非小細胞肺癌組織中趨化因子受體CCR7的表達及其臨床意義

李春磊 裴艷志 鄒志田 高磊 路通 凡航 朱曉峰

摘 要：目的 研究CCR7在NSCLC中的表達情況，探討其與NSCLC的臨床病理關系。方法 采取鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法檢測36例非小細胞肺癌組織、5例正常肺組織 CCR7的表達情況及肺癌組織 D2-40的表達情況。結果 CCR7主要表達在細胞膜及細胞質，36例組織標本中29例陽性表達，陽性率為80.56%；正常肺組織的陽性率為10.00%。癌組織淋巴結陽性標本中 CCR7陽性率為84.21%，陰性標本陽性率為52.94%（P<0.05）。結論 CCR7在肺癌組織中高表達，并隨著TNM分期的提高，CCR7的表達也逐漸提高。并且CCR7高表達的癌組織樣本中D2-40也呈現高表達。NSCLC淋巴結轉移與癌組織中的CC7高表達關聯密切，可能為今后預測NSCLC患者預后及治療提供有力的理論依據。

關鍵詞：非小細胞肺癌；CCR7；淋巴結轉移

中圖分類號：R734.2 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.17.004

文章編號：1006-1959（2018）17-0014-03

Abstract：Objective To investigate the expression of CCR7 in NSCLC and to explore its clinicopathological relationship with NSCLC. Methods The expression of CCR7 in 36 cases of non-small cell lung cancer tissues and 5 normal lung tissues and the expression of D2-40 in lung cancer tissues were detected by streptomycin avidin-peroxidase immunohistochemistry.Results CCR7 was mainly expressed in cell membrane and cytoplasm，and 29 cases were positively expressed in 36 tissue samples，the positive rate was 80.56%； the positive rate of normal lung tissue was 10.00%.The positive rate of CCR7 in cancer tissue-positive specimens was 84.21%，and the positive rate in negative specimens was 52.94%（P<0.05）.Conclusion CCR7 is highly expressed in lung cancer tissues，and the expression of CCR7 is gradually increased with the increase of TNM staging.And D2-40 also showed high expression in cancer tissue samples with high CCR7 expression.NSCLC lymph node metastasis is closely related to the high expression of CC7 in cancer tissues， which may provide a powerful theoretical basis for predicting the prognosis and treatment of patients with NSCLC.

Key words：Non-small cell lung cancer；CCR7；Lymph node metastasis

肺癌（lung cancer）發生于支氣管黏膜及其腺體上皮的惡性腫瘤，是當今全世界威脅人類健康的最嚴重的惡性疾病之一，且其發病率呈逐年上升的趨勢，現已位居惡性腫瘤發病率和死亡率之首，其中80%以上是非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）[1]。現階段的治療方法以手術為主，放化療等多學科綜合治療已成為學科共識。雖然目前在肺癌早期診斷及綜合治療方面取得了相當大的進展，但目前的5年生存期仍未達到令人滿意的程度，即便是Ⅰ期的NSCLC患者根治術后，仍會有相當一部分患者發生腫瘤的復發和遠處轉移，這提示著我們這些患者術前即有可能存在著一些轉移，而淋巴結轉移最常見的途徑，所以肺癌的淋巴結轉移是臨床治療所面對的最大難題，直接影響著患者的生存期。趨化因子受體7（Chemokine receptor 7，CCR7）是一種G蛋白偶聯的7次跨膜受體，在與配體相結合，可實現腫瘤細胞與淋巴細胞歸巢類似的生物學行為，進而介導腫瘤細胞向特定器官的轉移。現已發現，CCR7在多種實體腫瘤中高表達，如胰腺癌、乳腺癌、橫紋肌肉瘤等，影響著腫瘤細胞的粘附、存活、淋巴管、血管生成等，在腫瘤的侵襲轉移中發揮重要作用。本實驗研究CCR7在NSCLC組織中表達情況及其臨床病理的關系進行分析。

1資料與方法

1.1 一般資料 NSCLC組織蠟塊來自佳木斯大學附屬第一醫院胸外科從2010年1月～2015年12月行手術切除的肺癌組織，并選取5例手術切除的正常肺組織，按照《中國腫瘤病理學分類》，36例標本中鱗癌15例，腺癌19例，腺鱗癌2例。淋巴結轉移19例；年齡48～75歲，中位年齡60歲。所入選患者手術前均未行放療或化療治療。36例患者按照國際抗癌協會（ UICC）2009年新修訂的第七版非小細胞肺癌 TNM分期分為：Ⅰ期8例、Ⅱ期15例、Ⅲ期13例。所有切片經過10%中性福爾馬林溶液浸泡固定，并常規石蠟包埋，4 μm連續切片，免疫組織化學SP法染色。

1.2 主要試劑 鼠抗人CCR7購買自哈爾濱博士德生物科技有限公司。檢測系統DAB顯示試劑盒購買于北京中杉金橋生物科技有限公司。

1.3 實驗方法 所有標本均經過檸檬酸緩沖液（pH=6.0）高溫高壓抗原修復，采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法（SP法）免疫組織化學法染色。 嚴格按照試劑盒操作進行。CCR7稀釋濃度為1： 100。用已知的CCR7陽性切片作CCR7的陽性對照。PBS取代一抗作陰性對照。所有切片采用DAB顯色，蘇木精復染，中性樹脂封片，光鏡下觀察。

1.4結果判定 按照Andre等[2]的方法對CCR7的結果進行判讀，由兩位資深病理醫師雙盲閱片，根據免疫組織化學染色陽性的細胞比例和染色的強度進行評分，以細胞膜或細胞漿呈棕黃色顆粒為陽性細胞。染色強度判：無色記為0分；淺黃色記為1分；棕黃色記為2分；棕褐色記為3分；根據著色細胞比例評分：≤10%記為0分； 11%～25%記為1分； 26%～50%記為2分； <50%記為3分。兩者評分之和≥3分記為陽性，<3分記為陰性。

1.5統計學方法 本次研究數據采用SPSS21.0統計軟件進行分析，計數資料以（%）表示，行？字2檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2結果

隨著TNM分期的提高，其陽性率也逐漸提高。正常肺組織多為染色陰性或淺黃色，染色的面積小，見圖1。CCR7在NSCLC中高表達，且表達主要在細胞膜和（或）細胞質中，見圖2。36例NSCLC組織有80.56%的標本陽性表達，正常肺組織為10.00%（P<0.05）。同時，本實驗還發現CCR7的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類型無關，而與淋巴結是否轉移、腫瘤的TNM分期相關，見表1。

3討論

腫瘤轉移和侵襲是人類癌癥的關鍵惡性特征。腫瘤患者的死亡主要是由癌細胞擴散到遠處的器官造成。癌癥轉移的重要特征之一就是淋巴結受累。目前腫瘤新生淋巴管及新生血管的研究已成為研究腫瘤轉移的熱點。CCR7在腫瘤淋巴管和血管的生成中起到重要作用。CCR7在所有原始T細胞和一些記憶T細胞，B細胞和成熟樹突狀細胞上表達。在免疫和炎癥反應期間，CCR7與其配體趨化因子配體19（CCL19）或趨化因子配體21（CCL21）相互作用時，可促進淋巴細胞運輸和歸巢到淋巴結[3-5]。相關文獻報道[6]CCR7可與其配體 CCL19/CCL21相結合，在多種生長因子，如VEGF-C、D等的參與下，可趨化腫瘤向淋巴結轉移。

D2-40是近年來發現的一種淋巴管標志物，可與癌胚抗原M2A特異性結合，且只與淋巴管內皮反應，不與血管內皮反應，被認為是最具有特異性的淋巴管標志物[7]。相關研究顯示[8] D2-40抗體可更敏感的檢測出腫瘤淋巴管的生成，可更有效的預測腫瘤的淋巴結轉移。

本實驗發現：①CCR7在NSCLC組織中的表達顯著高于正常組織，且隨著TNM分期的提高，NSCLC組織CCR7的陽性率逐漸提高；②淋巴結陽性的NSCLC的CCR7的表達率高于淋巴結陰性的標本；③淋巴結陽性組的MLVD高于淋巴結陰性組MLVD；④CCR7在不同病理類型的NSCLC表達，差異無臨床意義及統計學意義。

本實驗采用SP法證實了CCR7與NSCLC淋巴結的轉移高度相關。相關研究[9-11]證明 CCR7可與其配體結合，形成CCR7/CCL19/CCL21系統，通過ERK/Akt通路誘導VEGF-C、D的上調，從而促進腫瘤微淋巴管生成，為NSCLC淋巴結轉移打下伏筆。并且該實驗測定D2-40發現淋巴結陽性的組織MLVD的表達率明顯高于淋巴結陰性的標本，從側面印證CCR7與NSCLC淋巴結轉移密切相關。

綜上所述，CCR7高表達與NSCLC淋巴結的轉移關系密切，可能為今后NSCLC患者的治療及預測預后提供有力的理論依據。積極尋找阻斷CCR7作用通路的靶點，將成為未來研究NSCLC淋巴管生成和淋巴結轉移新的方向。

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收稿日期：2018-3-12；修回日期：2018-4-11

編輯/李樺