4種性誘劑誘芯對茶園尺蠖的引誘與預測效果

張家俠， 孫欽玉， 葛超美， 葉 濤， 夏先江， 丁 勇

(安徽省農業科學院茶葉研究所，安徽黃山 245000)

灰茶尺蠖(EctropisgrisescensWarren)和茶尺蠖(EctropisobliquaProut)屬鱗翅目尺蛾科的2個近緣種，為茶園主要的食葉類害蟲[1-2]。茶尺蠖和灰茶尺蠖的形態特征極為相似，在生產上常統稱為茶尺蠖或茶尺蛾。近年來，在茶園使用茶尺蠖核型多角體病毒(EoNPV)時發現，EoNPV對不同地區茶尺蠖的防治效果存在差異。席羽研究發現，不同地理種群的“茶尺蠖”對EoNPV的敏感性存在差異，在11個“茶尺蠖”地理種群中，8個地理種群(江蘇揚州、安徽潛山、浙江衢州、浙江龍游、湖南長沙、湖南高橋、湖北武漢、湖北襄樊)對EoNPV為低敏感性，3個地理種群(江蘇宜興、浙江杭州、安徽十字鋪)對EoNPV為高敏感性，且種群間毒力水平差異高達700余倍，并存在生殖隔離，判斷兩者可能不是同1個種[3]。為明確差異，姜楠等通過形態學鑒定和基于線粒體COⅠ的分子鑒定手段成功區分灰茶尺蠖和茶尺蠖，并發現對EoNPV低敏感性種群為灰茶尺蠖，高敏感種群為茶尺蠖[4]。現初步明確灰茶尺蠖廣泛分布于我國各產茶省份(市、區)或地區，而目前發現茶尺蠖主要分布在浙江、江蘇、安徽3省交界的部分區域[5]。研究3種茶尺蠖誘芯和1種中試階段的灰茶尺蠖誘芯的引誘效果差異，旨在明確試驗區效果最優尺蠖性誘芯，并為茶園尺蠖的預測預報和防治提供指導。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

4種誘芯中除北京中捷四方生物科技有限公司的誘芯為毛細管型誘芯以外，其他3種均為反口鐘型天然橡膠誘芯，具體信息和編號如表1所示。誘捕器和白色黏蟲板均購自福建省漳州市英格爾農業科技有限公司，其中誘捕器為長×寬×高為 27 cm×21.6 cm×14 cm的船型誘捕器，黏蟲板為 28 cm×22 cm 的單面黏蟲板。

表1 誘芯基本信息

1.2 試驗方法

1.2.1 性誘芯的田間布置 試驗時間為2016年6月23日至9月6日，試驗地點在安徽省黃山市屯溪區屯溪試驗茶廠茶園，試驗期間茶園未使用藥劑。

選擇總面積約4 669 m2的連片茶園，按三角形設置3個誘捕區(即重復3次)，每誘捕區由4個誘捕器組成，按正方形設置，誘芯分別是中捷四方(BL)、英格爾(ZL)、紐康(NL)、中茶所(TL)。誘捕區間距為45 m，每個誘捕器間距為12 m，誘捕器與田邊間距不少于5 m，將3根竹竿呈H型固定，誘捕器懸掛在橫向竹竿上，底部與茶蓬間距約為20 cm，將誘芯嵌入誘芯架內，誘捕器安置后，每25 d更換1次誘芯，每隔3 d調查1次，調查時間選擇在上午，分別檢查誘蛾數，統計并記載每次誘捕器誘蛾數量。田間具體布置方案如圖1所示。

1.2.2 尺蠖種類的分子鑒定 采用線粒體COⅠ分子鑒定方法對茶園尺蠖種類進行鑒定。

將4種性誘芯誘集的尺蠖成蟲分別進行基因組DNA提取(編號分別為：BL-1、BL-2、BL-3；ZL-1、ZL-2、ZL-3；NL-1、NL-2、NL-3；TL-1、TL-2、TL-3)，所用試劑盒為TIANamp Blood DNA Kit[天根生化科技(北京)有限公司]。以提取的總DNA為模板，采用通用引物(表2)擴增灰茶尺蠖線粒體DNACOⅠ基因片段，PCR擴增方法參照袁志軍等的方法[6-7]。PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后，送至上海華津生物科技有限公司進行雙向測序。

表2 線粒體COⅠ基因引物序列

將測序所得的DNA序列用SeqMan 7.1軟件進行校對拼接后，在NCBI網站(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)上進行Blast檢索和同源性比對，以確定所得序列是否為所需要的目的基因，并利用DNAMAN軟件進行多序列比對。

2 結果與分析

2.1 4種性誘芯對茶園尺蠖的引誘效果

由表3可知，在整個調查期，4種誘芯3次重復累計誘殺尺蠖成蟲數分別為19(BL)、4(ZL)、196(NL)、797(TL)頭。與其他3種誘芯相比，誘芯TL誘捕成蟲量最高，差異極顯著，其中誘芯NL對茶園尺蠖也具有一定的引誘能力，較BL、ZL的誘捕量要高，差異顯著，而BL與ZL間差異不顯著。另外，從日誘捕量分析可知，4種誘芯的最高日平均誘蟲量差異明顯，調查期內BL日均誘蟲量最高為 1.67頭/d，ZL為 0.67頭/d，NL為13.33頭/d，而TL為 24.67頭/d，TL的引誘能力明顯高于其他3種誘芯(圖2)。由此可知，灰茶尺蠖誘芯TL對試驗區茶園尺蠖的引誘效果最好，而另外3種茶尺蠖誘芯對該試驗區尺蠖引誘效果相對較差，其中誘芯NL對尺蠖有一定的引誘能力。

表3 4種誘芯田間誘殺效果

注：統計分析采用DPS 7.05 Duncan’s新復極差法，同列數據后不同小寫字母、大寫字母分別表示處理間差異顯著(P<0.05)、差異極顯著(P<0.01)。

2.2 試驗區茶園尺蠖的種類

基于線粒體COⅠ分子鑒定手段，利用DNAMAN基因比對軟件對各誘芯誘集的尺蠖成蟲線粒體COⅠ基因499 bp序列進行比較分析，比對結果如圖3所示。獲取的試驗區樣本序列與姜楠等得到的灰茶尺蠖COⅠ基因序列(GenBank登錄號：KJ704354)[4]完全一致，說明該試驗區尺蠖發生種類為灰茶尺蠖。

2.3 茶園尺蠖成蟲發生高峰期預測

通過分子鑒定已明確該試驗區所發生尺蠖為灰茶尺蠖。將整個調查期內灰茶尺蠖誘芯TL的誘蟲高峰期與3種茶尺蠖誘芯中引誘效果相對好的NL進行比較分析，結果表明，6月26日灰茶尺蠖誘芯TL和茶尺蠖誘芯NL 3 d平均誘蟲量分別為24.7、3.3頭，均為同期內最高值。根據文獻和歷史發生期調查數據[8]，由圖4可類推，6月25—27日為灰茶尺蠖的第2代成蟲發生高峰期；7月19—21日為第3代成蟲發生高峰；8月12—14日為第4代成蟲發生高峰期。另外，第2代成蟲發生高峰期誘蟲量明顯高于第3、4代，可能與不同代次發生期溫濕度有關。

3 結論與討論

(灰)茶尺蠖是茶園主要的食葉類害蟲，對茶葉生產可造成嚴重影響[9-12]。性誘劑作為一種重要的無公害防治手段，隨著其開發和技術的不斷成熟，目前已廣泛應用于(灰)茶尺蠖的預測預報和生物防治中[13-17]。由于田間存在茶尺蠖和灰茶尺蠖2種尺蠖，所以明確不同地區茶園的高效誘芯種類，對于合理有效地防治茶園尺蠖具有重要的生產指導意義。

本研究對比分析3種茶尺蠖誘芯和1種中試階段的灰茶尺蠖誘芯在田間對尺蠖的引誘效果，結果表明，3種茶尺蠖誘芯和1種灰茶尺蠖誘芯在試驗區對尺蠖的引誘效果存在明顯差異，其中以灰茶尺蠖誘芯的引誘蟲頭數最多，與其他3種茶尺蠖誘芯均差異極顯著。對比分析所誘集尺蠖的線粒體COⅠ 基因序列發現，該試驗區尺蠖均為灰茶尺蠖，所以灰茶尺蠖誘芯在該地區引誘效果最好。性信息素專一性強，在生產中根據尺蠖發生種類， 有針對性地選擇誘芯對尺蠖高效防治至關重要。

通過對成蟲發生高峰期進行預測可知，調查期各代成蟲高峰期誘捕量存在較大差異，可能與氣候條件有關[8，18]。灰茶尺蠖最適溫度為21～25 ℃，該溫度范圍內繁殖力最強，溫度大于27 ℃時生命力開始下降[8]。試驗期內，6月下旬黃山溫度為21～27 ℃，適合尺蠖生長發育，誘捕數量最高；7月、8月溫度升至30 ℃以上，成蟲發生高峰期溫度則高達35 ℃以上，尺蠖生長發育受到抑制，誘蟲量下降。