR法測定患者的病毒水平，使用Roche LightCycler480型號的儀器，及FQ-PCR試劑盒，將試劑盒的定量測定范圍控制在103-107copies/mL，在開展操作時，應嚴格按照說明書的內容進行操作，以確保檢測結果的真實性及可信性。按照陰陽性進行分組，分成大三陽及小三陽。其中，大三陽包括：[1（+）、3（+）、5（+）]。小三陽包括：[1（+）、4（+）、5（+）模式 ]、[1（+）、4（+）模式 ]、[1（+）、3（+）模式 ]、[2（+）、4（+）、5（+）模式 ]、[2（+）、4（+）模式 ]、[5（+）模式 ]、[4（+）、5（+）模式 ]。

1.3 觀察指標[7]

觀察在 1（+）、3（+）模式，1（+）、4（+）模式，1（+）、3（+）、5（+）模式，1（+）、4（+）、5（+）模式，2（+）、4（+）模式，2（+）、4（+）、5（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式等不同 HBV-M 模式下，各組間的陽性率；觀察在不同的HBV-M模式下，HBV-DNA含量分布情況。

1.4 統計學處理

本研究數據通過SPSS18.0軟件統計處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數資料以百分數表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同HBV-M模式下RT-PCR陽性的檢測結果比較

4355 例乙肝患者，1（+）、3（+）、5（+）模式的陽性率最高，與其他組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同HBV-M模式下檢測結果比較

2.2 不同模式下HBV-DNA含量分布情況

4355 例乙肝患者，1（+）、4（+）、5（+）模式的患者數量最多，2（+）、4（+）模式患者數量最少，與其他組間對比有差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同模式下HBV-DNA含量分布情況

3 討論

乙肝是臨床上一項常見的疾病，通過檢驗，乙肝病毒呈陽性者，在臨床上表現出慢性肝炎的患者，病程時間超過發病日期或半年者[8-9]。患者的臨床癥狀表現出腹脹、畏食、乏力、惡心、腹脹等癥[10-11]。通過對該項疾病的發病原因進行了解可知，HBV攜帶者及乙型肝炎患者是疾病的主要傳染源，傳染源為血液制品、血、母嬰、皮膚黏膜及性接觸傳播等[12-13]。為了提升疾病治療效果，需要做好臨床診斷工作。傳統的乙肝病毒檢查方法無法直接的反映出患者疾病的具體情況，無法為乙肝疾病的治療提供可靠的依據。目前，臨床上乙肝病毒主要采用熒光定量PCR法及ELISA法，為乙肝病毒的高效治療提供依據。PCR法在使用過程中能夠有效的檢測出患者機體內的HBV-DNA水平，可以早期病毒擴增，為患者提供指導用藥，但是也存在一定的窗口期。而ELISA檢測方法能夠直觀的反映出乙肝患者機體的免疫應答狀態，檢測靈敏度高，能夠直觀的反應出患者疾病的具體情況[14]。

本文共選取4355例乙肝患者，將HBV-M模式公分為 1（+）、3（+）模式，1（+）、4（+）模式，1（+）、3（+）、5（+）模式，1（+）、4（+）、5（+）模式，2（+）、4（+）模式，2（+）、4（+）、5（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式8種模式，本文表1中研究結果顯示，1（+）、3（+）、5（+）模式的陽性率最高，2（+）、4（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式的陽性率為0，與其他組間對比差異有統計學意義（P＜0.05）。本文表2中研究結果顯示，4355例乙肝患者，1（+）、4（+）、5（+）模式的患者數量最多，2（+）、4（+）模式患者數量最少，與其他組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。此項研究結果說明在患者機體內的HBV-DNA水平判斷上，PCR能夠直觀的反映出患者的機體水平，而ELISA完成了對患者HBV-M的判斷，對兩種方法聯合使用，為臨床確診及治療工作提供了指導性意義。

綜上所述，在患者病情不嚴重及傳染度低的情況下可采用傳統測量方法。反之則需要使用PCR法聯合ELISA法。在不同的HBV-DNA定量測定模式下，所測量出來的陽性率及HBV-DNA水平存在著一定的差異，為了提升乙肝病毒的臨床診斷準確率，在乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒標志物(HBV-M)中的臨床診斷中，應采用熒光定量PCR法及ELISA法，為乙肝病毒的高效治療提供依據。尤其是在患者抗體的窗口期，使用PCR聯合ELISA檢測方法，有助于確保輸血的安全性。