子宮內(nèi)膜癌組織中hTERC基因表達(dá)及臨床意義

符麗華，欒 峰，米賢軍，代新珍，羅小婉，高子軒，鄭敏慧，陳 昂，孫佳星

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山博愛醫(yī)院，廣東 中山 528400)

子宮內(nèi)膜癌(Endometrial carcinoma,EC) 是女性最常見的惡性腫瘤[1]， 目前對(duì)子宮內(nèi)膜癌變?cè)缙谠\斷和預(yù)后判斷尚沒有較可靠的方法，惡性腫瘤的發(fā)展是多基因共同作用的結(jié)果，基因調(diào)控異常使正常細(xì)胞突變?yōu)榘┌Y胞，所以通過(guò)對(duì)子宮內(nèi)膜癌相關(guān)基因表達(dá)研究能夠更加了解子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制，從而幫助臨床早期診斷，做出相應(yīng)及時(shí)有效的治療方案，有利患者預(yù)后。人類染色體端粒酶RNA(human telomerase gene，hTERC)由Feng發(fā)現(xiàn)[2]，hTERC 基因異常導(dǎo)致端粒酶活性降低，端粒酶異常是組織癌變的常見現(xiàn)象與宮頸癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。本項(xiàng)目通過(guò)研究人類染色體端粒酶RNA基因(human telomerase gene，hTERC)在子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)情況，分析其與臨床關(guān)系，探討hTERC在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的臨床意義，為臨床探索子宮內(nèi)膜癌早期診斷和預(yù)后提供理論依據(jù)，并為實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料：收集2015年4月～2016年8月我院病理科25例子宮內(nèi)膜樣腺癌手術(shù)標(biāo)本的石蠟切片。子宮內(nèi)膜癌按FIGO,2009年手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期18例，Ⅱ期 2例 ，Ⅲ期 3例，Ⅳ期2例；高分化腺癌 9例，中分化腺癌 8例，低分化腺癌 8例。患者年齡29～67歲，平均51.04歲。選取25例診刮正常子宮內(nèi)膜組織蠟塊作為對(duì)照，年齡23～53歲，平均37.3歲，所有患者病例資料完整術(shù)前均未接受藥物治療及放化療。

1.2研究方法：手術(shù)或診刮的子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本按病理常規(guī)固定，石蠟包埋，切片厚度4～5 μm，HE染色，惡性腫瘤免疫組化進(jìn)一步確診。取典型病灶的子宮內(nèi)膜石蠟包埋組織標(biāo)本切片2 μm共3張預(yù)處理后做FISH檢驗(yàn)hTERC基因。FISH技術(shù)檢測(cè)hTERC基因[3-4]， 探針由北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司提供(GLP TERC/CSP3 DNA探針)(CSP3為對(duì)照探針)標(biāo)記顏色：綠/紅。用FISH分析軟件進(jìn)行圖像分析，評(píng)估GLP TERC/CSP3基因雙色雜交情況。雜交結(jié)果標(biāo)記顏色綠：紅；正常信號(hào)細(xì)胞為綠色及紅色信號(hào)各2個(gè)，即2∶2；擴(kuò)增異常信號(hào)細(xì)胞為綠色信號(hào)≥2個(gè)，紅色信號(hào)>2個(gè)，統(tǒng)計(jì)TERC紅色信號(hào)≥3個(gè)信號(hào)點(diǎn)的百分比(見圖1、圖2)。本研究通過(guò)研究建立閾值為5.91%，即異常細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)≥6 則判斷為hTERC基因有擴(kuò)增，結(jié)果為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較用率(%)，用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 子宮內(nèi)膜癌hTERC基因無(wú)擴(kuò)增

圖2 子宮內(nèi)膜癌hTERC基因有擴(kuò)增

2 結(jié)果

正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜樣腺癌hTERC基因陽(yáng)性表達(dá)率分別為20% (5/25)、36 % (9/25 )，子宮內(nèi)膜癌組織陽(yáng)性率高于正常子宮內(nèi)膜組，但經(jīng)χ2檢驗(yàn)兩組hTERC基因擴(kuò)增陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.587 3，P=0.207 7)。按子宮內(nèi)膜癌臨床分期，Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期hTERC基因陽(yáng)性率為40% (8/20 )、20% (1/5)，臨床期別早的hTERC基因陽(yáng)性比晚期病例擴(kuò)增增加，但經(jīng)過(guò)Fisher計(jì)算后，差異別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.620 6)，見表1。按子宮內(nèi)膜樣腺癌分化程度，高分化、中分化、低分化hTERC基因陽(yáng)性表達(dá)率分別為22.22% (2/9)、50% (4/8)、37.5% (3/8)，隨著腺癌分化程度越差，hTERC基因擴(kuò)增陽(yáng)性率增高，但經(jīng)過(guò)Fisher確切概率法計(jì)算后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.5165)。見表2。

表1hTERC基因與子宮內(nèi)膜腺癌臨床期別的關(guān)系[例(%)]

臨床分期hTERC基因擴(kuò)增例(陽(yáng)性)hTERC基因無(wú)擴(kuò)增例(陰性)Ⅰ/Ⅱ期8(40)12(60)Ⅲ/Ⅳ期1(20)4 (80)

表2hTERC基因與子宮內(nèi)膜腺癌分化程度的關(guān)系

分化程度hTERC基因擴(kuò)增例(陽(yáng)性)hTERC基因無(wú)擴(kuò)增例(陰性)高分化2(22.22)7(77.78)中分化4(50)4(50)低分化3(37.5)5(62.50)

3 討論

端粒是真核細(xì)胞染色體末端物質(zhì)維持染色體穩(wěn)定性，端粒過(guò)短使細(xì)胞進(jìn)入凋亡或惡變，而端粒酶用于維持端粒的穩(wěn)定[5]。人類染色體端粒酶RNA(hTERC)是端粒酶活性核心之一，hTERC基因的突變可導(dǎo)致端粒酶活性降低和端粒縮短，hTERC基因擴(kuò)增腫瘤預(yù)后不佳[6]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)hTERC與婦科腫瘤方面的研究多見于宮頸癌[7-9]，hTERC擴(kuò)增與宮頸病變程度及癌變相關(guān)，預(yù)后不良。在子宮內(nèi)膜癌中hTERC基因研究極少，國(guó)外MaidaSamojedny等研究子宮內(nèi)膜癌中端粒酶的活性表達(dá)明顯高于正常子宮內(nèi)膜[10-11]，國(guó)內(nèi)曹冬焱的研究發(fā)現(xiàn)hTERC基因在子宮內(nèi)膜重度不典型增生組和子宮內(nèi)膜癌組分別有42.9%和58.8%的異常表達(dá)，預(yù)示有發(fā)生子宮內(nèi)膜異常增生和癌變的傾向[12]。基于此，為進(jìn)一步明確hTERC基因在子宮內(nèi)膜正常表達(dá)水平及子宮內(nèi)膜癌變時(shí)該基因表達(dá)情況，經(jīng)本研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌患者較正常子宮內(nèi)膜組織hTERC基因有擴(kuò)增趨勢(shì)，并隨著癌細(xì)胞分化程度越差hTERC基因陽(yáng)性率增加，表面子宮內(nèi)膜惡性病變可能與hTERC表達(dá)異常相關(guān)，盡管沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有一定臨床意義，我們也將進(jìn)一步增加樣本量繼續(xù)探討，為針對(duì)端粒酶的子宮內(nèi)膜癌治療研究提供一定研究基礎(chǔ)。