混合染色法在對患者進行骨髓細胞形態學檢驗中的應用效果

馮艷鈴

（成都市雙流區中醫醫院，四川 成都 610200）

進行骨髓細胞形態學檢驗是診斷血液病的主要檢驗方法。在進行骨髓細胞形態檢驗時，不僅要求檢驗人員熟練掌握各種異常細胞的形態，還需要保證涂片有良好的染色效果，否則極易發生誤診、漏診[1]。臨床上進行骨髓細胞形態學檢驗時，對骨髓涂片進行染色的常用方法有多種。使用不同染色法對骨髓涂片進行染色所獲得的染色效果存在一定的差異。本次研究主要探討使用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法對骨髓涂片進行染色處理的效果。

1 資料及方法

1.1 一般資料

本次研究的對象為2017年9月至2018年2月期間在四川大學華西醫院進行骨髓細胞形態學檢驗的80例患者的骨髓涂片。在這80例患者中，有男性51例，女性29例；其平均年齡為（47.49±3.64）歲。

1.2 研究方法

采集這80例患者的新鮮脊髓液制作成涂片，分別用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法對涂片進行染色。對骨髓涂片進行染色的方法是：1）對患者進行常規的骨髓穿刺，抽取其新鮮的脊髓液作為檢驗標本。2）由專業人員將檢驗標本制作成涂片后，使用甲醇溶液對涂片進行固定。3）本次研究使用姬氏染色液屬于原液。瑞士染色液在配置好后存放一段時間（存放的時間不低于3個月）。4）分別使用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法對骨髓涂片進行染色。對涂片進行混合染色的方法是：在涂片上滴上5滴瑞氏染色液，需確保染色液覆蓋整個標本，對涂片進行1 min左右的固定。按照1:2的比例將姬氏染色液滴加到涂片上，待其混勻充分后再靜置一段時間即可。5）在染色完成后的 5 min、10 min、20 min、30 min、1 h、1.5 h和 2 h，在顯微鏡下對涂片進行觀察。6）使用模糊數字法判定骨髓涂片染色效果的評分。將染色效果較差，無法對細胞質進行有效辨別且細胞輪廓較模糊的涂片判定為0分；將染色效果佳，有清晰的細胞結構且細胞漿與細胞核差別明顯的涂片判定為10分。

1.3 觀察指標

觀察使用這三種染色法對骨髓涂片進行染色的效果。

1.4 統計學處理

將本次研究中的數據錄入到SPSS22.0軟件中進行處理，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用%表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

與使用姬氏染色法和瑞氏染色法相比，用混合染色法對骨髓涂片進行染色效果的評分更高，P＜0.05。使用姬氏染色法和瑞氏染色法對骨髓涂片進行染色效果的評分相比，P＞0.05。詳見表1。

表1 用這三種染色法對骨髓涂片進行染色效果評分的比較（分，±s）

表1 用這三種染色法對骨髓涂片進行染色效果評分的比較（分，±s）

注：*與瑞氏染色法和姬氏染色法相比， P＜0.05。

染色方法 5 min 10 min 20 min 30 min 1 h 1.5 h 2 h瑞氏染色法 1.71±0.19 2.52±0.20 3.82±0.31 5.48±1.62 7.32±0.51 5.06±0.82 3.14±0.34姬氏染色法 1.61±0.29 2.95±0.30 3.60±0.53 5.32±1.55 6.91±0.30 4.28±0.69 3.28±0.49混合染色法 3.92±0.31* 5.36±0.40* 7.01±0.49* 8.95±0.34* 9.32±0.21* 8.83±0.22* 8.35±0.23*

3 討論

相關的研究結果顯示，髓液涂片的染色效果會直接影響到檢驗人員對其中血細胞形態的觀察結果。這是因為，骨髓涂片的染色效果若未達理想狀態，就無法準確地辨別其中細胞的異常形態及特殊結構，進而導致相關疾病的漏診、誤診[2]。張紅祥等[3]的研究表明，影響髓液涂片染色效果的因素較多，如涂片的厚度與薄度、染色液的成熟度、染色時間的長短、染色液的溫度等。有研究表明，只要達到“長時間及低濃度”的染色要求，就可確保涂片的染色效果具有明顯的層次感，達到理想的染色效果。瑞氏染色法對細胞核具有良好的染色反應，但對細胞質的染色效果卻相對較差；姬氏染色法的染色效果與瑞氏染色法的染色效果相反。因此，可采取混合染色法對骨髓涂片進行染色，以充分融合瑞氏染色法和姬氏染液法的優點，使涂片獲取最佳的染色效果。在對骨髓涂片混合染色時，需先用姬氏染液對其進行染色處理，再用瑞氏染色液對其進行染色處理，以便獲得良好的染色效果。這是因為，姬氏染液的溶解度可在甲醇溶液中達到理想的狀態，瑞氏染色液可在甘油中達到理想的溶解度。本次研究的結果顯示，與使用姬氏染色法和瑞氏染色法相比，用混合染色法對骨髓涂片進行染色效果的評分更高，P＜0.05。使用姬氏染色法和瑞氏染色法對骨髓涂片進行染色效果的評分相比，P＞0.05。這說明，在進行骨髓細胞形態學檢驗中使用混合染色法對骨髓涂片進行染色，可獲得理想的染色效果。筆者對本次研究總結如下：1）對骨髓涂片進行混合染色后，在5 min時其染色的效果不太理想，在20 min～1 h時其染色效果理想，在2 h后其染色效果呈下降的趨勢（即隨著染色時間的增加，染色效果越來越差）。2）進行混合染色可使骨髓細胞具有較強的染色對比效果，使骨髓細胞漿能夠表現出藍色狀態，并使骨髓細胞核表現出紫紅色狀態（這兩者之間有明顯的區別），而且涂片的整體染色效果具有明顯的層次感，便于檢驗人員深入地觀察細胞的結構，仔細地鑒別骨髓中的幼稚細胞。