甲狀旁腺激素PTH（1—34）對骨轉(zhuǎn)移瘤生長的影響

劉善利

摘要 目的：探討甲狀旁腺激素PTH（1-34）對骨轉(zhuǎn)移瘤生長的影響。方法：選取36只4～5周齡BALB/C小鼠，隨機分為正常對照組（12只）、模型組（12只）和實驗組（12只），構(gòu)建小鼠乳腺癌模型，分別給予生理鹽水腹腔注射與PTH（1—34）腹腔注射。結(jié)果：實驗組與模型組小鼠骨轉(zhuǎn)移破壞率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；實驗組小鼠BMD及股骨灰干重比顯著低于正常對照組與模型組（P<0.05）；實驗組P、BSP、β-CTX等血清生化標志物與正常對照組、模型組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；實驗組小鼠腫瘤質(zhì)量及體積均高于正常對照組（P<0.05）。結(jié)論：血清生化指標能夠輔助診斷骨轉(zhuǎn)移瘤，PTH（1—34）能夠增加骨轉(zhuǎn)移率，加快腫瘤的生長，可為臨床PTH（1—34）抗體的研發(fā)提供參考。

關(guān)鍵詞 甲狀旁腺激素；骨轉(zhuǎn)移瘤；血清生化標志物；腫瘤生長

作為臨床中常見的促骨形成藥物，甲狀旁腺激素PTH（1-34）在臨床中有著廣泛的應(yīng)用。

臨床研究表明，小劑量PTH（1-34]的間斷注射能夠增加骨密度，促進骨微結(jié)構(gòu)的改善，對于骨質(zhì)疏松癥治療有顯著的療效。而高劑量PTH（1-34）則會對大鼠骨肉瘤起到誘發(fā)作用，加快骨轉(zhuǎn)換。

目前臨床中對于PTH（1-34）在腫瘤骨轉(zhuǎn)移中的作用及機制尚未達成一致，為探究甲狀旁腺激素PTH（1-34）對骨轉(zhuǎn)移瘤生長的影響，本研究選取36只小鼠建立骨轉(zhuǎn)移模型，并對研究結(jié)果做出相應(yīng)總結(jié)。

資料與方法

實驗動物：BALB/C健康小鼠，36只，購自上海加科生物科技有限公司，均為雌性，鼠齡4～6周，平均體重（16.4±2.4）g。實驗前1周于塑料鼠盒內(nèi)對小鼠進行喂養(yǎng)，將其置于層流架上，確保室內(nèi)通風，室溫保持23℃左右，并給予12h光照交替。

小鼠不限制飲食，自來水及飼料均保持自由攝入，喂養(yǎng)1周后實施分組飼養(yǎng)。

實驗方法：在預實驗中采用腫瘤細胞懸濁液注射法及腫瘤組織懸濁液注射法建立小鼠乳腺癌模型，于每組中抽取1只，對腫瘤塊進行剝離并制作病理切片，確定為乳腺癌，為荷瘤鼠造模方式的選擇提供參考。將36只BALB/C小鼠分為正常對照組（12只）、模型組（12只）和實驗組（12只），于小鼠前肢腋下皮下給予乳腺癌組織塊懸濁液注射，建立小鼠乳腺癌模型，1周后選取腫瘤長徑>4mm的小鼠作為造模成功鼠，每組均為12只。

造模成功后，給予模型組小鼠生理鹽水腹腔注射，實驗組則給予400μg/kgPTH（1-34）腹腔注射。

觀察指標：實驗期間，對3組小鼠的體重、腫瘤生長情況、血清生化指標水平等進行定期測定。

小鼠處死前，給予全身骨X線掃描，對骨破壞情況進行觀察，明確病變部位，采用DEXA法對小鼠的全身BMD進行測定，剝離腫瘤，測定腫瘤的重量與大小，將病變脛骨制備成脫鈣骨石蠟切片，給予HE染色和病理學觀察。

統(tǒng)計學分析：采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用X²檢驗；計量資料采用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

實驗組與模型組骨轉(zhuǎn)移破壞情況比較：模型組小鼠骨轉(zhuǎn)移破壞率為8.3%，實驗組為41.7%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

3組小鼠BMD、股骨灰干重比比較：實驗組小鼠的BMD及股骨灰干重比顯著低于正常對照組與模型組（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義。模型組BMD、股骨灰干重低于正常對照組，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

3組小鼠血清生化標志物比較：3組小鼠血清Ca水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。實驗組的P、BSP、B-CTX等血清生化標志物與正常組、模型組差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組血清P、BSP均高于正常對照組，ALP、BGP低于正常對照組，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。

實驗組與模型組小鼠腫瘤質(zhì)量與體積比較：實驗組小鼠腫瘤質(zhì)量及體積均高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表4。

討論

臨床研究表明，惡性腫瘤對骨破壞的作用機制主要包括兩個方面，首先為轉(zhuǎn)移局部以旁惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至骨細胞因子的產(chǎn)生，其能夠促進破骨細胞骨溶解；其次無骨轉(zhuǎn)移條件下惡性腫瘤分泌的PTH（1-34）體液因子在腫瘤轉(zhuǎn)移及骨破壞中的參與作用。

學者研究表明，PTH（1-34）與乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多種腫瘤疾病有著密切的相關(guān)性，PTH（1-34）的過度表達，會誘發(fā)破骨細胞的成熟與分化，增加骨轉(zhuǎn)移破壞。

此次研究中實驗組小鼠骨轉(zhuǎn)移破壞率明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示PTH（1-34）對骨轉(zhuǎn)移破壞的促進作用。

目前，臨床中將骨轉(zhuǎn)化生化指標作為藥物療效的重要表現(xiàn)，以便為臨床治療提供參考。Ca、BGP、BSP能夠?qū)俏諣顟B(tài)進行不同程度的反應(yīng)，能夠?qū)Τ晒羌毎钚杂枰苑磻?yīng)，成為病情檢測的重要指標。

研究中3組小鼠Ca水平差異無統(tǒng)計學意義，這很大程度上是由于復雜的內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用。而實驗組P、β-CTX、BSP指標均顯著高于正常對照組與模型組。說明，實驗組存在腫瘤骨轉(zhuǎn)移，且伴隨溶骨性骨吸收。而模型組BSP指標有升高趨勢，但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明其腫瘤存在潛在的骨轉(zhuǎn)移，但進程相對緩慢。

另外，實驗組小鼠ALP、BGP指標的下降也能夠反映出PTH（1-34）在破骨細胞活性的作用。

研究表明，骨密度能夠反映出骨質(zhì)疏松程度，BMD指標與骨折發(fā)生率呈現(xiàn)出明顯的負相關(guān)關(guān)系。

此次研究中實驗組小鼠的BMD及股骨灰干重比顯著低于正常對照組與模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。提示在PTH（1-34）作用下，骨量會明顯減少，骨組織對外力的抵抗能力降低。實驗組小鼠腫瘤質(zhì)量及體積均高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明PTH（1-341對腫瘤生長有著直接的促進作用。

綜上所述，PTH（1-34）是骨轉(zhuǎn)移率升高的直接促進因素，其能夠加快腫瘤生長，可為進一步研發(fā)抵抗PTH（1-34）藥物提供參考。