高效液相色譜法快速測定草莓中7種氨基酸酯類農(nóng)藥殘留

余朝旭，陳月丹，黃玉，陸王佳

(象山縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，浙江 象山 315700)

草莓于20世紀(jì)初引進(jìn)我國，并得到了迅速發(fā)展，我國已成為全球第一大草莓種植國。由于草莓果實(shí)柔軟多汁且無外皮保護(hù)，易受病蟲為害，生產(chǎn)中施用農(nóng)藥是主要防治手段[1]。近幾年，各地屢次出現(xiàn)草莓中檢測出高毒農(nóng)藥克百威的新聞報(bào)道，引起社會(huì)各界對草莓生產(chǎn)中農(nóng)藥使用安全的擔(dān)憂[2-4]。氨基甲酸酯類農(nóng)藥是一種高效、廣譜型殺蟲劑，具有殺蟲效果顯著、分解快、殘留期短、代謝迅速的特點(diǎn)，其殺蟲作用機(jī)制為抑制昆蟲神經(jīng)傳導(dǎo)的重要物質(zhì)乙酰膽堿酯酶的活性[5]。由于氨基甲酸酯類農(nóng)藥在草莓生產(chǎn)中未被科學(xué)地使用，增加了產(chǎn)品安全風(fēng)險(xiǎn)，使得氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析檢測倍受關(guān)注。

本文采用乙腈提取、固相萃取凈化、濃縮定容、使用高效液相色譜-柱后衍生-熒光檢測法，同時(shí)測定7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量。本方法前處理操作快速簡單，檢測靈敏度高，重復(fù)性好，有助于提高檢測工作效率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑

Waters E2695高效液相色譜儀(配Waters 2475熒光檢測器、柱后衍生系統(tǒng))，天平(0.01，奧豪斯)，IKA T18 勻漿機(jī)(IKA公司)，3K-15高速冷凍離心機(jī)(德國SIGMA公司)，氮吹儀(美國Organomation公司)，固相萃取裝置(安捷倫公司)，快速混勻器(常州國華電器有限公司)，溶劑抽濾裝置(天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

乙腈、甲醇、二氯甲烷(色譜純，美國天地有限公司)；氯化鈉，氫氧化鈉(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；四硼酸鈉(分析純，上海展云化工有限公司)；娃哈哈純凈水；氨基固相萃取小柱(500 mg/6 mL，安捷倫公司)；0.22 μm尼龍濾膜(天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；鄰苯二甲醛、巰基乙醇(色譜純，Pickering公司)。

1.1.2 柱后衍生試劑溶液配制

0.05 mol·L-1氫氧化鈉。稱2 g NaOH溶于1 L水中，經(jīng)0.45 μm濾膜抽濾脫氣。

OPA試劑。稱19.1 g四硼酸鈉溶于1 L水加入0.1 g鄰苯二甲醛(先溶解在10 mL甲醇中)，經(jīng)0.45 μm濾膜抽濾脫氣，加入2 g巰基乙醇混勻，棕色瓶避光保存。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、克百威、三羥基克百威、甲萘威等7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所生產(chǎn)，濃度均為100 μg·mL-1，用甲醇稀釋成1 μg·mL-1濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

取15.0 g混勻粉碎后的草莓樣品置于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，用勻漿機(jī)勻漿1 min，加入5 g氯化鈉，震蕩2 min，置于離心機(jī)以4 000 r·min-1離心3 min。吸取4.00 mL上清液到10 mL玻璃試管中，水浴50 ℃下氮吹至近干，用2 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)溶解殘?jiān)齼艋?/p>

用4.0 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)活化氨基固相萃取小柱后，倒入上述待凈化液并收集洗脫液，用2 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)清洗待凈化液試管后過柱，并重復(fù)1次。洗脫液于水浴50 ℃下氮吹至近干，用50%甲醇水溶液準(zhǔn)確定容至2.0 mL，在混勻器上混勻后，用0.22 μm濾膜過濾，待測。

1.2.2 儀器分析條件

色譜柱。Sunfire C18液相色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm；流動(dòng)相為乙腈、水，梯度洗脫(表1)；柱溫42 ℃；進(jìn)樣量20.0 μL；定量方法采用外標(biāo)法；熒光檢測器(λex330 nm，λem465 nm)；柱后衍生：流速0.3 mL·min-1，水解溫度80 ℃，衍生溫度為室溫。

表1 流動(dòng)相梯度與流速

2 結(jié)果與分析

2.1 7種氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜圖,分離度及拖尾因子

按照1.2.2儀器條件測定，得到0.2 mg·L-1濃度(溶劑為50%甲醇水溶液)的7種氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜圖(圖1)，7種農(nóng)藥在25 min內(nèi)均得到良好的分離。如表2所示，分離度均大于1.5，到達(dá)完全分離狀態(tài)，對稱性良好。得到的色譜圖分離效果、峰型和響應(yīng)值均比較理想。

圖1 7種氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜

農(nóng)藥保留時(shí)間/min分離度拖尾因子信噪比涕滅威亞砜8.9691.17149.26涕滅威砜10.8187.221.22132.75滅多威12.1594.761.20185.74三羥基克百威14.2188.141.24151.86涕滅威16.59710.051.16192.23克百威19.1659.871.17133.09甲萘威19.9632.841.13154.86

2.2 線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限

試驗(yàn)前取1 μg·mL-1的7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥(涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、克百威、三羥基克百威、甲萘威)混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇和水分別稀釋成0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg·L-1(溶劑為50%甲醇水溶液)5個(gè)濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2.2節(jié)所述的儀器條件進(jìn)行測定。以10倍信噪比表示定量限，以各色譜峰的面積為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)做線性回歸處理。由表3可知，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.01～0.50 mg·L-1的線性范圍內(nèi)，R2為0.999 932～0.999 998，線性關(guān)系良好；定量限達(dá)0.005～0.008 mg·kg-1，低于國家標(biāo)準(zhǔn)的限量值。

2.3 方法回收率及精密度

取經(jīng)檢測不含有待測農(nóng)藥的草莓樣品分成2組，每組3個(gè)平行樣，分別添加7種氨基甲酸酯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。第1組添加水平為0.05 mg·kg-1，第2組添加水平為0.10 mg·kg-1。以1.2.1所述的前處理方法，1.2.2節(jié)所述的儀器條件，進(jìn)行回收率和精密度的試驗(yàn)。經(jīng)檢測，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥加標(biāo)濃度為0.05 mg·kg-1時(shí)，回收率為81%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～3.8%。加標(biāo)濃度為0.10 mg·kg-1時(shí)，回收率為87%～116%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%～1.2%。2組樣品回收率均在80%～120%，第2組高濃度樣品的精密度相對較好。由表4可知，試驗(yàn)所用前處理方法和儀器分析方法可以得到滿意的回收率和精密度。

表3 不同農(nóng)藥的定量限、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

表4 草莓平行樣混標(biāo)添加水平的回收率和精密度

3 小結(jié)與討論

草莓中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、克百威、三羥基克百威、甲萘威等7種氨基甲酸酯農(nóng)藥的殘留量用乙腈提取、氨基柱凈化，使用高效液相色譜儀-柱后衍生-熒光檢測器測定，在25 min內(nèi)得到良好的分離，R2為0.999 932～0.999 998，定量限達(dá)0.005～0.008 mg·kg-1。當(dāng)添加水平為0.05 mg·kg-1時(shí)，回收率為81%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.1%～3.8%；當(dāng)添加水平為0.10 mg·kg-1時(shí)，回收率為87%～116%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.3%～1.2%。

此方法與《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》(NY/T 761—2008)第3部分比較，變化如下：1)稱樣量和試劑用量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整；2)樣品前處理中過濾靜置步驟調(diào)整為離心；3)樣品最后定容溶劑純甲醇調(diào)整為50%甲醇水溶液；4)儀器條件流動(dòng)相由甲醇水調(diào)整為乙腈水，并適度調(diào)整梯度。經(jīng)試驗(yàn)確證，此方法前處理步驟簡便，操作簡單，用時(shí)較短，目標(biāo)物峰型和峰高比較理想，達(dá)到良好的分析效果，可運(yùn)用于對草莓中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速定量檢測。