不同病程阿爾茨海默病患者尿液中AD7c-NTP含量的研究*

郭曉聰 ，徐曉婭，黃琳明，殷明剛

1. 四川省自貢市第一人民醫(yī)院檢驗科(自貢643000)，2. 四川省自貢市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(自貢643000)

主題詞 阿爾茨海默病/診斷 @阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白 認知功能障礙 遺忘

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是癡呆的最常見的原因,按其病程可分為輕度、中度、重度癡呆階段。而輕度認知障礙(Mild congnitive impairment,MCI)是AD的早期階段，如果在此階段不加干預(yù)，其每年向AD發(fā)展的幾率達到10%～15%[1]。AD的核心的病理特征為β-淀粉樣蛋白的沉積和神經(jīng)元纖維纏結(jié)。常見生物標記物為腦脊液中的Aβ，和Tau蛋白，但因其需要取腦脊液標本，具有創(chuàng)傷性，患者接受性較差。近年來有研究表明[2-3]，阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白( AD7c-NTP)在阿爾茨海默病患者腦脊液及尿液中均呈高表達狀態(tài);而尿液中AD7c-NTP的檢測，因其具體無創(chuàng)性，故成為理想的生物標志物。但目前其在AD中的診斷價值，尤其在aMCI階段的表達情況，以及在不同AD階段中的表達變化尚無定論。因此，本研究通過測定不同階段AD患者尿中AD7c-NTP的水平,以探討其在AD輔助診斷中的價值。

資料與方法

1 一般資料 選取我院2016年1月至2017年12月記憶門診及神經(jīng)內(nèi)科住院部收治的68例AD患者，及根據(jù)其CDR評分，分為輕度AD組(36例)及中重度AD組(32例)，選取aMCI患者38例為aMCI組，并選取同期智能正常的30名健康志愿者為正常對照組。AD組納入指標：根據(jù)美國國立老化研究院和阿爾茨海默病協(xié)會于2011年修訂的 AD 診斷標準(即NIA-AA診斷標準)考慮診斷為很可能的AD癡呆[4]；經(jīng)神經(jīng)心理學(xué)檢測：MMSE 量表：中學(xué)及其以上文化者≤24分，小學(xué)文化者≤ 20 分，文盲者≤ 17 分；ADL的評分≥25分；臨床癡呆評定量表(CDR) 評分≥1 分；漢密爾頓抑郁量表(HAMD) 評分≤7 分；Hachinski 缺血指數(shù)量表(HIS) 評分≤4分。半年內(nèi)頭顱 MRI影像學(xué)診斷提示為非其他原因?qū)е掳V呆。并根據(jù)CDR的評分，將CDR=1分者納入輕度AD組，將CDR=2分及3分者納入中重度癡呆組。aMCI組納入標準：參照修訂版Petersen診斷標準：①通過患者本人或知情者報告，或經(jīng)有經(jīng)驗的醫(yī)師發(fā)現(xiàn)患者存在認知損害；②經(jīng)客觀量表證實，存在一個或多個認知領(lǐng)域損害的證據(jù)；但患者保持獨立的日常生活能力，復(fù)雜的工具性日常生活能力可能存在輕微損害；③未達到癡呆診斷標準。④MMSE的評分范圍在24～30分，ADL<25分，CDR=0.5分。本研究選擇MCI分型中遺忘型單認知或多認知領(lǐng)域損害者(aMCI)。排除標準：①患有其他可致認知功能減退的神經(jīng)系統(tǒng)疾病者：如帕金森病、顱內(nèi)腫瘤、血管性癡呆以、正常顱壓腦積水、路易體癡呆等；②患有可導(dǎo)致癡呆的系統(tǒng)性疾病者：如酒精中毒性腦病、HIV感染、神經(jīng)梅毒、維生素B12缺乏、甲狀腺功能減退等；③藥物、毒物所致的癡呆；④瞻望狀態(tài)；⑤其他精神障礙所致(如抑郁、精神分裂癥)。

2 尿AD7c-NTP的測定 各組受試者均于清晨留取中段尿10 ml，采用廣州漢光醫(yī)藥進出口有限公司提供的尿液AD7c-NTP檢測試劑盒，將采集的合格尿液標本于1700×g離心10 min，取上清液，置2 ml EP管，于-80 ℃密封保存?zhèn)溆茫鲜霾襟E于 2 h 內(nèi)完成。嚴格按照試劑盒說明書進行操作，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，BIO-RAD Model 680酶標儀(美國Bio-Rad公司)450 nm 波長處測定吸光度(OD)值，獲得尿液AD7c-NTP表達水平。出現(xiàn)下列任意一種情況即為不合格標本：①尿蛋白陽性;②在尿液白細胞以及紅細胞的計數(shù)上存在異常，還會有細菌滋生的現(xiàn)象;③pH值異常(5.40 ～8.40);④尿比重異常(1.00～1.03);⑤在患者尿液中含有少許結(jié)晶;⑥尿糖、尿酮體、尿硝酸鹽、尿膽紅素或尿膽原呈陽性。

結(jié) 果

1 不同組別受試者一般資料的比較 四組受試者在性別、年齡、受教育年限方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2 不同組別受試者MMSE及MoCA評分比較 見表1。

表1 各組受試者MMSE及MoCA評分比較分)

注：與正常對照組比較，▲P<0.05，▼P<0.01；與aMCI組比較，☆P<0.05，★P<0.01；與輕度AD組比較，◇P<0.05，◆P<0.01

3 各組受試者尿AD7c-NTP含量比較 見表2。

表2 各組受試者尿AD7c-NTP含量的比較

注：與正常對照組比較，▲P<0.05，▼P<0.01；與aMCI組比較，☆P<0.05，★P<0.01；與輕度AD組比較，◇P<0.05，◆P<0.01

討 論

2011年美國國立老化研究院和阿爾茨海默病協(xié)會修訂了AD的診斷標準，即 NIA-AA診斷標準[4]，該標準強調(diào)了AD診斷的連續(xù)性，故生物標志物在其診斷中具有重要的作用，尤其是癡呆前的MCI階段。目前比較公認的生物標志物為腦組織或腦脊液中的Aβ、Tau 蛋白，經(jīng)PET或抽取腦脊液進行檢測。因上述標志物的檢查其價格昂貴、標本采集困難等原因，故難以在臨床進行廣泛開展。

AD7c-NTP是一個相對分子質(zhì)量約為 41KD 的跨膜磷蛋白，在神經(jīng)元胞體中表達，在 AD 腦組織中選擇性增高，與神經(jīng)炎癥和細胞凋亡密切相關(guān)[5]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)， AD患者的腦組織、腦脊液和尿液中AD7c-NTP分子含量均有增加，其對AD早期診斷具有較高的敏感性和特異性[6]。另有研究表明，MCI階段的患者腦脊液及尿液中 AD7c-NTP 的含量也有所升高[7]。同時也有研究表明，尿AD7c-NTP 的含量與癡呆的嚴重程度相關(guān)[8]。因尿液標本相對易于獲取，故尿AD7c-NTP可能成為AD的新的理想的標志物。Goodman等[9]通過對AD 患者和非 AD 患者尿樣中 AD7c-NTP 的含量進行對比研究發(fā)現(xiàn)，AD 組患者尿 AD7c-NTP的含量顯著高于非AD癡呆組及正常對照組。在MCI方面，Chen Y等[10]通過分析52例MCI患者和33例正常對照組受試者進行尿AD7c-NTP 含量的測定并分析，提示當尿AD7c-NTP 含量為 268.57 ng/L 時，對應(yīng)的靈敏度和特異度分別為 83.3% 和 90.0%，其和最大。Zhang N等[11]通過對22例輕中度AD及8例MCI進行研究，且所有患者均進行了PIB-PET檢查和尿AD7c-NTP 含量的測定，結(jié)果提示，以尿AD7c-NTP 含量1.46ng/ml為分界值，68.8%的PIB-PET顯示的Aβ陽性者尿AD7c-NTP 含量增高，而92.9%Aβ陰性者尿AD7c-NTP 含量正常，提示其在評估AD和MCI患者的Aβ沉積方面具有高度的特異性和中度的敏感性。以上研究均提示，尿AD7c-NTP 的含量的測定在AD及MCI中具有較高的特異度和靈敏度。

本研究對aMCI組患者以及輕度、中重度AD患者進行神經(jīng)心理量表的測定，提示隨著病情的加重，其MMSE及MoCA評分逐漸減低。進一步對幾組受試者進行尿液AD7c-NTP的測定，結(jié)果顯示：三組患者尿液AD7c-NTP含量分別為(1.87±0.78)ng/ml、(2.25±0.27)ng/ml、(3.42±0.35)ng/ml，與正常對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；與aMCI組比較，輕度及中重度AD組尿AD7c-NTP含量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；輕度AD組與中重度AD組比較，中重度AD組尿AD7c-NTP存在較高的含量。提示不同病情程度的AD患者，尿液中AD7c-NTP含量均有增高，且增高的程度與癡呆的嚴重程度具有相關(guān)性。尿液中AD7c-NTP含量的檢測有望作為AD患者輔助診斷的生物學(xué)指標。

此次研究采用尿液AD7c-NTP含量的檢測最大的優(yōu)勢在于無創(chuàng)，容易被患者接受；但此檢測對尿液標本的要求較高，對于合并較多基礎(chǔ)疾病(如腎功能不全)的患者不適用；且對檢測的技術(shù)要求較高。本研究尚存在一定局限性，ELISA 試劑盒存在一定缺陷，如影響抗原抗體反應(yīng)的因素較多,且常可出現(xiàn)板間變化；另外，這次研究沒有進行ELISA 復(fù)孔試驗環(huán)節(jié)，故可能導(dǎo)致假陽性增高；同時，因本研究納入的樣本量偏小，故尿液AD7c-NTP分子的含量是否和 AD 病程相關(guān)，尚需我們進一步擴大樣本、提高檢測技術(shù)進行更為深入的研究。