高含量IgG牛初乳膠囊的安全性研究

文/金洪偉 陳映新

（深圳市光明新區疾病預防控制中心）

牛初乳中富含多種免疫因子和生長因子等生理功能性成分，具有常乳無法比擬的特點[1]。在各種免疫因子中，免疫球蛋白是最引人注目的[2]。IgG是免疫球蛋白的一種，是人和動物血液中含量最高的免疫球蛋白[3]。關于牛初乳及IgG保健功能性的研究和報道很多，但安全性毒理學方面的研究鮮有文獻報道，本文依據《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003版）的要求，開展高含量IgG的牛初乳膠囊產品安全性毒理學評價試驗，包括急性毒性試驗，遺傳毒性試驗［鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物肝微粒體酶試驗（Ames試驗）、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗）］和30 d喂養試驗，通過試驗驗證其安全性。

1 材料與方法

1.1 樣品

牛初乳膠囊為市售產品，其IgG含量為30%，樣品為乳黃色粉末狀，感官檢查未見異常。該樣品推薦用量為每日2 次、每次5 粒，每粒0.2 g，因此每人每日2 g（含IgG 0.6 g），如成人體重以60 kg計，則相當于0.033 g/kg·bw。

1.2 試驗動物

SPF級ICR小白鼠和SPF級Wistar品系大白鼠，均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。在SPF級動物實驗中心（屏障環境）飼養，溫度為21～23 ℃，濕度為55%～58%RH。試驗動物所用的清潔級飼料購自北京科澳協力飼料有限公司。

1.3 試驗方法

依據《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003版）進行急性毒性試驗、遺傳毒性試驗和30 d喂養試驗，遺傳毒性試驗包括鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物肝微粒體酶試驗（Ames試驗）、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗3 項。

1.4 結果統計

采用SPSS軟件對所有試驗數據進行統計學分析。

2 結果

2.1 急性毒性試驗

牛初乳膠囊大鼠和小鼠的急性毒性試驗結果見表1。在14 d的觀察期間內，兩性別大、小鼠一般狀態良好，未出現任何中毒癥狀，無動物死亡。根據試驗所設計的劑量，觀察到的結果及大、小鼠急性毒性判定標準，可以認為牛初乳膠囊經口最大耐受量＞20.0 g/kg·bw（相對于人體推薦量的606 倍），屬實際無毒物質。

2.2 Ames試驗

牛初乳膠囊2 次Ames 試驗結果分別見表2和表3。結果表明，在加與不加活化系統條件下，受檢樣品各試驗菌株的回變菌落數均未超過陰性對照組的2 倍以上，故認為牛初乳膠囊對Ames試驗菌株無致突變性。

表1 牛初乳膠囊大、小鼠急性毒性試驗結果

表2 牛初乳膠囊第一次Ames試驗結果

表3 牛初乳膠囊第二次Ames試驗結果

表4 牛初乳膠囊對小鼠骨髓細胞微核發生率的影響

表5 牛初乳膠囊對雄性小鼠精子畸形的影響

表6 牛初乳膠囊對大鼠體重的影響

2.3 小鼠骨髓細胞微核試驗

牛初乳膠囊小鼠骨髓細胞微核試驗的結果見表4。經卡方檢驗統計分析，各試驗組與陰性對照比較，差異無統計學意義（p＞0.05），陽性對照組（給予0.04 g/kg·bw的環磷酰胺）的微核率高于陰性對照組，且差異有統計學意義（p＜0.01）。本試驗表明，牛初乳膠囊對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核發生率無影響。

2.4 小鼠精子畸形試驗結果

牛初乳膠囊小鼠精子畸形試驗的結果見表5。結果顯示，各組動物均可見到一定數量的畸形精子，經秩和檢驗統計方法，給予環磷酰胺（0.04 g/kg·bw）的陽性對照組精子畸形率與陰性對照組相比差異有統計學意義（p＜0.01）；而各試驗組動物的精子畸形率與陰性對照組相比差異無統計學意義（p＞0.05），表明牛初乳膠囊對小鼠精子畸形發生率無影響。

2.5 30 d喂養試驗

2.5.1 一般狀態觀察

主要試驗如下：①膨脹試驗，包括自由膨脹和限制膨脹試驗；②壓汞試驗，通過計算汞壓入量間接確定孔隙的孔徑大小，適合干燥試樣；③核磁共振試驗，通過核磁共振技術測定含水狀態下的孔隙分布，測試原理見參考文獻[13]；④XRD試驗，通過XRD方法確定晶體礦物；⑤SEM試驗，觀察試樣的微觀形貌。

在整個試驗過程中，各組動物一般狀況良好，行為正常，未見任何中毒表現，亦無動物死亡。

2.5.2 對大鼠體重的影響

在30 d喂養過程中，牛初乳膠囊對大鼠體重增長的影響見表6。對大鼠每周體重進行方差分析處理，結果均無顯著性差異（p＞0.05），說明牛初乳膠囊對大鼠體重的增長無顯著影響。

表7 牛初乳膠囊對大鼠總食物利用率的影響

表8 牛初乳膠囊對血液學指標的影響

表9 牛初乳膠囊對大鼠白細胞分類的影響

2.5.3 對大鼠總食物利用率的影響

在30 d喂養過程中，牛初乳膠囊對大鼠體重增重、進食量、食物利用率的影響見表7。結果顯示，對各劑量組動物的體重增重、進食量和食物利用率進行方差分析，各組間均無顯著性差異（p＞0.05），表明牛初乳膠囊對大鼠的總食物利用率無顯著影響。

2.5.4 對大鼠血液學指標的影響

大鼠紅細胞、血紅蛋白和白細胞的檢測結果見表8。結果顯示，紅細胞計數、血紅蛋白含量和白細胞計數均在正常值范圍內，各試驗組與陰性對照組相比均無顯著性差異（p＞0.05），說明牛初乳膠囊對紅細胞總數、血紅蛋白含量和白細胞總數無顯著影響。

牛初乳膠囊對大鼠白細胞分類的影響檢測結果見表9。結果表明，雄性、雌性大鼠的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜堿性粒細胞均在正常值范圍之內，且各試驗組與陰性對照組相比無顯著性差異（p＞0.05），說明牛初乳膠囊對各型白細胞均無顯著影響。

2.5.6 對末期血液生化指標的影響

試驗結束后處死動物，分離大鼠血清，檢測血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血糖（GLu）、白蛋白（ALb）、總蛋白（TP）、總膽固醇（TCH）、甘油三酯（TG）等指標（表10）。結果表明，劑量受試物組的各項指標與陰性對照組相比無顯著性差異，說明牛初乳膠囊對大鼠血生化指標無顯著影響。

2.5.7 病理檢查結果

（1）大體解剖

用牛初乳膠囊對大鼠經口灌胃30 d后，對大體進行解剖檢查，各組動物重要臟器未見明顯病理改變和異常。

表10 牛初乳膠囊對末期血液生化指標的影響

表11 牛初乳膠囊對大鼠臟器重量及臟器/體重值的影響

（2）臟器重量及臟器/體重值

牛初乳膠囊對大鼠臟器重量及臟器/體重值的影響見表11。經方差分析，各試驗組與陰性對照組主要臟器重量和臟器／體重值均無明顯的差異（p＞0.05）。

2.5.8 病理組織學檢查結果

（1）組織檢查

對牛初乳膠囊30 d喂養試驗中的對照組和高劑量組大鼠進行病理組織學檢查，剖檢后肉眼觀察，心、肺、肝、脾、腎、胃、腸、睪丸（卵巢）等主要臟器的顏色、形狀、大小等均未見明顯異常。

（2）鏡下檢查

病理檢查結果表明，高劑量組與對照組大鼠的肝、脾、腎、胃、腸、睪丸（卵巢）均未見與試驗因素有關的病理組織學變化。

3 小結

經試驗分析，牛初乳膠囊的大、小鼠經口急性毒性最大耐受劑量均＞20 g/kg·bw（相對于人體推薦量的606 倍），屬實際無毒級；鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物肝微粒體酶試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗3 項遺傳毒性試驗結果均為陰性；30 d喂養試驗亦未見其對受試動物有明顯毒性損害作用。C