蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞株具有抑制增殖和誘導凋亡作用的分析

姜峰玉 孫 抒* 李 冰 辛 悅

（1 吉林市中心醫院，吉林 吉林132011；2 延邊大學醫學部，吉林 延吉 133002）

腫瘤是一種因克隆性異常增生而形成的新生物，發病機制為機體受到各種致癌因素的影響而導致局部組織的細胞在基因水平上失去對生長發育的正常調控[1]。目前臨床上一般采用放射線療法、手術治療等方式進行治療，但放射線療法容易對人體的正常細胞產生不利的影響，導致新的病變細胞的產生；而手術治療不能保證徹底根除，如果處理不當，可能會導致機體其他部位的感染。因此尋找有效的全身性治療方式具有重要的意義[2]。蝙蝠葛主要生長在我國的東北部，其根、莖、葉以及果實都具有一定的藥用價值，本次研究主要探討蝙蝠葛活性成分對于人白血病K562細胞株的抑制增殖和誘導凋亡作用，報道如下。

表1 不同劑量蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞的生長抑制情況對比表（±s）

表1 不同劑量蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞的生長抑制情況對比表（±s）

劑量(μg/mL)細胞生長抑制率(%)24 h 48 h 20 52.73±1.28 53.65±2.98 40 83.01±0.72 83.88±1.82 80 98.69±0.74 98.29±1.45 160 98.91±1.12 99.03±2.18

表2 凋亡關鍵效應酶的表達情況表（±s）

表2 凋亡關鍵效應酶的表達情況表（±s）

注：n=8；與對照組相比，*P＜0.01

劑量(μg/mL) Caspase-3 Caspase-8 Caspase-9 0 13.27±1.62 15.18±2.08 15.36±1.97 20 76.42±3.19* 78.82±4.34* 82.14±4.91*

1 材料與方法

1.1 一般材料：蝙蝠葛活性成分從本市藥物研究所獲得，人白血病K562細胞株從本院獲得。

1.2 方法

1.2.1 四唑鹽（MTT）比色法：采用MTT法檢測細胞生長情況。

1.2.2 倒置顯微鏡：選取處于對數生長期的K562細胞，然后制成密度為10×107/L的細胞懸浮液，在50 mL的培養瓶中進行接種，4 h之后在其中加入劑量為20 μg/mL的蝙蝠葛活性成分，用導致顯微鏡觀察加入蝙蝠葛活性成分前后細胞的形態學變化。

1.2.3 免疫組化法：按照S-P試劑盒顯示的操作步驟進行操作。

1.3 觀察指標：計算并分析不同劑量蝙蝠葛活性成分作用下的細胞生長抑制率；觀察并記錄加入蝙蝠葛活性成分前后細胞的形態學變化，包括細胞質、細胞膜、細胞核、細胞體積的變化等；觀察蝙蝠葛活性成分實驗組與空白對照組3種凋亡關鍵效應酶的表達情況。

1.4 統計學分析：采用SPSS22.0軟件進行統計學分析，計量資料采用（±s）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用結構比表示，組間比較行χ2檢驗。P＜0.05差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞增值抑制作用：由表1可知，蝙蝠葛活性成分的劑量越高，越能抑制人白血病K562細胞的生長。而當蝙蝠葛活性成分達到80 μg/mL時，24 h后細胞生長抑制率可達到（97.69±0.74）%。蝙蝠葛活性成分的劑量為160 μg/mL時的細胞生長抑制率與劑量為80 μg/mL的細胞生長抑制率的差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 人白血病K562細胞形態變化：通過倒置顯微鏡對正常狀況下的人白血病K562細胞株進行觀察，發現細胞呈現橢圓形或者是核圓形，體積較大，核漿多占的比例比較大，胞質內部無顆粒出現，一般聚集生長，可看到瘤巨細胞。加入20 μg/mL的蝙蝠活性成分24 h后發現，原來聚集在一起的細胞，呈現分散狀態，相對而言分布得比較稀疏，瘤巨細胞相較減少；細胞體積減小，核漿所占的比例也有所降低，細胞核的核膜消失，細胞核分裂成碎塊，凋亡細胞以及凋亡小體已經形成。

2.3 凋亡關鍵效應酶的表達情況：由表2可知，蝙蝠葛活性成分為0時Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等凋亡關鍵效應酶的水平與蝙蝠葛活性成分為20 μg/mL時以上凋亡關鍵效應酶的水平具有顯著的差異（χ2=49.923，P＜0.01；χ2=37.401，P＜0.01；χ2=35.702，P＜0.01）。

3 討 論

相比于放射線或西醫藥治療來說，中藥治療具有不良反應較小、作用時效長、作用靶點較多、相容性較好等優點[3]，因此越來越多地被用于腫瘤的治療中。蝙蝠葛是從中藥北豆根中提取出來的[4]，其對于抑制腫瘤細胞的生長增殖以及促進腫瘤細胞的凋亡具有較好的效果[5-7]。

本次研究采用MTT比色法檢測表現出不同劑量蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞的生長產生的抑制作用，結果顯示，蝙蝠葛活性成分劑量越高，對人白血病K562細胞生長繁殖的抑制作用越強。但是當劑量到達一定程度時，細胞生長抑制率的增長率逐漸降低，當蝙蝠葛活性成分的劑量從80 μg/mL提高到160 μg/mL時，細胞平均生長抑制率僅提高0.22%。這就說明某一劑量的蝙蝠葛活性成分可以起到抑制細胞增殖的作用，在這個基本之上繼續加大劑量不能達到更好的治療效果，因此需要通過采用其他的方式達到更好的治療效果。

通過導致顯微鏡發現加入20 μg/mL劑量的蝙蝠葛活性成分之后，人白血病K562細胞已經明顯可以看到凋亡形態學現象的發生，根據不同劑量蝙蝠葛活性成分對細胞生產的抑制情況可以推測出，如果增加蝙蝠葛活性成分的劑量，K562細胞將出現更加明顯的凋亡現象。本次研究未能展示不同劑量蝙蝠葛活性成分應用于K562細胞發生的形態學改變，因此只能得出蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞具有誘導凋亡作用。通過蝙蝠葛活性成分作用前后對Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等凋亡關鍵效應酶水平的監測更加有力地證實這一點。