改良布氏肉湯用于解脲脲原體的保種研究

劉光金，李樂平，張日妹

(深圳市龍崗區平湖人民醫院檢驗科，廣東 深圳 518111)

改良布氏肉湯用于解脲脲原體的保種研究

劉光金，李樂平，張日妹

(深圳市龍崗區平湖人民醫院檢驗科，廣東 深圳 518111)

解脲脲原體；保存；布氏肉湯；改良

解脲脲原體(mycoplasma urealytium)是臨床上引起非淋菌性尿道炎最為常見的病原體之一，能引起男性和女性泌尿生殖道的急性和慢性感染，是導致男性不育和女性繼發不孕的重要原因[1]，因此對于解脲脲原體各方面生物學特性的研究逐漸成為研究解脲脲原體的重點。在研究解脲脲原體各生物學特性的過程中，必然涉及到臨床分離菌株的保存和傳代問題，吳漢勇等[2]曾利用甘油培養液短期保存溶脲脲原體，為了探討能更長時間保存解脲脲原體的方法，筆者采用改良布氏肉湯保存解脲脲原體，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 病例為深圳市龍崗區平湖人民醫院性病科、泌尿科及婦科就診的患者，病史中否認近1周內使用過抗生素，具有非淋菌性尿道炎的癥狀和體征。其中男性患者主訴尿痛、尿頻、尿急伴尿道灼熱感，體征有尿道口有糊狀分泌物。女性患者主訴陰道分泌物增多并有異味，體征檢查宮頸有膿性分泌物，伴宮頸充血。用無菌棉拭子取材，其中男性患者取尿道分泌物或前列腺液，拭子插入尿道1～2cm，停約5～10s。女性患者取宮頸分泌物以及宮頸拭子，首先用一根拭子拭去宮頸口的黏液，再用另外一根拭子取材，插入宮頸約2～3cm，停約5～10s。標本采集后立即接種到 珠海市銀科生物技術應用研究所生產的支原體藥敏試劑瓶中。置37℃溫箱，5%～10%CO2培養24～48h。共收集臨床分離株96株。

1.2 保存液成分 采用改良的布氏肉湯培養基保存臨床分離株。參考張卓然等[3]的布氏肉湯配方配制，改良的布氏肉湯培養基的配方：胰胨10g，眎胨10g，NaCl 5g，重亞硫酸鈉0.1g，葡萄糖 10g，酵母浸膏 2g，加入 0.4%的酚紅 10ml，并用3%的鹽酸調pH值至6.0，分裝至每瓶70ml，15磅高壓蒸汽滅菌15～20min，冷卻后每瓶加入20%的無菌小牛血清20ml，25%的鮮酵母浸液 10ml，2%鹽酸半胱氨酸 100μl，2%尿素4ml，20 萬 U/ml的青霉素 0.5ml，5g/L 多粘菌素 B0.1ml， 校正pH至6.0。將分裝好的培養基凍入-20℃冰箱。臨用前分裝至無菌試管中，1.5～2ml/管至4℃冰箱備用。

1.3 培養與保存方法

臨床標本培養24h后或48h后，若發現培養基顏色轉紅，并且培養管澄清，立即進行移種，用移液槍吸取50μl加入到配制好的改良布氏肉湯培養管中，每株臨床分離株移種16 管，置 37℃溫箱、5～10%CO2培養 24～48h。 24h 后，若培養基顏色微轉紅，培養管澄清，立即取出并立即凍入-20℃冰箱(8支/株)和-70℃冰箱(8支/株)。定期復蘇，觀察成活情況。

2 結果

臨床分離株在不同溫度相同保存時間后成活情況，在-20℃冰箱保存時，32周和 48周存活率分別為 90.69%和86.5%，但72周存活率僅有54.2%。在-70℃冰箱保存時，32周和48周周存活率都為100%，而且72周存活率達96.9%，并且96周的存活率也達94.8%，而-20℃冰箱保存時只有13.5%。

3 討論

由于目前臨床上由解脲脲原體引起的非淋菌性尿道炎的發病率日趨上升，在歐美國家已經居性傳播疾病之首。而在對患者治療的過程中，抗生素的耐藥現象也逐漸出現并呈增加趨勢，并且發現臨床分離解脲脲原體菌株的一些生物學性狀也發生改變。因此加強對臨床分離株各種生物學性狀的研究，有助于臨床診斷和治療措施的選擇。而在研究的過程中，如何對分離的臨床株進行保存又顯得尤為重要。本研究采用改良的布氏肉湯培養基保存臨床分離株，從結果可以看出其-20℃冰箱保存時間可達48周，而-70℃冰箱的保存時間96周左右，保存效果良好，明顯優于吳漢勇等[2]利用甘油培養液保存溶脲脲原體的方法。并且發現在相同的保存培養基條件下-70℃低溫保存效果明顯較-20℃保存好(P＜0.05)。而且培養基中采用青霉素和多粘菌素替代了毒性強烈的醋酸鉈，易在普通實驗室使用。在采用珠海市銀科生物技術應用研究所生產的支原體藥敏試劑對臨床標本進行初次分離后再傳代本培養基時，陽性率達100%。因此，改良的布氏肉湯培養基是實驗室保存臨床分離解脲脲原體株的一種可行方法。

[1]楊麥貴,張竹映,鄭善鑾,等.精液中溶脲脲原體與不育癥相關[J].第四軍醫大學學報,2000,12:21.

[2]吳漢勇,吳發龍.解脲支原體保存方法探討[J].福建醫藥雜志,1997,19:6.

[3]張卓然.醫學微生物實驗學[J].第2版,北京:科學出版社,2005:215-216.

R375+.1,R446.5,R518.9

B

1674-1129(2010)06-0649-01

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.06.065