三種不同加樣模式對ELISA法檢測乙肝核心抗體結果的影響

張麗莉，蔡安季

(1、深圳大學醫院檢驗科，廣東 深圳 518060；2、深圳市第六人民醫院檢驗科，廣東 深圳518000)

抗-HBc的檢測在乙型肝炎的診治等方面具有重要的作用[1]，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測乙肝病毒抗-HBc已成為應用最廣泛的檢測技術，目前，抗-HBc檢測要求是對血清進行1:30倍稀釋，當面對大量的體檢標本時，其工作量極其大，同時也增加了操作的復雜性。我們通過建立三種不同的架模式。運用ELISA法檢測1200名入學體檢大學生的血清乙肝病毒核心抗體，分析其對抗-HBc陽性檢出率的差異。

1 材料與方法

1.1 標本 清晨空腹采集我校1200名入學體檢的大學生的靜脈血，年齡18～24歲，平均20.1歲。

1.2 試劑及儀器 核心抗體ELISA法檢測試劑盒，上海榮盛生物技術有限公司提供；酶標儀美國BIO-RAD680；洗板機北京拓普DEM-111型。

1.3 方法

1.3.1 采血2h后，離心分離血清，2～8℃冰箱保存，48h內完成檢測。

1.3.2 標準加樣模式 (1)嚴格按照說明書操作，血清1:30倍稀釋，每孔加入50μl，各設陰、陽性及空白對照。

1.3.3 加樣模式 (2)血清不稀釋，每孔直接加入10μl，各設陰、陽性及空白對照。

1.3.4 加樣模式 (3)血清不稀釋，每孔直接加入50μl，各設陰、陽性及空白對照。

1.3.5 除空白對照不加入酶標抗體，其余每孔均加入50μl酶標抗體，溫育30min，洗板機洗板5次，再加入底物A、B，室溫顯色10min，加入終止液，最后使用酶標儀檢測0D值。

1.3.6 統計學處理 運用統計學的χ2擬合優度檢驗，標準值為 χ2=6.635(P＜0.01)。

2 結果

2.1 結果判讀 HBcAb檢測采用競爭法，其中樣本OD值S/CO≥1為陰性，反之，為陽性。

2.2 三種不同加樣模式檢測1200例核心抗體結果分析，見表1。

3 討論

ELISA法來檢測乙肝病毒核心抗體標志物，其結果的準確性較為可靠，但加樣方法比較復雜，主要是因為要進行對血清標本1:30倍的稀釋，耗費的時間較長，而直接加入10μl、50μl的血清，加樣時間比較短,操作簡單。我們的實驗結果表明，與標準的加樣模式(1)比較，加樣模式(2)：直接加入血清10μl，乙肝病毒核心抗體陽性率變化不顯著，無統計學意義；而加樣模式(3)：直接加入血清50μl，乙肝病毒核心抗體陽性率明顯升高，具有統計學意義，這可能是由于當直接加入 50μl血清樣本時，酶標抗體-HBc與反應板上包被的HBcAg結合機會有所減少，從而嚴重的影響了結果的檢測，從抗原和抗體反應的比例分析，當過量的待測抗體與包被的抗原結合，出現明顯的帶現象，有研究報道單項抗HBc陽性的標本中存在低滴度和假陽性結果[2]，所以，加樣模式(3)不適合ELISA法檢測分析乙肝病毒核心抗體標志物。然而，加樣模式(2)，雖然不是標準的加樣模式，但按照其加樣分析處理，結果與標準的加樣模式(1)比較，其檢測結果無明顯的差異，當進行大規模的體檢時：即檢測樣本含量比較大時，加樣模式(1)在稀釋血清時，每人需要1支試管，操作比較復雜，會造成一定的人力和物力的浪費，因此，在進行大量體檢標本檢測時，運用ELISA法分析乙肝病毒核心抗體，直接加入血清10μl的加樣模式，在一定的程度上具有省時、經濟、環保的作用，提高工作效率，比較適合于學校等機構大批量體檢標本的檢驗。

表1 三種不同加樣模式檢測1200例核心抗體的陽性檢出率

[1]何風瓊,粱 軍,簡 政.乙型肝炎患者血中抗HBc-IgM檢測的臨床意義[J].現代醫藥衛生,2006,22(10):1494-1495.

[2]成 軍,謝 玨,王國政,等.乙型肝炎血清學標志物單項抗-HBc-IgG陽性結果的解釋及臨床意義[J].國際檢驗醫學雜志,2006,27(3):203-205.

[3]吳淑梅,林 云,王 輝,等.競爭抑制法檢測抗-HBc總抗體的影響因素及對策[J],2006,21(4):376-379.