肺炎支原體感染患兒視黃醇結合蛋白和T細胞亞群的變化及意義

梁導艷，郭春艷，封 青，黃曉燕，胡 軍

(陜西省人民醫院 中心實驗室,陜西 西安710068)

肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae，MP) 即支原體感染引起的肺炎，是幼兒時期最常見的呼吸道疾病之一，占小兒肺炎的10%-30%[1]。近年來，由于秋冬季霧霾天氣影響，患支原體肺炎的兒童呈上升趨勢，并且發病年齡逐漸偏小，以嬰幼兒、學齡兒為主要發病群體[2]。MP是社區獲得性小兒疾病中常見的病原之一，所占的比例有逐年增長的趨勢[3,4]。大多以支氣管炎、氣管炎、咽炎起病，病程緩慢。主要臨床癥狀有發熱、陣發性咳嗽、肺部伴有喘鳴音和濕羅音，肺部見斑點狀陰影[5]。呈持續性或弛張型發熱。多以呼吸道感染為主，并伴有多器官損傷等其他癥狀[6]。文獻指出[7]，視黃醇結合蛋白(RBP)與肝臟損傷密切相關，可以反映病情的程度，是目前反映肝功能早期損害的有效指標，對肝臟早期損害的檢查和治療效果的監測具有重要意義。外周血T細胞亞群測定是反映機體兔疫功能狀態重要指標。本研究探討兒童肺炎支原體感染后RBP及T細胞亞群的水平變化，進一步研究其對肝功能及免疫功能的影響，給臨床后續治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1研究材料

實驗組選取本院2017年10月至2017年12月兒童支原體肺炎急性期患病兒童65例，其中男孩35例，女孩30例，平均年齡4.8歲。支原體肺炎患兒符合《諸福棠實用兒科學》標準[8]。無其他疾病，無其他用藥史，未使用免疫抑制劑，未出現其他合并癥。支原體肺炎IgM陽性，滴度≥1∶80。對照組選取同期健康兒童40例，男孩22例，女孩18例。平均年齡4.3歲。兩組兒童性別和年齡方面沒有差距，不具有統計學意義。

1.2研究方法

1.2.1采集樣本 實驗組和對照組分別采取晨起空腹靜脈血液4 ml，2 ml放置于促凝管中，用于視黃醇結合蛋白血清檢測。2 ml放置于EDTA-K2抗凝管中,用于流式細胞儀全血檢測。

1.2.2視黃醇結合蛋白(RBP)檢測 儀器為日立7170全自動化分析儀，應用免疫散射比濁法，試劑和標準品分別由寧波美康和上海北加生化試劑有限公司提供。

1.2.3流式細胞儀檢測 采用三色熒光標記單克隆抗體，異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗CD4抗體；藻紅蛋白(PE)標記的抗CD8抗體；多甲藻素葉綠素蛋白(PerCP)標記的抗CD3抗體，均來自美國BD公司。三色校準微球來自美國BD公司。儀器使用流式細胞儀BD FACSCalibur(美國BD公司)。從抗凝血管中吸取全血50 μl加入到流式細胞儀專用管中(TruCount管)，再向其中加入熒光素標記抗體10 μl混勻，室溫避光孵育20 min，加入溶血素FACSLysing(美國BD公司)2 ml，再次室溫避光孵育15 min，然后放入離心機300 g，5 min離心，將上清倒入廢液桶中，管中加入0.5 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻，打開流式細胞儀BD FACSCalibur，用三色熒光微球進行校準，使所有標本檢測條件一致。細胞收集1×104個/管，采用BD CellQuest軟件進行細胞熒光強度和百分比分析。

1.3統計學方法

使用SPSS21.0軟件進行統計。首先選用Levene檢驗方差是否齊，然后選用t檢驗比較兩組是否有統計學意義。

2 結果

2.1血清視黃醇結合蛋白(RBP)檢測結果RBP觀察組為19.56±9.09，對照組為47.47±13.65，觀察組明顯低于正常對照，P<0.05,差異具有統計學意義。見表1。

2.2外周血T細胞亞群檢測結果T細胞亞群檢測中,CD3+、CD3+CD4+百分比和CD4/CD8比值明顯低于對照組，P<0.01；CD3+CD8+明顯高于對照組，P<0.01；均具有統計學意義。見表1，圖1、圖2。

表1 兩組血清視黃醇結合蛋白及全血T細胞亞群的檢測結果

注：A組和B組比較，CD3+CD4+明顯降低

注：C組和D組比較，CD3+CD8+明顯升高

3 討論

RBP是由183個氨基酸殘基構成分子量為21 KD的一種小分子蛋白。pH為4.4-4.8，沉降系數3 s，半衰期為3-12 h[9]。主要由肝臟內質網合成，小部分由肝外合成，廣泛存在于人體的血液、尿液、腦脊液和其他體液中[10]。主要功能是用來轉移肝臟中的視黃醇，是體內視黃醇(維生素)的運載蛋白，亦可以用于評判人體營養水平的變化[11]。在體內90%RBP與視黃醇結合，形成視黃醇RBP復合物，10%為結合的RBP可以自由從腎小球濾過而進入原尿[12]。RBP能夠特異的結合和運載人體中的視黃醇至周圍靶細胞組織，從而維持人體內的正常生命活動需求，是反映肝功能的一項敏感指標。由于其半衰期短、分子量小，能夠快速的發生變化，敏感且有效的反映早期肝功能受損程度，對肝功能早期影響具有非常重要的指示作用[13]。有關文獻報道中指出[14]，RBP在肝臟中合成分泌，若肝臟受損，RBP 生成量就會下降，血液RBP含量會明顯降低，因此更能準確反映肝臟功能變化。本研究顯示，兒童肺炎支原體感染時觀察組較對照組，血清中的RBP會明顯降低。即RBP的分泌及合成受到阻礙，表明肝功能受到損傷。因此，兒童感染MP時，檢測RBP很有必要性，可直觀的反映患兒肝功能是否受損。一旦檢測出RBP降低，很可能肝功能會受到損傷，應及時做出治療方案，減免肝功能受到進一步損傷。

T細胞亞群是有效維持機體免疫功能的重要免疫指標，CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值是本類免疫狀態的直觀反應指標，在免疫反應過程中起到誘導、輔助、抑制和毒殺等作用[15]。CD3+是總T細胞，參與機體細胞免疫應答，判斷免疫狀態低下或過激；CD3+CD4+是T輔助/誘導淋巴細胞；CD3+CD8+是T抑制/毒性淋巴細胞。機體正常情況下，各種淋巴細胞亞群(T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞)保持一定的數量和比例，相互作用，穩定調節，維持機體正常的免疫功能[16]。細胞免疫取決于CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值的調節。當CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值發生紊亂時，則容易導致疾病的發生[17]。文獻報道，兒童感染MP時，CD3+CD4+、 CD3+CD8+T細胞可使IL-4、IL-6和IL-10細胞因子的表達升高。可進一步使Th2成為優勢細胞，產生更多的細胞因子及炎性介質。從而使B淋巴細胞產生多種抗體，導致免疫功能失調[18]。還有文獻指出[19，20]，兒童感染MP后，由于體內多種器官、組織共同的抗原部分所產生的抗體可與自身抗原結合形成抗原抗體復合物，引起免疫應答反應，產生炎性因子，導致除呼吸系統外的其他多個系統疾病的產生，導致CD4+降低，CD8+升高，CD4/CD8比值顛倒。免疫功能失調。本研究發現，觀察組和對照組相比，CD3+、CD3+CD4+百分比及CD4/CD8比值均降低，CD3+CD8+百分比升高，且均具有統計學意義。和上述文獻報道的均相符。表明，機體感染MP后淋巴細胞各項指標都存在改變，不同程度的升高或降低，自身免疫功能紊亂。

MP感染嚴重時，會累及多系統及多臟器損傷，合并免疫功能紊亂。本研究中，MP患兒肝功能異常并未出現肝實質性病變，均為可逆性損害，經過治療均可恢復正常。研究發現，MP患兒肺炎感染的嚴重程度直接影響免疫功能的程度改變。感染越嚴重，免疫功能越低下，肝功能恢復時間越久。因此，兒童感染MP后，免疫功能的水平可間接的影響肝功能變化。

綜上所述，兒童感染MP后，RBP會顯著降低，合并T細胞亞群會發生改變，從而導致早期肝功能受損及免疫功能紊亂。臨床上在發現MP感染的同時，應聯合檢測RBP及T細胞亞群水平變化，積極干預治療肝損傷及免疫功能紊亂。及早控制病情的發展，達到早預防、早發現、早治療的目的。