超數排卵處理對小鼠子宮組織結構的影響

顧紅霞，鄒晨鵬

（贛州農業學校，贛州 341100）

0 引言

子宮是一個中空的肌質性器官，富有伸展性，是胎兒生長發育和娩出的器官。子宮借子宮闊韌帶附著于腰下部和骨盆腔側壁，大部分位于腹腔內，小部分位于骨盆內，在直腸和膀胱之間，前端與輸卵管相接，后端與陰道相通。子宮闊韌帶為寬而厚的腹膜褶，含有豐富的結締組織、血管、神經及淋巴管，其外側有子宮圓韌帶。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗組織

超數排卵處理后的子宮10個和未經處理的子宮10個。

1.1.2 試劑與藥品

70%、80%、90%、95%酒精及無水酒精、二甲苯、甲醛、蘇木素液、1%的鹽酸酒精、伊紅水溶液、蒸餾水。

1.1.3 主要儀器

包埋機：型號KD-BM，浙江省金華市利迪儀器設備有限公司生產生產。

切片機：型號RM2235，上海萊卡儀器有限公司生產。推片機：型號TP-1，上海醫療儀器廠產品。

烘片機：型號KD-H，浙江省金華市利迪儀器設備有限公司生產。

顯微鏡及圖像采集系統：型號OLYMPUS-BH2，沈陽市互利康醫療器械公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 子宮組織切片制作

（1）取材。取出超數排卵處理和未處理的小鼠子宮各10個，放在10%的福爾馬林溶液中固定5～7 d，制作切片前于相同部位切取組織塊。

（2）脫水。組織塊用自來水沖洗4～6 h，然后再用不同濃度的酒精逐級脫水。脫水的時間如下：①70%酒精，4～6 h（也可長期保存）；②80%酒精，4～6 h；③90%酒精，4～6 h；④95%酒精Ⅰ、Ⅱ各4～6 h；⑤無水酒精Ⅰ、Ⅱ各 2 h。

（3）透明。酒精與石蠟不能混和，因此脫水后的材料在浸蠟前必須經過透明。透明劑既可替代組織中的酒精，又能溶解石蠟，有利于石蠟的滲入。二甲苯是常用的一種透明劑。將脫水后的材料經1∶1無水酒精與二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各級時間為0.5～2 h，使組織達到透明為止。

（4）浸蠟和包埋。透明后的組織塊做好標記，放入包埋機中，依次在石蠟Ⅰ（56 ～58 ℃）和石蠟Ⅱ（58～60 ℃）中浸蠟，各2 h，取出后再用60 ℃的蠟包埋，待蠟和組織塊完全冷卻，修整蠟塊。

（5）切片、貼片和烘片。將修整好的蠟塊置于切片機上進行切片，厚度為5 mm。選擇較好的切片置于45 ℃恒溫水浴鍋中進行展片，2～3 min即可，用洗好的載玻片輕輕取出展好的切片，并將其放到烘片機上烘2～4 h。

（6）脫蠟、染色。將載有切片的載玻片依次放入下面的液體中進行脫蠟。①二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5～10 min；②無水酒精1 min；③90%酒精1 min；④80%酒精1 min；⑤70%酒精1 min；⑥蒸餾水3～5 min；⑦蘇木素液7～10 min；⑧1%鹽酸酒精分色1～3 s；⑨自來水洗5～15 min；⑩伊紅水溶液1～3 min；k70%酒精2 min；l80%酒精2 min；m90%酒精2 min；n95%酒精Ⅰ、Ⅱ各2 min；o無水酒精Ⅰ、Ⅱ各5 min；p蒸餾水3 min；q二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各5 min。

（7）封片。中性樹膠滴到組織上，蓋上蓋玻片，平置晾干，每組制片30張。

1.2.2 顯微鏡下觀察

在顯微鏡下觀察子宮的組織結構，拍攝照片并做好相關記錄。

2 結果與分析

未經過超數排卵處理的小鼠，子宮黏膜表面較平整，子宮內膜上皮是單層柱狀上皮，上皮細胞成矮柱狀，少數腺體有彎曲，有腔的腺體很少，分布稀疏，子宮腺不發達，子宮壁相對比較薄，見圖1、圖2。超排后，在激素的作用下子宮開始發育，子宮壁厚度增加，子宮內膜胚性結締組織迅速增生變厚，上皮為假復層柱狀上皮，上皮細胞變得較高較密，腺體較彎曲，腺腔增大，腺體發達，有稀少分泌物，腺體分布較密，見圖3、圖4。子宮壁表面不完整，這是由于子宮內膜增厚，上皮細胞變密，子宮黏膜內的子宮腺非常發達，腺腔增大、彎曲、增生，分泌更加旺盛，血管迅速增長，間質疏松并有水腫，因此，切出的片表現不完整，有像突起和皺褶一樣的結構。

圖1 對照組子宮 40×

圖2 對照組子宮 40×

圖3 超排處理組子宮 40×

圖4 超排處理組子宮 40×

3 討論

3.1 對子宮組織結構的影響

超排后雌激素水平達到高峰，小鼠子宮內膜上皮細胞和子宮腺細胞均為高柱狀，細胞排列整齊，可見核分裂象，子宮腺較發達，子宮壁變厚[1]。

3.2 對子宮內膜的影響

超數排卵處理后，小鼠子宮內膜形態表現與對照組明顯不同，鏡下可見內膜表層細胞呈鋸齒狀，宮腔間隙較寬，被復粘膜層子宮腺發育，固有膜寬大，肌壁厚，見圖3、圖4；而對照組小鼠子宮腔呈裂隙狀，粘膜層平坦，被復上皮由柱狀單層立方組成，子宮腺少，固有膜窄，肌壁薄，見圖1、圖2。

超數排卵處理后，FSH激素促進子宮內膜腺的分泌，引起附植現象的出現。

胚泡附植過程中，子宮內膜細胞內的水解酶，可消化子宮液中的大分子物質為胚泡提供發育的營養。同時，水解酶還在胚泡疏松附植、穿入和子宮內膜的蛻膜化過程中具有重要作用[2]。

3.3 對子宮腺的影響

超排后子宮切片上皺褶增加，表明超排在時大量激素的作用下子宮腺的發育更充分，子宮腺體增加，子宮腺體較大蜷曲，出現許多分支管狀腺，腺體腔隙增大導致切片上子宮黏膜不完整[3]，說明超排處理時的激素對子宮壁的結構以及子宮腺的發育有促進作用，可以滿足超排后更多胚胎附植的需要。

4 結論

試驗通過對小鼠子宮組織切片的觀察，經試驗組與對照組的比較，發現經超數排卵激素的處理，子宮內膜發生變化，主要表現為子宮內膜上皮增生、腺體加長、腺腔加大、彎曲增多，子宮內膜的結締組織和成纖維細胞發育，子宮壁變厚可以為胚胎的著床和發育提供良好的環境。