維生素D缺乏性佝僂病患兒血清25-羥維生素D與骨密度和細胞免疫狀況的關系探討

張 玉

(山西省運城市婦幼保健院,山西 運城044000)

維生素D(Vit D)缺乏性佝僂病是兒科常見疾病,是以Vit D缺乏引起機體鈣磷代謝紊亂、骨骼鈣化異常為主要特征的全身營養性疾病,多見于嬰幼兒[1]。Vit D不僅參與機體鈣磷代謝,且具有調節細胞增殖、分化及免疫功能等多種生理學功能[2]。研究發現[3-4],Vit D缺乏性佝僂病患兒除了可出現骨密度降低、骨骼異常外,常伴隨機體免疫力下降,易出現肺炎、腹瀉或貧血等并發癥。Vit D代謝與Vit D缺乏性佝僂病病情進展關系密切,但與患兒免疫水平變化的關系研究尚少。血清25-羥維生素D[25(OH)D]能夠直接反映機體Vit D的水平。因此,本研究通過檢測Vit D缺乏性佝僂病患兒與健康嬰幼兒血清25(OH)D及各T淋巴細胞亞群的變化,初步探討血清25(OH)D水平與細胞免疫水平的關系,以期為臨床中Vit D缺乏性佝僂病的病情評估及指導治療提供依據。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2016年5月至2017年5月運城市婦幼保健院兒保科收治的80例Vit D缺乏性佝僂病患兒為觀察組,其中男43例,女37例;年齡0～3周歲;喂養方式:完全母乳20例,母乳+人工21例,完全人工39例;23例伴有“X”或“O”形蹆、肋串珠、乒乓顱等骨骼異常,57例無明顯骨骼異常,但均有易驚、多汗等非特異性神經精神癥狀。選取同期醫院體檢中心的80例健康嬰幼兒為對照組,其中男42例,女38例;年齡0～3周歲;喂養方式:完全母乳18例,母乳+人工41例,完全人工21例。兩組一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。本研究經過醫院倫理委員會批準。

1.2 納入標準 ①符合Vit D缺乏性佝僂病診斷標準[5];②年齡≤3歲;③受試嬰幼兒監護人簽署知情同意書。

1.3 排除標準 ①健康嬰幼兒合并骨骼代謝相關疾病者;②合并消化、呼吸系統疾病者;③合并嚴重肝腎功能障礙者;④檢測前接受飲食、口服Vit D或鈣劑治療者。

2 方法

2.1 血清25(OH)D檢測 收集兩組受試嬰幼兒空腹血2 mL,室溫靜置60 min后,2 800 r p m離心10 min,取上層血清,采用酶聯免疫吸附法(ELISA,IDS公司)檢測各組血清25(OH)D水平,嚴格按照檢測程序操作,且保持室內質控結果為“在控”狀態。用3550 UV酶標儀(Bio-rad公司)檢測450 n m處吸光度值,根據建立的標準曲線計算血清25(OH)D水平。

2.2 骨密度檢測 采用OmnisenseTM7000P骨密度B超儀(Sunlight公司)檢測兩組受試嬰幼兒雙側脛骨中段骨密度,環境溫度控制在18～24℃。標準體模校正后保證精確性誤差和準確性誤差分別控制在1%、3%以內,將測量值與亞洲兒童數據庫為正常值,計算百分位數P值和標準差的離差Z值。

2.3 T淋巴細胞亞群檢測 采用全血免疫法檢測各T淋巴細胞亞群水平。采集兩組受試嬰幼兒清晨空腹乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈全血2 mL,混勻后在50μL全血中滴加熒光素標記的單克隆抗體10μL,混勻后室溫避光孵育20 min,滴入500μL溶血素充分混勻,30 min內用流式細胞儀檢測CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占淋巴細胞總數的百分比(體積法),并計算CD4+/CD8+比值(Bri Cyte E6型流式細胞儀及其配套抗體、溶血素、質控物;深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司,單克隆抗體:CD3-FITC/CD8-PE/CD45-per CP/CD4-APC)。

3 療效觀察

3.1 觀察指標 ①血清25(OH)D水平、骨密度標準差的離差Z值和百分位數P值對比;②各T淋巴細胞亞群占比及CD4+/CD8+比值對比;③血清25(OH)D水平與骨密度、T淋巴細胞亞群占比的關系分析。

3.2 統計學方法 采用SPSS 23.0統計軟件分析處理數據。計量資料以均數±標準差s)表示,采用t檢驗;血清25(OH)D水平與骨密度標準差的離差Z值、各T淋巴細胞亞群占比采用Pearson相關性檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

3.3 結果

(1)血清25(OH)D水平、骨密度比較 觀察組患兒血清25(OH)D水平、骨密度均顯著低于對照組,差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組嬰幼兒血清25(OH)D、骨密度標準差的離差Z值和百分位數P值比較

表1 兩組嬰幼兒血清25(OH)D、骨密度標準差的離差Z值和百分位數P值比較

注:與對照組比較,△P＜0.05

?

(2)各T淋巴細胞亞群占比及CD4+/CD8+比值比較 觀察組患兒外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)占比及CD4+/CD8+比值均顯著低于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組嬰幼兒各T淋巴細胞亞群占比及CD4+/CD8+比值比較(%

表2 兩組嬰幼兒各T淋巴細胞亞群占比及CD4+/CD8+比值比較(%

注:與對照組比較,△P＜0.05

?

(3)血清25(OH)D水平與骨密度、T淋巴細胞亞群占比的關系分析 觀察組血清25(OH)D水平與骨密度標準差的離差Z值和百分位數P值、CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占比、CD4+/CD8+比值均呈顯著正相關(r=0.933、0.910、0.762、0.835、0.806、0.845,P=0.000、0.000、0.010、0.004、0.008、0.003)。

4 討論

臨床顯示,Vit D缺乏性佝僂病1歲以內嬰幼兒發病率最高,引起發病的原因主要有戶外活動少、喂養方式不當、Vit D補充不及時、家族有佝僂病史等多種因素[6]。Vit D缺乏性佝僂病患兒早期臨床表現多不明顯,一旦出現明顯癥狀時,已對患兒骨骼發育造成嚴重影響。該病發病早期Vi D缺乏可引起血鈣水平下降,進而引起甲狀旁腺功能代謝性亢進,隨著血鈣水平升高接近正常,而血磷出現顯著下降,最終引起特征性骨骼病變。若不采取有效措施補充機體Vi D水平,長期Vi D缺乏可能導致患兒出現免疫性疾病,對患兒的生長發育造成嚴重影響[7-8]。因此,探討Vit D缺乏性佝僂病患兒血清25(OH)D水平與機體骨密度、免疫力的關系,對指導營養支持、治療方案的選擇意義重大。

本研究發現,觀察組患兒血清25(OH)D水平、骨密度標準差的離差Z值和百分位數P值均顯著低于對照組(P＜0.05),經Pearson相關性分析,觀察組血清25(OH)D水平與骨密度標準差的離差Z值和百分位數P值呈顯著正相關(P＜0.05),提示Vit D缺乏性佝僂病患兒存在血清25(OH)D水平、骨密度異常較低現象,且血清25(OH)D缺乏與骨密度低下有關。Vit D對人體健康尤其是嬰幼兒健康發育有重要意義,可參與機體免疫、造血、內分泌等多種系統功能反應,血清25(OH)D是反映機體Vit D營養狀態的最佳指標,機體Vit D缺乏時可直接導致血清25(OH)D水平降低[9]。骨密度可直接反映骨骼階段性發育狀況,應用骨密度B超儀可有效輔助嬰幼兒Vit D缺乏性佝僂病的診斷。關于早期佝僂病患兒與健康嬰幼兒骨密度差異的研究顯示[10],不同年齡亞組(0～1周歲、1～2周歲、2～3周歲)患兒骨密度Z值和P值均顯著低于健康患兒,與本研究結果相似。研究表明[11],青少年及中老年人群的Vit D水平與骨密度呈明顯正相關,說明Vit D缺乏與低骨密度關系密切。因此,及時有效補充Vit D對Vit D缺乏性佝僂病患兒骨密度的恢復有積極的促進作用。

本研究結果表明,觀察組患兒外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)占比及 CD4+/CD8+比值均顯著低于對照組(P＜0.05),經Pearson相關性分析,觀察組血清25(OH)D水平與CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占比及CD4+/CD8+比值均呈顯著正相關(P＜0.05),提示Vit D缺乏性佝僂病患兒存在T淋巴細胞亞群占比異常較低現象,且25(OH)D缺乏與機體細胞免疫水平低下有關。T淋巴細胞是機體外周血中重要的免疫細胞,根據其表面CD分子表達不同存在CD3+、CD4+、CD8+亞群,各亞群處于動態平衡時可維持機體正常細胞免疫水平[12]。研究證實[13],淋巴細胞表面大分子物質的表達與鈣磷代謝有關,鈣磷代謝異常可導致機體多種生物反應異常,如通過影響氧化磷酸化反應而抑制環磷酸腺苷(c A MP)生成,而c A MP是調節細胞免疫反應的關鍵物質。研究發現[14],T淋巴細胞表面存在1,25-二羥維生素D3受體,Vit D缺乏可導致1,25-二羥維生素D3供應不足,淋巴細胞表面受體與之結合減少,進而影響相應細胞因子合成和分泌,最終影響機體免疫應答反應。另外,Vit D缺乏可影響鋅(Zn)平衡,Vit D缺乏性佝僂病患兒多存在Zn缺乏,因此可導致DNA或RNA代謝相關酶的合成障礙,進而影響淋巴細胞功能[15-16]。因此,血清25(OH)D水平及T淋巴細胞數量在Vit D缺乏性佝僂病患兒疾病發展過程中有重要作用。

綜上所述,Vit D缺乏性佝僂病患兒存在血清25(OH)D水平、骨密度及T淋巴細胞亞群占比異常較低現象,且血清25(OH)D缺乏與骨密度和機體細胞免疫水平低下有關。提示臨床中可通過檢測血清25(OH)D水平綜合評估Vit D缺乏性佝僂病患兒的免疫功能,并制定有效干預措施加強預防和保健。