血清標本冷藏時間對生化項目穩定性的影響

李榮海 姚興偉 邱聰穎 楊琦 盧欣 張澤 郭姮 王斌

[摘要] 目的 評估血清標本冷藏保存7 d內每24小時各個生化項目的穩定性及重復性，為臨床醫師提供良好的建議與指導。 方法 收集2017年1～12月來自西苑醫院臨床血清標本30例，采用Roche Cobas 8000全自動分析儀檢測，并將每次檢測后的血清樣本以半封閉式保存于4℃冰箱中，每24小時對葡萄糖（GLU）、肌酐（Cr）、C反應蛋白（CRP）等44項生化指標進行檢測。 結果 K+、Cl-、Na+、補體C3、肌酸激酶（CK-MB）和乳酸脫氫酶（LDH）在24 h內的檢測結果與其他時間段的檢測結果比較，差異有統計學意義（P < 0.05）；K+、Cl-、Na+、補體C3濃度隨時間的變化明顯升高；而CK-MB、LDH濃度隨時間的變化明顯降低。其余天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、GLU等38項生化項目差異均無統計學意義（P ﹥ 0.05）。 結論 醫務工作者應充分理解血清標本存放期間各個生化項目的變化，尤其是K+、Cl-、Na+、補體C3、CK-MB和LDH濃度的變化。

[關鍵詞] 血清標本；生化項目；穩定性；冷藏時間

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）07（a）-0143-04

Effect of cold storage time on the stability of biochemical project

LI Ronghai1# YAO Xingwei2# QIU Congying3 YANG Qi2 LU Xin2 ZHANG Ze2 GUO Heng2 WANG Bin2

1.Department of Clinical Laboratory， Xiyuan Hospital， CACMS， Beijing 100091， China； 2.Department of Clinical Laboratory， Dongzhimen Hospital， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China； 3.Department of Clinical Laboratory， Beijing Bo′ai Hospital， China Rehabilitation Research Center， Beijing 100068， China

[Abstract] Objective To evaluate the stability and repeatability of every 24 hours biochemical project in the serum samples for 7 days， in order to provide good advice and guidance for clinicians. Methods From January to December in 2017， 30 cases of clinical serum samples from Xiyuan Hospital were collected， and Roche Cobas 8000 automatic analyzer was used for the detection. The samples were stored at 4℃ after being detected with 44 biochemical projects every day in the study， such as glucose （GLU）， creatinine （Cr） and C-reactive protein （CRP）. Results The detection results of K+， Cl-， Na+， C3， CK-MB， LDH in 24 h were significantly different from those of other time periods， and the differences were statistically significant （P < 0.05）. The concentration of K+， Cl-， Na- and complement C3 were significantly increased， while the levels of CK-MB and LDH were significantly decreased. However， the level of other 38 testing projects had not statistically significant （P > 0.05）. Conclusion It is important for medical workers to know the changes of some biochemical markers in serum samples during one week， especially the changing concentration of K+， Cl-， Na-， complement C3， CK-MB and LDH.

[Key words] Serum samples； Biochemical test； Stability； Cold storage time

根據《醫學實驗室質量和能力認可準則》[1]相關文件的規定，實驗室應根據樣本的性狀、檢驗和任何適用的要求來制訂文件化程序及規定臨床樣本保留的時限，以便于當出現與患者歷史數據有較大變化需要進行復查的結果。樣本保存時間和條件可能影響檢測項目的穩定性和重復性。杜忠明等[2]通過研究發現，即使樣品保存在冰箱內，雖利于某些成分的穩定，但由于致冷時的除濕作用，在這樣的環境中存放置樣品，蒸發仍相當嚴重。故本研究將探討血清標本放置不同的時間對生化項目穩定性的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器

北京白洋離心機廠生產的白洋離心機對標本進行離心，3500 r/min，離心10 min；采用Roche Cobas 8000全自動生化分析儀進行分析。

1.2 標本及其來源

收集2017年1～12月來自西苑醫院臨床血清標本30例，各標本無黃疸、溶血、乳糜。將1 d檢測后的標本采用半封閉式方式保存在4℃冰箱中，每24小時檢測1次，并詳細記錄檢測結果，然后分別與1 d檢測結果進行對比分析，觀察各生化項目的穩定性。冰箱的溫度由北京國尚信科技有限公司的冷鏈系統進行監測。

1.3 試劑、標準品和質控品

γ谷氨酰轉肽酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶的試劑和標準品由中生北控生物科技股份有限公司提供；載脂蛋白B的試劑和標準品由德國Disvs公司提供；其它生化項目的檢測試劑均采用德國羅氏公司原裝試劑和德國羅氏系列定標液。質控品由德國廠家羅氏公司提供兩個水平質控品。

1.4 檢測方法

K+、Na+、Cl-、Mg2+等離子采用離子選擇電極法（ISE法）；補體C3、C4、免疫球蛋白A、免疫球蛋白E等采用免疫比濁法；乳酸脫氫酶（LDH）、γ谷氨酰轉肽酶（GGT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）等酶采用連續監測法；總膽紅素（TBIL），直接膽紅素（DTBIL）采用重氮法；葡萄糖（GLU）采用氧化酶法等。

1.5 統計學方法

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，重復測量數據采用重復測量方差分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

經過連續7 d對血清標本44項生化項目的檢測，其中K+、Cl-、Na+、補體C3、CK-MB、LDH差異有統計學意義（P < 0.05），其余38項差異無統計學意義（P > 0.05）。

K+、Cl-、Na+、補體C3濃度隨時間的延長而逐漸升高。與1 d相比，K+在6、7 d升高（P < 0.05或P < 0.01）；Na+除了2 d檢測結果與1d比較差異無統計學意義（P > 0.05），3～7 d檢測結果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）；Cl-在2～7 d檢測結果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）；補體C3在6、7 d檢測結果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）。

CK-MB、LDH濃度隨時間的延長而逐漸降低。CK-MB在4～7 d檢測結果結果均低于1 d（P < 0.05或P < 0.01），LDH在7 d檢測結果低于1 d（P < 0.05）。

3 討論

本研究結果顯示，電解質K+、Na+、Cl-以及補體C3隨著樣本存放時間延長而逐漸升高。血清中電解質K+、Na+、Cl-水平是監測機體中水、電解質及酸堿平衡的重要生化指標，在臨床檢驗中有重要的指導作用，臨床急救醫生需要通過檢驗科電解質的快速檢驗報告對患者的病情進行診斷[3-6]。對于樣本中電解質K+、Na+、Cl-明顯升高的趨勢，秦海瑜等[7]認為有兩個重要原因：第一，分離膠并不能完全使血清和血細胞隔離開，導致血細胞內高濃度離子釋放到血清中；第二，某些外部因素所致，在實際臨床工作中要盡可能降低外部因素對檢測結果的影響程度，尤其注意在室溫環境下放置一段時間的生化標本。特別是敞口后血清中電解質K+、Na+、Cl-水平高于其實際水平，可能是血清水分的蒸發導致被檢測物質在血清中的水平明顯增高的原因[8]。由于本實驗室將檢測后血清樣本采用不加原儲血管的橡膠蓋進行半封閉式的保存在4℃冰箱，造成血清水分部分蒸發，可能是導致血清中電解質K+、Na+、Cl-濃度隨時間的延長而逐漸升高的原因之一。

補體C3是人體補體系統中含量最高的組分，也是補體激活經典途徑以及旁路途徑的關鍵成分。本實驗通過監測顯示補體C3的水平隨保存時間延長而上升，2 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.06±0.24）g/L，上升了2.11%；3 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.09±0.24）g/L，上升了4.74%，仍屬于臨床的可接受范圍，但4 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.14±0.26）g/L，上升超過10%。升高的原因可能是樣本存放時間過久導致血清中補體C5轉化酶的自行裂解，從而引起C3濃度明顯升高[9-11]。鑒于補體的不穩定性，建議血清補體C3測定最好采用新鮮標本，若無法及時檢測或考慮到成本因素，分離的血清可置于-20℃保存3 d。

實驗中CK-MB、LDH濃度隨時間的變化而逐漸降低。CK-MB主要存在于心肌細胞中，是診斷急性心肌梗死（AMI）的重要指標之一，AMI時血清CK-MB可顯著升高，曾被認為是診斷AMI的金標準[12-15]。CK-MB活性的酶易于老化，主要表現為酶構象的改變，引起CK-MB檢測降低或正常的原因可能是由于過了檢測的時間，以致于血清酶老化使酶的催化活性降低或喪失。

LDH是一種糖酵解酶，也是一種冷變性酶，存在于所有的組織細胞中，但分布于腎臟的含量較高，LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5是LDH五種形式的同工酶，其最適合的溫度應該是室溫。本次實驗的標本采用分離膠采血管收集并保存的溫度是4℃，檢測的結果與1 d相比，7 d檢測結果差異有統計學意義（P < 0.05）。因此有學者建議對不同溫度及不同保存方式的血清進行相關項目的檢測，以便找到便捷合理的血清保存方式[16]。華永川等[17]探討了分離膠管、血清血球共用管、血清管不同時間段血清酶活性和穩定性的變化，結果顯示分離膠不影響酶的穩定性和活性，且LDH（血清血球管）于第5天開始升高，與本研究中的LDH變化趨勢相符。

楊永紅等[18]通過OLYMPUS AU54OO全自動生化儀對36個生化項目進行檢測，除GLU、CO2結合力、K+外其他測定的33項生化項目隨著時間的延長其濃度無明顯變化。然而上述的研究中只有K+的檢測趨勢與本研究相同，部分檢測項目（GLU、Na+、Cl-、LDH、CK-MB）的變化趨勢與本研究有所差異，可能的原因包括冷藏時采用的保存的措施有所不同，楊永紅等[18]采用的是用儲血盒直接加蓋冷藏其制備的血標本，而本研究采用的是半封閉式方式保存，檢測儀器設備的不同、實驗設計等其他原因等，因此值得后續研究進一步比較分析。

張麗霞[19]認為影響分析物穩定性和檢測結果準確性的重要參數包括實驗室的室溫以及血清或血漿的貯存溫度、時間。國內很多學者建議對于C3、C4補體應采用冰凍保存方式[20]，據實驗研究顯示LDH、CK、AST、ALT只要檢測后立即對標本進行密封及避光也可在室溫下進行保存。總之，本研究實驗表明大多數血清的生化項目可以置于4℃冰箱中且其結果具有一定的穩定性，而應該特別關注K+、Cl-、Na+、補體C3以及CK-MB、LDH濃度的變化，并詳盡地分析其可能的影響因素。因此，實驗室應根據自身的實際情況（儀器設備型號、試劑類別、血清標本儲存方式等），總結歸納出血清樣本存留時間對檢測結果的具體影響，為本地區的臨床醫生提供更加真實可靠的數據來源，以便于進一步提高檢驗質量，更好地服務于臨床。

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（收稿日期：2018-04-04 本文編輯：李岳澤）