原子吸收分光光度法測定安宮牛黃丸中雄黃和朱砂的含量

貢慶欣 李文君 張進

安宮牛黃丸是我國傳統藥物中最負盛名的急癥用藥，由牛黃、水牛角、麝香、雄黃、朱砂、冰片等11味藥材組成，其中雄黃和朱砂為毒性成分[1-2]?！吨袊幍洹?015年版一部該品種項下沒有規定雄黃和朱砂的含量測定，無法對其質量進行有效控制[1]。近年來針對安宮牛黃丸質量的研究主要集中在其他成分的含量，對雄黃和朱砂含量的研究很少[3-6]。本實驗參照 《中國藥典》并通過實驗摸索，采用原子吸收分光光度法[7]測定了不同生產企業 6批安宮牛黃丸中雄黃和朱砂的主要成分砷和汞的含量，為制定該藥物中雄黃和朱砂含量限度提供了依據。

1 儀器與試藥

Agilent 200 SeriesAA型原子吸收分光光度計及工作站（美國Agilent公司）；CEM MARS 高通量密閉微波消解儀（美國CEM公司）；汞、砷空心陰極燈（北京有色金屬研究總院），汞（Hg）單元素標準溶液（1 000 μg/ml，編號GBW08617，批號18031，中國計量科學研究院）；砷（As）單元素標準溶液（1 000 μg/ml，編號GBW08611，批號17123，中國計量科學研究院）；AL104電子天平；鹽酸和硝酸均為優級純，水為超純水；安宮牛黃丸6批，均為市售成藥，來自6家藥品生產企業。

2 方法

2.1 實驗方法

對照品貯備溶液的制備：精密量取砷單元素標準溶液和汞單元素標準溶液適量，分別加水制成每 1 ml含砷、汞各100μg 的溶液，即得。

標準曲線溶液的制備：精密量取砷、汞對照品貯備溶液適量，分別加 10%混合酸[硝酸-鹽酸（4∶1）]溶液制成每 1 ml 含砷、汞 0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg 的溶液，作為砷標準曲線溶液和汞標準曲線溶液。

供試品溶液的制備：取本品10丸，剪碎，混勻，精密稱取0.2 g，置聚四氟乙烯微波消解罐中，加入硝酸 4 ml、鹽酸 1 ml，置微波消解儀中消解，消解條件：功率1 600 W，5 min內由室溫升至120℃，在120℃保持5 min，在5 min內由120℃升溫至160℃，在160℃保持5 min，然后5 min內由160℃升溫至180℃，在180℃保持20 min，最后25 min內由180℃降溫至30℃。消解液放冷，轉移至50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加 10%混合酸[硝酸-鹽酸（4∶1）]溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。同法制備試劑空白溶液。

測定：精密吸取砷、汞標準曲線溶液、供試品溶液和試劑空白溶液，按照原子吸收分光光度法（火焰原子化器，標準曲線法）[7]，在 193.7 nm 波長處測定砷，在 253.7 nm 波長處測定汞，計算，即得。

2.2 方法學考察

2.2.1 陰性干擾試驗 按處方工藝制備不含雄黃的陰性樣品，取 6份，按2.1 實驗方法測定砷的含量，結果6份樣品均未檢出砷，說明樣品中除雄黃外的其余藥材對砷的含量測定沒有干擾；按處方工藝制備不含朱砂的陰性樣品，取 6份，按2.1 實驗方法測定汞的含量，結果6份樣品均未檢出汞，說明樣品中除朱砂外的其余藥材對汞的含量測定沒有干擾。陰性干擾試驗表明該方法的專屬性良好。

2.2.2 線性關系考察 精密量取砷、汞對照品貯備溶液適量，加 10%混合酸[硝酸-鹽酸（4∶1）]溶液分別制成每1 ml 含 砷 0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg 的溶液和每 1 ml 含汞 0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg的溶液，照原子吸收分光光度法（火焰原子化器，標準曲線法）[7]，在 193.7 nm 波長處測定砷的吸光度，在 253.7 nm 波長處測定汞的吸光度，以吸光度為縱坐標（ Y，ml ），以濃度為橫坐標（ X，μg /ml ），得砷的回歸方程Y = 5.302×10-3X +2.997×10-3，r = 0.999 6，汞的回歸方程Y= 3.793×10-3X +5.638×10-3，r = 0.999 7。結果表明砷和汞的濃度在0～50 μg/ml范圍內與吸光度之間線性關系良好。

2.2.3 重復性試驗 稱取同一批號安宮牛黃丸，剪碎，混勻，取約0.2 g，精密稱定，共6份，按2.1項下方法測定砷和汞含量，結果砷的平均含量為37.87 mg/g，RSD 為1.39%，汞的平均含量為45.59 mg/g，RSD 為1.28%，表明方法的重復性性良好。

2.2.4 穩定性試驗 稱取同一批號安宮牛黃丸，剪碎，混勻，取約0.2 g，精密稱定，共6份，分別放置0、2、4、8、12、24小時，按2.1.1項下方法測定硫化汞含量，結果砷的RSD 為1.32%，汞的RSD 為1.45%，表明在24小時內的穩定性良好。

2.2.5 加樣回收試驗 精密稱取已知砷含量的安宮牛黃丸（批號17030006，As含量37.93mg /g）6份，每份約0.1 g，精密加入砷單元素標準溶液（1 000 μg/ml ） 4 ml，混勻，按2.1實驗方法測定砷的回收率，結果平均回收率為 98.86%，RSD為1.08%。

精密稱取已知汞含量的安宮牛黃丸（批號17030006，As含量45.65 mg /g）6份，每份約0.1 g，精密加入汞單元素標準溶液（1 000 μg/ml ） 4 ml，混勻，按2.1實驗方法測定汞的回收率，結果平均回收率為98.95%，RSD為0.99%。

加樣回收試驗結果表明，該方法具有良好的準確性。

3 實驗結果

精密稱取6批不同批號的安宮牛黃丸樣品，每批隨機取3份，每份約 0.2 g，按2.1方法測定砷和汞的含量。結果見表 1、2。

表 1 安宮牛黃丸中砷的含量測定結果（n=3）

表 2 安宮牛黃丸中汞的含量測定結果（n=3）

4 討論

目前測定砷、汞含量的方法主要有容量法[8-9]、原子吸收分光光度法（AAS）[10-12]、電感耦合等離子體原子發射光譜法（ICP-AES）[12]、電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）[13]等。與AAS法相比，容量法存在操作繁瑣、靈敏度低、取樣量大、有時消化不完全等缺點；ICP-AES法和ICP-MS由于靈敏度太高，當樣品中砷、汞含量較高時，容易導致儀器被污染。AAS法靈敏度高、專屬性強，適合應用于中成藥中雄黃和朱砂的含量測定。

由于本品中雄黃和朱砂含量較高，用石墨爐原子化器容易導致石墨爐被污染，用氫化物發生原子化器操作相對繁瑣，選擇火焰原子化器操作簡便，能夠滿足實驗要求。

實驗中選擇不同的消解試劑進行比較，即硝酸、硝酸-鹽酸（4∶1）、硝酸-鹽酸（3∶2）、硝酸-過氧化氫（4∶1），結果選擇硝酸-鹽酸（4∶1）消解效果最好。同時還對微波消解的不同升溫條件進行了比較，結果在正文中的升溫條件下消解最完全。

采用本文方法對6批安宮牛黃丸中雄黃和朱砂的含量進行了測定，6批供試品中的砷含量為18.27～37.93 mg/g，汞含量為22.79～43.65 mg/g。按每丸重3 g計算，砷含量在54.81～113.79 mg /丸范圍內，汞含量在 68.37～130.95 mg /丸范圍內。不同廠家、批次樣品含量差異較大，分析原因主要有以下幾方面：（1）有的企業對所用的雄黃和朱砂藥材未測定含量，可能采用不合格的雄黃和朱砂投料；（2）有的企業未按規定對雄黃和朱砂進行水飛炮制，故不敢按處方規定加入足量的雄黃和朱砂；（3）由于藥典對安宮牛黃丸中的雄黃和朱砂未規定含量測定，個別企業為了降低成本，在生產中有意減少雄黃和朱砂黃的投料量。

雄黃和朱砂的主要成分分別為二硫化二砷（As2S2）和硫化汞（HgS），由于處方中只有雄黃含砷，朱砂含汞，可以根據測定砷和汞的含量來確定制劑中雄黃和朱砂的含量限度以及含量上限。建議《中國藥典》增加安宮牛黃丸中雄黃和朱砂的含量測定，以有效控制生產投料，保證藥品質量。