慢性乙型肝炎患者血清HBsAg定量和HBV-DNA檢測(cè)在HBV基因型與耐藥變異中的臨床探討

花艷艷 許琳婧 李夢(mèng)華

（大連市第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116000）

慢性乙型肝炎患者（CHB患者）通常是指患者體內(nèi)檢測(cè)出乙型肝炎病毒的存在并且病程在半年以上或者是病程不詳?shù)霈F(xiàn)慢性肝炎的患者，其常見的臨床癥狀為渾身乏力、無(wú)食欲且惡心、腹脹以及肝疼等[1-3]。近年來(lái)，隨著醫(yī)療科學(xué)與技術(shù)地迅速發(fā)展，慢性乙型肝炎抗病毒藥物的發(fā)展已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)步，其具體可以分為干擾素和核（苷）酸類似物兩大類。后者由于具有口服用藥、不良反應(yīng)低以及能夠抑制病毒水平等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛的關(guān)注和臨床推廣[4]。然而，患者在長(zhǎng)期服用核苷酸類藥物后體內(nèi)乙型肝炎病毒容易出現(xiàn)基因突變進(jìn)而產(chǎn)生耐藥變異性，影響患者進(jìn)一步的治療效果。由此，可見，乙型肝炎病毒耐藥變異性是乙型肝炎長(zhǎng)期治療過(guò)程中一個(gè)臨床難題，然而當(dāng)前對(duì)于乙型肝炎病毒耐藥變異性，臨床研究仍處于起步階段，需要更多的研究與臨床數(shù)據(jù)。因此，本研究從與乙型肝炎病毒相關(guān)的指標(biāo)出發(fā)，探討并分析乙型肝炎患者產(chǎn)生耐藥變異性的相關(guān)性指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 樣品標(biāo)本：本研究所用的樣品標(biāo)本均來(lái)自本院2017年7月1日至2017年12月31日門診和住院的79例慢性乙型肝炎患者，其年齡在8～73歲，平均45.7歲。所有的參與研究的患者血樣均為清晨空腹經(jīng)脈采血，隨后通過(guò)離心分離出血清，4 ℃下保存，隨后對(duì)相應(yīng)血樣進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.2 試劑與方法：采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)患者體內(nèi)血清中HBsAg含量，儀器為美國(guó)雅培公司的Architect i2000化學(xué)發(fā)光分析儀，檢測(cè)中所用到的試劑均從美國(guó)雅培公司購(gòu)買；而患者血清中HBV-DNA檢測(cè)試劑，包括核酸提取試劑等由蘇州天隆科技有限公司提供，恒溫雜交儀由亞能生物科技有限公司提供；此外，乙型肝炎病毒分型及耐藥突變基因檢測(cè)流程和HBV耐藥檢測(cè)報(bào)告解讀均需嚴(yán)格按照亞能生物科技有限公司提供的說(shuō)明書操作。所有參與研究的患者需要按照既定的試驗(yàn)方案按時(shí)按量服用抗乙型肝炎病毒核苷酸類藥物，同時(shí)，服藥前后（6個(gè)月）分別對(duì)參與研究的患者的血樣按照上述方法進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)比分析，研究影響患者乙型肝炎病毒耐藥變異性的因素。

表1 服藥6個(gè)月前后患者體內(nèi)血清中HBsAg含量以及HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

1.3 數(shù)理統(tǒng)計(jì)：本研究采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

為方便對(duì)比，本研究分別用數(shù)字“1”代表HBsAg，用數(shù)字“2”代表抗-HBs，用數(shù)字“3”代表HBeAg，用數(shù)字“4”代表抗-HBe以及用數(shù)字“5”代表抗-HBc，以此來(lái)研究用藥前后參與研究的乙型肝炎患者血清HBsAg含量以及HBV-DNA的檢測(cè)結(jié)果，見表1。

對(duì)比患者服用抗病毒核苷酸類藥物后，患者出現(xiàn)了明顯的耐藥變異癥狀，其中，患者體內(nèi)血清中的HBsAg含量以及HBV-DNA陽(yáng)性例數(shù)均出現(xiàn)增長(zhǎng)的情況，而基因型并未發(fā)生變化。除此之外，化學(xué)發(fā)光法具有較低的檢測(cè)限，因此可以檢測(cè)出低濃度下患者血清中HBsAg水平，這對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒具有極其重要的指示作用。

3 討 論

本研究所用的化學(xué)發(fā)光法是一種綜合化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)的新型免疫標(biāo)記測(cè)試方法，相比于傳統(tǒng)的ELISA法，該法可以對(duì)乙型肝炎病毒標(biāo)志物進(jìn)行定量分析，具有高精確性、高穩(wěn)定性、高靈敏度、高重復(fù)性且不易受環(huán)境影響等[5-6]。其基本原理為利用化學(xué)發(fā)光底物取代放射性物質(zhì)或酶底物作為抗原或者抗體標(biāo)志物進(jìn)行光免疫分析[7]。因此，化學(xué)發(fā)光法的高靈敏性對(duì)于研究抗乙型肝炎病毒耐藥變異性具有極其重要的作用。

慢性乙型肝病毒通常會(huì)表現(xiàn)出渾身乏力、無(wú)食欲且惡心、腹脹以及肝疼等臨床癥狀。目前，已有的抗乙型肝炎病毒藥物主要有干擾素和核苷酸兩大類，特別是核苷酸類藥物，具有服用方便（通常為口服）、不良反應(yīng)小以及抑制乙型肝炎病毒效果好等優(yōu)點(diǎn)，因此，該類藥物在臨床上被廣發(fā)使用。然而，近年來(lái)，隨著乙型肝炎疫苗以及抗乙型肝炎病毒藥物的大量使用，乙型肝炎病毒核酸發(fā)生基因突變，形成了乙型肝炎病毒突變株，這些乙型肝炎病毒突變株容易逃脫機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的檢測(cè)和抵御，如果采用傳統(tǒng)的低靈敏度的ELISA法，則很難對(duì)這些檢測(cè)株進(jìn)行檢測(cè)，因此，這就是研究使用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)其突變株的原因所在。本研究所用的抗體具有受突變影響小且親和力較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，因而可以更為有效地識(shí)別出變異株，特別是一些逃脫免疫監(jiān)控的變異株，能夠被本研究所用的抗體所捕獲，因而可以大大減少突變株漏檢情況的發(fā)生。

臨床研究已經(jīng)證實(shí)，當(dāng)乙型肝炎患者服用抗乙型肝炎核苷酸藥物且見效時(shí)，患者體內(nèi)血清中HBsAg含量以及HBV-DNA陽(yáng)性例數(shù)均會(huì)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，而且與患者乙型肝炎癥狀緩解情況呈一定相關(guān)性，即患者乙型肝炎癥狀越不明顯，其體內(nèi)HBsAg含量以及HBV-DNA陽(yáng)性例數(shù)越低。而從表1 可以看出，對(duì)比患者服用抗病毒核苷酸類藥物后，患者出現(xiàn)了明顯的耐藥變異癥狀，即患者體內(nèi)血清中的HBsAg含量以及HBV-DNA陽(yáng)性例數(shù)均出現(xiàn)增長(zhǎng)的情況，而基因型并未發(fā)生變化。這說(shuō)明慢性乙型肝炎患者體內(nèi)出現(xiàn)耐藥變異與血清中HBsAg含量以及HBV-DNA病毒載量具有一定的關(guān)聯(lián)性（P＜0.05），但與基因型無(wú)關(guān)（P＞0.05）。

4 結(jié)論與展望

綜上所述，慢性乙型肝炎患者體內(nèi)出現(xiàn)耐藥變異與血清中HBsAg含量以及HBV-DNA病毒載量具有一定的關(guān)聯(lián)性，但與基因型無(wú)關(guān)。此外，由乙型肝炎病毒耐藥株所引起的問(wèn)題逐漸增多，因此，要做好預(yù)防乙型肝炎病毒耐藥變異性的發(fā)生。首先，繼續(xù)給患者服用強(qiáng)效的抗乙型肝炎病毒藥物，抑制乙型肝炎病毒的同時(shí)可以預(yù)防其耐藥變異性的發(fā)生；其次，因地制宜，對(duì)于不同患者使用不同的抗病毒藥物，一旦效果不佳，應(yīng)立即更換抗乙型肝炎病毒藥物，甚至可以采用聯(lián)合用藥法取代傳統(tǒng)的單一用藥法，充分發(fā)揮各自抗乙型肝炎病毒的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)而亦能夠預(yù)防乙型肝炎病毒耐藥變異性的發(fā)生。并基于這些臨床理論研究，進(jìn)一步改進(jìn)當(dāng)前抗乙型肝炎病毒藥物的選擇性，研究出新型高效的抗乙型肝炎病毒靶向性藥物，即研發(fā)非作用于HBV-DNA聚合酶基因組的抗乙型肝炎病毒藥物。同時(shí)，應(yīng)該立即啟動(dòng)新的聯(lián)合治療方案并且加強(qiáng)抗乙型肝炎病毒藥物耐藥變異性的監(jiān)管，這些將大幅度地提高抗乙型肝炎病毒藥物的治療效果，也能夠減少其耐藥變異情況的發(fā)生。