二羥基乙酸鹽比色法測定飼料中色氨酸的含量

李永才

摘要：采用二羥基乙酸鹽比色法測定飼料中色氨酸的含量。測得色氨酸的RSD為1.89%～3.23%，平均回收率為92.50%～93.40%。該方法所需儀器簡單，操作方便，靈敏度較高，測定結(jié)果準(zhǔn)確，可用于飼料中色氨酸含量的測定。

關(guān)鍵詞：二羥基乙酸鹽；比色法；色氨酸；飼料

中圖分類號：S816.17 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2018）04-0043-02

飼料中的色氨酸是動(dòng)物維持生命和生長所必需的氨基酸，其含量被用作評價(jià)飼料營養(yǎng)品質(zhì)的重要指標(biāo)。目前主要采用氨基酸自動(dòng)分析儀、高效液相色譜、離子交換層析、熒光等方法測定飼料中色氨酸的含量，但上述方法均存在儀器價(jià)格昂貴的問題，使其應(yīng)用受到一定限制。而比色法所需儀器簡單、價(jià)格便宜，便于普及推廣。

1 材料與方法

1.1 原理

在濃硫酸存在下，三價(jià)鐵離子可將乙酸氧化成二羥基乙酸，二羥基乙酸又與經(jīng)木瓜蛋白酶水解后從蛋白質(zhì)中解離出來的色氨酸的吲哚環(huán)反應(yīng)，生成紅紫色化合物，其顏色深淺與色氨酸的含量成正比。

1.2 儀器

日立U-3010紫外分光光度計(jì)：日本日立公司。

1.3 試劑

1.3.1 0.1 mol/L HAC—NaAC緩沖液（pH 7.0） 將0.1 mol/L HAC與NaAC溶液按1∶178混合。

1.3.2 木瓜酶水解液 稱取400 mg木瓜蛋白酶，放入小研缽中，加少量0.1 mol/L HAC—NaAC緩沖液，充分研磨使其呈勻漿狀，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用HAC—NaAC緩沖溶液沖洗研缽并倒入容量瓶中，最后用HAC—NaAC緩沖液稀釋至刻度。

1.3.3 混合顯色液 將0.03%氯化鐵乙酸液與15 mol/L硫酸液于使用前1～2 h等體積混合。

1.3.4 色氨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液 準(zhǔn)確稱取20 mg DL-色氨酸（經(jīng)105 ℃恒重），加幾滴0.1 mol/L氫氧化鈉及少量水溶解后，定量轉(zhuǎn)移到200 mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，貯于冰箱中。

1.3.5 色氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液 分別吸取2.50，3.75，5.00，

6.25，7.50，10.00 mL色氨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液置于25 mL容量瓶中，用pH 7.0的HAC—NaAC緩沖液稀釋至刻度，配制成的標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度分別為10，15，20，25，30，40 μg/mL。

1.4 測定方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密吸取1 mL各濃度色氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液和1 mL pH 7.0的HAC—NaAC緩沖液（作空白）置于試管中，向各試管中加入5 mL混合顯色液，搖勻，放入65 ℃恒溫水浴中保溫15 min，冷卻至室溫，于545 nm處測定吸收值，得回歸方程為：A=-0.001 39+0.009 45 C，r=0.999 2。

1.4.2 樣品測定 稱取磨碎、混勻的樣品100 mg置于試管中，加入5 mL木瓜酶水解液，小心振蕩，使樣品完全浸濕又無顆粒粘于管壁，放入65 ℃恒溫箱中過夜。取出振搖，冷至室溫，離心，取1 mL上清夜，加5 mL混合顯色液，之后步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法，計(jì)算得出樣品中色氨酸含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品中色氨酸含量測定結(jié)果

8種樣品中色氨酸含量的測定結(jié)果見表1。

2.2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

分別對3種樣品進(jìn)行6次重復(fù)測定，考察方法的精密度，結(jié)果見表2。

由表2可知：該方法測定色氨酸含量的RSD為1.89%～3.23%。

2.3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

采用加樣回收法進(jìn)行回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表3。

由表3可知：該方法平均回收率為92.50%～93.40%。

3 結(jié)論與討論

二羥基乙酸鹽比色法具有所需儀器簡單、操作方便、靈敏度較高、測定結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)，可用于測定飼料中色氨酸的含量。冰乙酸純度對該方法測定結(jié)果影響較大，宜用優(yōu)級純或冰乙酸加高錳酸鉀進(jìn)行蒸餾；色氨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液可用1周，而色氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配；脂肪含量大于5%的樣品應(yīng)脫脂，否則測定結(jié)果偏低且不規(guī)則。

參考文獻(xiàn)

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