膠體金標記技術在免疫檢測中的應用探討

楊瓊

【摘要】目的：探討膠體金標記技術在免疫檢測中的應用探討。方法：選取200份不同的血清用于檢測，研究組應用檸檬酸三鈉還原法制作膠體金顆粒，并制作成免疫檢測試條，用于檢測血清中肝炎病毒抗原；對照組應用酶免疫法法檢測血清。結果：研究組檢測法靈敏度高于對照組（P<0.05）。結論：在用于免疫檢測中，膠體金標記技術效果理想，臨床上應當進一步推廣應用。

【關鍵詞】膠體金標記技術；乙型肝炎病毒抗原；酶免疫法法；免疫檢測

【中圖分類號】R249 【文獻標識碼】B 【文章編號】2095-6851（2018）10-050-01

膠體金標記技術是一種新研發出來的的免疫標記技術，與同位素、熒光素、膠乳、酶相比，具有避免產生放射性污染、沒有其他因素干擾、定位更準確的優點[1]。膠體金標記技術的原理是利用還原法還原氯金酸，得到金顆粒，以膠體金顆粒作為顯色劑或標志物，用于標記血清內抗原抗體反應。膠體金標記技術被廣泛的應用在制造體外診斷試劑、蛋白染色、電鏡、免疫印跡等方面[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

準備材料：氯酸金、檸檬酸三鈉、因肝炎住院患者的血清標本、HBsAg酶免疫診斷試劑盒、HBsAg靈敏度標準參比品、單克隆抗HBs。

1.2 方法

1.2.1 對照組方法 取血清于試管中，將酶復合物稀釋后，加入取出來的血清里，組成酶標抗體或抗原，再加入底物，底物被酶催化為有色底物，根據顏色來判斷陰性、陽性。

1.2.2 研究組方法 用純水將氯酸金溶解，煮沸后加入1.5ML的濃度為1%的檸檬酸三鈉溶液，繼續加熱將溶液煮沸。5分鐘后將溶液冷卻，再加入2ml的抗HBs IgG，并快速攪拌，后續加入牛血清蛋白，用氯化鈉溶液將其攪拌均勻，最后用離心法將上清液分離出來，獲取沉淀物。分離出來的沉淀物為金-抗HBs結合物，與吸水濾紙、硝酸纖維素和吸水纖維制作成免疫層析測試條。

1.3 觀察指標

將免疫層析測試條插入準備好的新鮮血清內，20分鐘內出現測試結果，測試條上若出現兩條紅色的線則說明測試結果為HBsAg陽性，若只有一條紅線則為陰性，沒有出現紅色線則為試劑無效，需重新配制。

1.4 統計學方法

數據應用SPSS18.0進行分析，其中計數進行X2（%）檢驗，計量進行t檢測（x±s）檢驗， P<0.05提示有顯著差異。

2 結果

研究組的測試靈敏度高于對照組（P<0.05），具體見表1。

3 討論

在目前臨床醫學上檢測病毒表面抗原大多采用酶免疫法，但酶免疫法具有耗費時間長，操作程序繁復的缺點[3]。為使檢測工作更簡化方便，使檢測的靈敏度更高，本文研究通過檢測血清中肝炎病毒，將膠體金標記技術與傳統檢測肝炎病毒的酶免疫法作對比發現，膠體金標記技術在免疫檢測中不僅操作簡單方便，縮短檢測時間，而且具有更高的靈敏度。膠體金是將還原劑例如抗壞血酸、白磷、枸櫞酸鈉等于氯酸金發生反應，析出大小不同的金顆粒，形成帶有負電離子的膠體溶液，并通過靜電作用，形成穩定狀態。膠體金在弱堿性液體環境中的帶有負電荷，由于與蛋白質的結合是根據近點作用，并不會改變蛋白質的性質。與酶免疫法的分類法相同，簡體免疫金技術也分為固相和液相膠體金技術。最初的液相膠體金標記技術被用作顯色劑，也被成為免疫膠體金染色法。免疫膠體金染色法由單標記發展為用不同大小的金顆粒對物質進行多重標記，使靈敏度更高。但此種免疫法有一缺點，需要的抗原或抗體濃度很高才能使靈敏度更高。而且液相膠體金的金顆粒并不穩定，存放時間長后容易產生聚集現象[4]。為避免這些缺點，醫學專家研究出了免疫金銀染色法。免疫金銀染色法中的銀離子吸附在金顆粒周圍，將染色效果放大，就算檢測抗原或抗體被稀釋，檢測效果也和高濃度相同，如此便節省了很多膠體金。免疫金銀染色法中銀離子吸附大顆的膠體金顆粒，使大顆的金顆粒更穩定，而小顆的金顆粒雖然吸附的銀離子少，但本身的穩定性更高，保證了免疫檢測的靈敏度。固相免疫膠體金標記技術與液相的相同，區別僅在于膠體金顆粒的吸附物為固體支持物，而后進行免疫檢測。在1986年，膠體金標記技術被首次應用在免疫學方面，并取得了一些成果，膠體金標記技術得到了人們更多的重視。由還原法制備出的膠體金標記不同的簇分化抗原單抗，可以檢測出血清中淋巴細胞上的簇分化的抗原，并根據淋巴細胞的不同進行分類[5]。用膠體金免疫法檢測肝炎病毒的原理為用膠體金中的金顆粒標記肝炎病毒抗體，與膠體金顆粒結合的金-抗肝炎病毒結合物與樣品血清中的肝炎病毒結合，隨著硝酸纖維素膜轉移，形成抗HBs-HBsAg-金標抗體的夾心物，使免疫檢測試紙中出現兩條紅色的線。膠體金免疫法不僅具備免疫反應的特點，還具有色譜層析的的特點，通過吸水纖維結合抗肝炎病毒，層析作用將肝炎病毒-金標抗體復合物與纖維素膜發生連續反應，使免疫層析法更靈敏。而且這種方法不需要洗滌，也不需要使用儀器進行操作，減少了試劑被污染的幾率，使操作更方便。

綜上所述，膠體金標記技術在免疫檢測中具有準確、靈敏、快速地特點，在臨床上診斷疾病中具有獨特、不可替代的作用，值得臨床上進一步推廣。

參考文獻：

[1] 孫培培，張潔，鄭江偉，等.膠體金免疫層析試紙快速檢測甘草酸方法的建立[J].藥物分析雜志，2017（10）：1769-1775.

[2] 夏偉偉，姜國勝.膠體金免疫層析法復檢HBsAg陽性標本的可行性分析[J].中國病原生物學雜志，2016（10）：897-899.

[3] 王夢露，王云龍，石曉衛，等.抗環瓜氨酸肽抗體膠體金定量檢測方法的建立[J].中國現代醫學雜志，2016，26（12）：25-29.

[4] 陳珍珍，趙越，王占黎，等.自制膠體金試劑盒對布魯氏菌病的診斷效果評價[J].現代預防醫學，2016，43（15）：2802-2805.

[5] 周志杰，劉珠果，戴秋云.石頭魚毒素膠體金檢測試紙條的研制[J].軍事醫學，2016，40（11）：905-908.