雞新城疫免疫血清學監測

劉金玲/河北省盧龍縣潘莊動物防疫站

雞新城疫（ND）俗稱雞瘟，是由雞新城疫病毒引起的雞的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病。最早發生于印度尼西亞的爪哇和英國的新城（Newcastle），1927年Doyle首次分離病原，并將該病命名為新城疫。目前，該病已廣泛流行與我國所有養雞地區，在家禽病毒病中，它的流行和危害性占首位。雞患新城疫常呈現敗血癥經過，主要特征是呼吸困難，下痢，神經機能紊亂，黏膜和漿膜出血。

雞新城疫抗體水平較低或未經免疫接種的雞群，發病率和死亡率可達80%～100%，免疫雞群的抗體水平中等時，發病率和死亡率的變化較大，低者只有2%～7%，稍高者可達20%～40%。在大中型養雞場，雞群有一定的抵抗力的情況下，雞新城疫主要是以一種非典型的形式出現，應引起重視。

本次實驗調查采用的是獸醫實驗室常用的方法，血凝實驗(HA)和血凝抑制實驗(HI)，新城疫抗體水平檢測使用該方法特異性好，操作方便，可同時進行大量的樣品檢測，對實驗環境要求不高等特點。

血凝實驗(HA)和血凝抑制實驗(HI)是獸醫實驗室常用的方法之一，新城疫抗體水平檢測使用該方法特異性好，操作方便，可同時進行大量的樣品檢測，對實驗環境要求不高等特點。但是，血凝實驗（HA）與血凝抑制實驗（HI）實驗也受很多因素的影響，由于影響因素復雜，不可能完全排除，但是，本次實驗結果數據都是每個樣品進行反復多次實驗得出的數據。

一、材料和方法

（一）被檢血清

從4個鄉鎮的養殖戶場里或農戶家里20個養雞場（戶）共計140只雞進行血液采集，其中合同肉雞20只，規模場蛋雞20只，圈養土雞20只，林下放養土雞50只，農戶散養土雞30只。采集后的血液樣品靜置凝固后自然析出血清，析出血清少的，用離心機進行離心后把血清離心出來。

（二）檢測材料

標準抗原(HA抗原)、1%雞紅細胞懸液、生理鹽水、96孔V型板、微量移液器

本次實驗方法是使用已知抗原檢測未知抗體，通過血凝實驗（HA）和血凝抑制實驗（HI）測出被檢血清中的抗體滴度。

1.血凝實驗（HA）。先用血凝實驗（HA），測出標準抗原的血凝價單位。25μl生理鹽水→標準抗原25為微升→25μl生理鹽水→1% RBC懸液25μl→震蕩后在37℃恒溫箱靜置30 min等待結果。

結果顯示抗原血凝價為1∶256

2.配制4?HAU抗原。通過血凝實驗（HA）測定，標準抗原為8 log，那么配制4 HAU抗原需要稀釋倍數為6倍。

3.血凝抑制試驗（HI）。接著血凝實驗（HA），繼續做下一檢測步驟。生理鹽水25μl(12孔50μl)→第一孔加入25μl，反復吸取6～8次，取25μl加入第二孔，第二孔反復吸取6～8次，取25μl加入第三孔，如此依次至10孔，10孔取25μl丟棄。→加入4 HAU抗原25μl，從第一孔加至11孔。→震蕩1 min，靜置培養20 min。→加入1%雞紅細胞懸液25μl，加至12孔，震蕩20 s，靜置培養等待結果。

二、結果

（一）不同雞場新城疫血清陽性率

通過HA和HI實驗對不同雞場采集的血清進行檢測，結果表明，在被檢測的140個血清樣品中，共檢出陽性數為129份，陽性率為92.14%，其中合同肉雞陽性率100%，規模場蛋雞陽性率100%，圈養土雞陽性率100%，林下放養土雞陽性率100%，農戶散養土雞陽性率63.3%。

（二）不同日齡雞群的抗體水平

在被檢測的140個血清樣品中，共檢出陽性129份。抗體水平滴度高的達到12 log2，低的為0，大多數都在6～10 log2之間。0～2 log2占7.3%，3～5 log2占10%，6 ～ 10 log2占 77.3% ，10 log2以上的占 5.4%。

表1 樣品抗體分布情況統計表

表2 樣品抗體滴度統計表

三、討論與分析

分析檢測結果，發現這些雞場雞新城疫抗體水平不整齊，特別是農戶散養土雞，抗體滴度差距大，抗體保護力高低不等。圈養土雞抗體滴度明顯過高，經詢問養戶，得知該雞群采取的免疫是飲水免疫（C30）和頸部皮下（新城疫油乳滅火苗Lasota株）注射同時做，所以抗體水平處于高位水平也屬正常，但是同群雞只之間存在個體差異，可能存在野毒感染或者免疫過程存在缺陷。林下放養土雞，存在抗體水平高低不齊的狀態，近36%的雞只抗體水平屬于偏低，不具有足夠的保護力。合同肉雞由于其養殖周期比較短，抗體水平基本處于中等水平，但是其保護力還是存在缺陷。經養戶同意，隨機解剖兩只發病雞只，其臨床表現為雞冠變薄，萎縮，精神呆滯，食欲較差，輕微咳嗽，拉黃綠色糞便。解剖病變為肝臟腫大，腺胃變薄、變軟，乳頭之間有出血，刀刮后出血明顯，氣囊輕微渾濁，表現為氣囊炎癥狀，腹腔有纖維樣分泌物，盲腸扁桃體腫脹出血，氣管粘膜充血，有粘液性分泌物。初步診斷為雞新城疫感染繼發大腸桿菌病。

參考文獻（略）