超聲檢測乳腺癌PSV和RI值與術后組織中ephA7和AEG-1表達關系

馬進輝 馬淑梅 馬 琴 (青海大學附屬醫(yī)院超聲科，青海 西寧 8000)

乳腺癌主要見于中老年婦女〔1〕，術前常應用彩色多普勒超聲檢測收縮期峰值血流速度(PSV)和阻力指數(RI)，對判斷病變性質及病變程度有一定價值〔2，3〕。乳腺癌生長具有浸潤性特征，腫瘤生長時是富于血管的，可以為腫瘤生長提供氧和營養(yǎng)。星形膠質細胞上調基因(AEG)-1是近年發(fā)現的新的癌基因，可表達于腫瘤組織中，對促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移有重要意義〔4〕。近年研究認為酪氨酸蛋白激酶受體(eph)A7通過與Eph配體結合后激活細胞質內的酪氨酸激酶將信號逐級傳遞，影響內皮細胞的遷移、芽生和血管的形成，從而共同影響細胞的生長和分化，促進腫瘤細胞的形成和轉移〔5〕。本文觀察乳腺癌患者術前血流參數PSV和RI值與術后組織中ephA7和AEG-1的關系，分析其在不同臨床病理特征中的差異。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2015年1月至2016年12月青海大學附屬醫(yī)院確診為乳腺癌的82例女性患者為觀察組，年齡52～85歲，平均57.9歲。納入患者均行手術治療，并經病理確診且均為浸潤性癌。排除標準:①乳腺手術史;②術前行放化療。同期確診為乳腺腺病的21例女性患者為對照組，年齡48～67歲，平均50.2歲，對照組經術后病理確診。兩組均留取超聲資料，一般資料比較無明顯差異。

1.2 PSV和RI的檢測方法 采用彩色多普勒超聲診斷儀的高頻探頭，檢查時患者取仰臥位，上肢肘關節(jié)呈90°放在頭的兩側，將高頻探頭放置于乳腺的皮膚上，以乳頭為中心由內向外進行放射狀探測，對異常腫物進行仔細觀察，并應用多普勒血流顯像(CDFI)觀察腫塊內有無血流，并按Adler等〔6〕半定量法進行血流信號的分級(0～Ⅲ級)，并用脈沖多普勒檢測血流頻譜，測量PSV和RI值。

1.3 免疫組化方法檢測ephA7和AEG-1的表達 ephA7和AEG-1的檢測均基于術后石蠟包埋的組織，ephA7和AEG-1均為濃縮液，先行預實驗，以顯色最佳的濃度(ephA7 為 1∶200，AEG-1 為 1∶300)用于正式實驗。ephA7和AEG-1正式實驗應用免疫組化SP法，二氨基聯苯胺(DAB)顯色。做好質控工作。

1.4 免疫組化結果的判斷 ephA7的陽性部位為細胞質，AEG-1的陽性部位是細胞核和(或)細胞質，先在100倍鏡下選擇上皮細胞染色較為集中的熱點區(qū)，然后在400倍視野下觀察。評分按染色強度和陽性染色比例進行評定。強度評分:無顯色為0分，弱顯色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。陽性染色比例:陽性細胞數＜10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。以兩項相加為最后得分，以＜3分為陰性，以≥3分為陽性。計算陽性率。

1.5 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行χ2、t檢驗、方差分析和線性相關分析。

2 結果

2.1 兩組PSV和RI值比較 觀察組PSV和RI值明顯高于對照組(P＜0.05)。見表1。

2.2 兩組中ephA7和AEG-1陽性率的比較 兩組中ephA7和AEG-1陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

2.3 觀察組中PSV和RI值在不同臨床病理特征中的比較 觀察組中PSV和RI值與腫瘤的最大徑和細胞增殖指數密切相關，RI值與腫瘤的組織學分級密切相關(P＜0.05)。見表3。

表1 兩組PSV和RI值的比較()

表1 兩組PSV和RI值的比較()

組別 n PSV(m/s) RI觀察組 82 0.25±0.09 0.79±0.15對照組 21 0.17±0.06 0.44±0.09 t/P值 4.53/0.028 6.67/0.011

表2 兩組中ephA7和AEG-1陽性率的比較〔n(%)〕

表3 觀察組中PSV、RI值和ephA7、AEG-1陽性率在不同臨床病理特征中的比較()

表3 觀察組中PSV、RI值和ephA7、AEG-1陽性率在不同臨床病理特征中的比較()

臨床病理特征 n PSV(m/s) RI值 ephA7〔n(%)〕 AEG-1〔n(%)〕腫瘤最大徑 ＜3 cm 32 0.17±0.04 0.69±0.11 7(21.9) 10(31.3)≥3 cm 50 0.30±0.07 0.85±0.12 38(76.0) 30(60.0)t/P值 4.12/0.028 3.53/0.042 23.084/0.000 6.455/0.011細胞增殖指數 ＜50% 39 0.20±0.05 0.70±0.16 13(33.3) 11(28.2)≥50% 43 0.29±0.06 0.86±0.12 32(74.4) 29(67.4)t/P值 3.64/0.042 3.95/0.039 13.941/0.000 12.602/0.000組織學分級 Ⅰ級 10 0.23±0.08 0.70±0.12 3(30.0) 3(30.0)Ⅱ級 58 0.24±0.07 0.79±0.09 30(51.7) 27(46.6)Ⅲ級 14 0.27±0.08 0.87±0.11 12(85.7) 10(71.4)F/P值 1.01/0.217 4.35/0.027 7.726/0.005 7.215/0.009

2.4 觀察組中ephA7和AEG-1陽性率在不同臨床病理特征中的比較 觀察組中ephA7和AEG-1的陽性率與腫瘤的最大徑、細胞增殖指數和組織學分級密切相關(P＜0.05)，見表 3。2.5 觀察組中PSV、RI值與ephA7、AEG-1表達的相關性 RI值與 ephA7的陽性率(r=0.52，P=0.024 1)、RI值與 AEG-1 的陽性率(r=0.49，P=0.047 2)呈正相關。PSV值與ephA7、AEG-1陽性率均無明顯相關性(P＞0.05)。

3 討論

臨床上對乳腺癌的治療取決于乳腺腫塊的性狀。術前應用超聲檢查對判斷其性質有重要價值。而乳腺癌的早期診斷是患者生存質量和生存率的關鍵〔7〕。乳腺癌患者的多普勒超聲圖像顯示腫瘤邊緣無明顯的包膜，且不平整，呈“蟹足狀”或“毛刺狀”，腫瘤的局部可見不均質和實性低回聲，部分區(qū)有簇狀、散狀、沙粒樣鈣化點，中心區(qū)可見到液化性壞死(無回聲區(qū))〔8〕。良性(乳腺腺病)病變的血供較少，主要與其缺少血供有關，針對不典型的腫塊必須應用血管血流頻譜進行觀察。乳腺癌病變形成中可以表現出明顯的異型性，腫瘤間質的血管形成明顯增加，研究顯示這種血管不僅缺乏完整的基底膜，而且數量明顯增多，且分支紊亂，血管之間的吻合也豐富，CDFI/能量多普勒顯像(PDI)可以顯示直徑超過0.2 mm的血管，也能顯示血管的分級方式〔9，10〕。PSV和 RI是觀察血管及血流情況最理想的指標〔11，12〕。劉艷萍等〔13〕認為大部分惡性腫瘤內可探及血流信號，并在其觀察的患者中發(fā)現RI值大于0.70的腫瘤患者占91.61%，即高速高阻型頻譜的特征，且隨著腫瘤的增大，血流信號檢出率有增高趨勢〔14〕。在腫瘤形成及進展時，腫瘤細胞中相關蛋白會出現明顯變化。Eph激酶是機體中受體酪氨酸蛋白激酶家族的成員，其分為兩種:EphA和EphB，其中E-phA7 是家族中的重要成員〔15，16〕。EphA7 能控制細胞間的相互作用。EphA7可以和相應的配體整合，使蛋白出現結構的改變，對活化細胞質中的酪氨酸激酶有明顯的促進作用〔17〕。研究認為其還能使自身出現磷酸化，同時有效地活化底物，調節(jié)細胞信號的傳導〔18〕。AEG-1的編碼基因由11個內含子和12個外顯子組成，其cDNA全長為3 611 bp，編碼由582個氨基酸組成的蛋白質，分子量是64 kD，富含賴氨酸和絲氨酸殘基，可以作為轉錄后修飾的靶點超作用，是轉錄后修飾的作用靶點〔19〕。研究認為其C端可能具有與ATP/GTP結合的作用，蛋白激酶(PK)A和PKC信號通路激酶能使AEG-1基因保守序列中存在大量的潛在磷酸化修飾位點磷酸化，這對其行使功能起重要的作用〔20〕。

本研究結果提示術前超聲檢測PSV和RI值在術前診斷中有重要價值，尤其是對乳腺疾病良惡性的判斷有更重要的價值。RI值可能對進行腫瘤分級有一定的幫助。本文結果提示ephA7和AEG-1二者高表達可以促進腫瘤的生長及Ki67陽性的細胞增生，使細胞數量明顯增加，失控性增生明顯，細胞體積增大，腫瘤的侵襲能力升高，惡性潛能增加。二者參與腫瘤的進展，二者對腫瘤分級與預后的判斷有一定價值。分級高的腫瘤細胞異型性明顯，細胞核的核分裂多，細胞異質性強，此時細胞停滯于幼稚階段，腫瘤細胞趨于原始，核的染色深。本研究也間接提示ephA7和AEG-1參與腫瘤的進展過程。ephA7和AEG-1均為血管生成的促進因子，能促進內皮細胞的增生，形成芽狀的血管內皮細胞，在血液的沖擊作用下形成新生血管，具有供應血液的功能〔21〕。但是二者調節(jié)血管生成的機制可能不完全一致，也不一定在同一通路上。ephA7對血管的調控可能是間接的，與機體中其他蛋白協同作用后，進而促進內皮細胞增殖〔22，23〕。而 AEG-1對腫瘤血管生成的調節(jié)是直接的，通過分泌作用，直接促進內皮細胞的生長。本文提示RI值是直接與術后ephA7和AEG-1表達相關聯的指標。由于ephA7和AEG-1可以在一定程度上反映腫瘤的生物學行為〔24，25〕。

綜上，彩色多普勒血流參數PSV和RI值對乳腺癌的診斷有一定作用，ephA7和AEG-1在乳腺癌中表達升高對病變的形成有促進作用。