小麥中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的液相色譜檢測與膠體金試紙法分析比較

◎ 欒振祥

（東海縣產品質量和食品安全綜合檢驗檢測中心，江蘇 東海 222300）

脫氧雪腐鐮刀菌俗稱嘔吐霉素（DON），是一種在小麥、玉米中常見的毒素，這種毒素對人體健康有較大的威脅，攝入這種毒素過多會導致胃癌的發生。糧食中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢測方法主要是國家標準中的液相色譜法以及快檢中的酶聯免疫法和膠體金檢測法。液相色譜法主要是儀器檢測，靈敏、準確度高，但耗時長，酶聯免疫法和膠體金檢測法屬于定性和半定量的快速檢測方法，耗時較短，有利于批量篩選工作[1]。本文是通過高效液相色譜和膠體金試紙方法分別對小麥樣品中的DON進行檢測，比較兩種方法的差別，從而為實驗室人員提供參考，建立一種能夠快速發現、快速確認的實驗室方法。

1 材料與方法

1.1 液相色譜法

1.1.1 儀器與試劑

Waters e2695液相色譜儀（配紫外檢測器，Waters公司）、高速均質器（飛利浦公司）、玻璃纖維濾紙（英國Whatman公司）、6位空氣泵操作架（北京中檢維康公司）、電子天平（梅特勒公司）、氮吹儀（無錫沃信公司）、免疫親和柱（美國Vicam公司）。色譜純甲醇（中國國藥）、色譜純乙腈（中國國藥）、聚乙二醇PEG8000（美國Vicam公司）、超純水（美國Millipore公司）。

嘔吐毒素標準儲備溶液（純度大于99.5%）：200 μg/mL。

嘔吐毒素標準工作溶液：分別取0.1mL嘔吐毒素標準溶液，氮氣儀吹干后，用流動相（甲醇+乙腈+水=10+10+80）分別配制濃度為100、300、500、1 000、2 000、4 000 μg/L以及6 000 μg/L的DON標準工作溶液。

1.1.2 樣品凈化

玻璃注射器下連接免疫親和柱，準確移取2 mL混勻的濾液于玻璃注射器中，連接空氣泵和玻璃注射器，調節空氣壓力，使溶液以每秒1～2滴的速度通過免疫親和柱，直至空氣完全進入到免疫親和柱中。用5 mL高純水淋洗免疫親和柱，流速保持在每秒1～2滴，直至空氣完全通過免疫親和柱。準確加入1.0 mL色譜純甲醇到玻璃注射器中，淋洗免疫親和柱并收集1.0 mL全部樣品洗脫液于玻璃測試管中。

1.1.3 提取液定容

將1.0mL洗脫液用氮氣儀吹干后，用300 μL流動相（甲醇+乙腈+水=10+10+80）定容洗脫液，進高效液相色譜儀分析測定。

1.1.4 儀器條件

色譜柱：Agilent C18，5 μm，4.6 mm×250 mm；流動相：甲醇∶乙腈∶水（V/V，10∶10∶80）；流速：0.8 mL/min；進樣量：100 μL；柱溫：30 ℃；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：218 nm。

1.2 膠體金試紙檢測方法

1.2.1 儀器與試劑

HF6000便攜式試紙讀數儀（北京華安麥科公司）、干式加熱器（北京華安麥科公司）、移液槍（20～200 μL，100～1 000 μL，1～10 mL）、樣品提取液（純水）、嘔吐毒素快速測定試紙條（北京華安麥科公司）。

1.2.2 樣品處理

稱量5.0 g樣本，粉碎、加入離心管中，量取20 mL純水加入，加上塞子，振蕩1 min，靜置分層或4 000 r/min離心3 min得上清液，取2 000 μL樣品稀釋液，加入上清液50 μL，充分振蕩混勻后，待檢。若測試結果超出曲線范圍上限，需要再次檢測時，可取上述所得提取上清液，用樣品提取液（純水）對倍稀釋，再進行同樣的以下操作。

1.2.3 樣品測試

①將快速測定試紙條、微孔試劑、待測樣品在室溫環境下放置20 min冷卻至室溫。②將微孔試劑放入加熱器中，調節溫度至40 ℃，5 min后取出試劑條待用。③移取待檢液200 μL于微孔中，充分混勻。④立刻將試紙條充分浸入微孔試劑中，計時5 min，取出試紙條在1 min內檢測結果[2]。

2 檢測結果準確度比較分析

本實驗對20份小麥樣本分別采用液相色譜法和膠體金檢測試紙法測定，將采用兩種試驗方法得到的測定值進行比較（液相色譜法測定結果作為參考），運用公式：

通過計算精確度的范圍在85.4%～128.2%，平均101.2%。結果詳見表1。

表1 膠體金檢測試紙精確度檢測結果比較分析表

3 結論

本文以小麥作為分析對象，采用免疫親和高效液相色譜分析小麥中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON），研究DON在分析對象中的分布變化規律。該方法采用免疫親和柱凈化，以甲醇∶乙腈∶水=10∶10∶80（V/V/V）為流動相，進樣量100 μL，方法檢出限為25 μg/kg。膠體金試紙方法檢出范圍0～4 000 μg/kg，對這些樣本用液相色譜法和膠體金檢測試紙法進行測定，得到精確度的范圍在85.4%～128.2%，平均101.2%。在實驗室的樣品檢驗中可以通過膠體金檢測試紙法進行篩選，對于超標的可以再進行高效液相色譜法進行驗證，有利于提高實驗室的檢驗效率。