不同布氏菌病活疫苗免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律試驗(yàn)

趙丹彤，吳梅花，侯振宇，楊春，魯燕，吳詠梅，范秀麗，魏學(xué)峰，劉國英

（金宇保靈生物藥品有限公司，呼和浩特 010030）

0 引言

布魯氏菌病（brucellosis 又稱布氏菌病或布氏桿菌病，簡(jiǎn)稱“布病”）是由布魯氏菌（brucella）引起的人畜共患傳染病，廣泛分布于世界各地，多種動(dòng)物和禽類對(duì)布魯氏菌均有不同程度的易感性[1]。自然感染以羊、牛和豬常見，其特征為生殖器官、胎膜及多種器官組織發(fā)炎、壞死和肉芽腫的形成，在臨床上主要表現(xiàn)為波浪熱、流產(chǎn)、不孕、睪丸及關(guān)節(jié)炎等癥狀[2]。但近年羊布氏菌病感染率呈明顯上升趨勢(shì)，不但嚴(yán)重危害我國畜牧業(yè)（包括養(yǎng)羊業(yè)在內(nèi)）的健康發(fā)展，還嚴(yán)重威脅國內(nèi)部分地區(qū)人們的健康、食品安全以及全社會(huì)的公共衛(wèi)生安全。

1 材料與方法

1.1 疫苗

實(shí)驗(yàn)室制備的布氏菌病活疫苗（Rev.1株），批號(hào)為53003，布氏菌病活疫苗（S2株），批號(hào)為5393032，均由金宇保靈生物藥品有限公司提供。

1.2 檢測(cè)試劑

布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)抗原、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、布魯氏菌病虎紅凝集試驗(yàn)抗原，均購自中國獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)動(dòng)物來源于定點(diǎn)供應(yīng)基地，經(jīng)布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)為陰性的綿羊70只。

1.4 試驗(yàn)分組與免疫

第1組為布氏菌活病疫苗（Rev.1株）免疫組，共計(jì)30只綿羊。將疫苗用布氏菌活病疫苗（Rev.1株）專用稀釋液溶解稀釋至20頭份/mL（按每頭份為1滴，1滴約0.05 mL計(jì)算），用專用滴眼器進(jìn)行眼結(jié)膜接種，每只羊滴眼1頭份（0.05 mL），含1×109CFU/頭份。

第2組為布氏菌病活疫苗（S2株）免疫組，共計(jì)30只綿羊。將疫苗用生理鹽水溶解稀釋至1頭份/mL，進(jìn)行口服免疫，每只羊口服1頭份，含1×1010CFU/頭份。

第3組為空白對(duì)照組，共計(jì)10只，不接種疫苗，相同條件下隔離飼養(yǎng)。

1.5 試驗(yàn)步驟

所有試驗(yàn)羊分別于免疫前、免疫后14、21、28、49、60、90、120、150 d采血，分離血清，采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）和試管凝集試驗(yàn)（SAT）試驗(yàn)進(jìn)行抗體測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）抗體檢測(cè)

2.1.1 判定標(biāo)準(zhǔn)

虎紅平板凝集試驗(yàn)是國內(nèi)外常用的一種診斷技術(shù)。在一次性虎紅平板凝集反應(yīng)板上加0.03 mL被檢血清，再加入RBPT抗原0.03 mL，充分混勻，在5 min內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)凝集即為陽性。

2.1.2 檢測(cè)結(jié)果

2組疫苗免疫后14 d，檢測(cè)抗體陽性率均能達(dá)到70%以上，免疫后21～28 d達(dá)到抗體最高峰，120 d下降至20%以下。虎紅平板凝集試驗(yàn)見圖1，檢測(cè)結(jié)果見表1，2種疫苗免疫后抗體消長(zhǎng)情況見圖2。

表1 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）檢測(cè)結(jié)果 單位：%

2.2 試管凝集試驗(yàn)（SAT）抗體檢測(cè)

2.2.1 判定標(biāo)準(zhǔn)

將被檢血清用生理鹽水倍比稀釋，從1∶25至1∶3 200依次稀釋成不同的稀釋度，然后加入等量適當(dāng)稀釋的布魯氏菌凝集反應(yīng)抗原，混勻，放37 ℃溫箱中18～20 h，取出溫室放2 h后觀察結(jié)果，綿羊、山羊、豬和犬等家畜為1∶50，“++”以上為陽性。

圖1 虎紅平板凝集試驗(yàn)

圖2 2種疫苗免疫后抗體的消長(zhǎng)情況

2.2.2 檢測(cè)結(jié)果

兩組疫苗免疫后21～28 d，檢測(cè)抗體達(dá)到抗體高峰，且Rev.1株疫苗組在21 d抗體滴度達(dá)到最高值1∶3 200，但S2株疫苗組一直未達(dá)到1∶3 200。試管凝集試驗(yàn)見圖3，檢測(cè)結(jié)果見表2，2種疫苗免疫后抗體消長(zhǎng)情況見圖4。

表2 試管凝集試驗(yàn)（SAT）檢測(cè)結(jié)果 單位：%

圖3 試管凝集試驗(yàn)

圖4 2種疫苗免疫后抗體的消長(zhǎng)情況

3 討論與結(jié)論

免疫結(jié)果表明，2種疫苗接種羊只后均沒有出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。布氏菌活病疫苗（Rev.1株）免疫14 d后，抗體陽性率達(dá)到93%，21～28 d抗體達(dá)到高峰，抗體陽性率平均為97%，49 d后抗體逐漸下降，開始轉(zhuǎn)陰，90 d抗體平均陽性率下降至40%，轉(zhuǎn)陰率約為50%，210 d抗體幾乎全部轉(zhuǎn)陰（抗體陽性率3%）。布氏菌病活疫苗（S2株）免疫14 d后，抗體陽性率達(dá)到70%，21～28 d抗體達(dá)到高峰，平均79%，49 d后抗體逐漸下降，開始轉(zhuǎn)陰，90 d抗體平均陽性率下降至13%，210 d抗體幾乎全部轉(zhuǎn)陰（抗體陽性率7%）[3]。

結(jié)果表明，2種疫苗免疫羊只后均產(chǎn)生較好的免疫效果。免疫14～120 d抗體消長(zhǎng)期間，布氏菌活病疫苗（Rev.1株）比布氏菌病活疫苗（S2株）抗體陽性率高20%，而且羊只接種布氏菌病活疫苗（Rev.1株）后，抗體轉(zhuǎn)陽快，轉(zhuǎn)陽率高，轉(zhuǎn)陰快，便于鑒別疫苗的免疫和自然感染，有利于布病凈化。