細胞因子誘導殺傷細胞治療對肺癌患者IL—2、IL—6、IL—8、IL—10、TNF—α的影響及研究

師鵬輝

摘要 目的：探討肺癌CIK治療后，血漿IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平變化及對Thl/Th2比值的影響。方法：患者CIK治療前及治療后1～2 d分別抽取外周血分離出血清，檢測IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α.結果：CIK治療后IL-2、TNF-α數值下降，IL-8升高，Thl/Th2比值失衡糾正，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：化療期間合理應用CIK治療有利于改善預后。

關鍵詞 肺癌；Thl/Th2；IL-2；IL-6；11-8；IL-10；TNF-α；CIK

肺癌是世界上公認的癌癥相關性死亡的首要原因[1]，晚期肺癌患者失去手術機會，化療是治療晚期肺癌的重要手段。現階段化療后腫瘤復發率較高。研究表明，肺癌的復發轉移與機體的Thl/Th2比值失衡密切相關。本研究探討肺癌CIK治療后免疫功能的變化，為臨床制定個體化治療方案提供參考。

資料與方法

2015年6月-2016年5月收治CIK肺癌患者16例，男8例，女8例；年齡45～ 75歲，平均60歲，所發病例均病理證實為肺癌。其中肺鱗癌8例，腺癌8例。符合同際肺癌研究協會（IASLC）2009年第7版分期標準Ⅲ～Ⅳ期。治療組給予CIK治療1個療程，細胞總數1.6×l09/L，對照組化療后給予觀察。

實驗試劑：IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α試劑是購白易科拜得公司產品，用酶聯免疫吸附劑測定（ELISA）。

實驗過程：患者CIK治療前及治療后分別抽取外周血分離出血清，標準品按照說明書稀釋5個梯度，各個梯度每孔加樣量50μL；分別設空白孔及待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔可先加樣品稀釋40μL，然后再將樣品10μL加于酶標版孔底部，盡量不觸及孔壁，可輕輕晃動混勻；用封板膜封板后置37℃溫育30 min；將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用；然后小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，之后靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干；每孔加入酶標試劑50μL，再加入顯色劑B 50 μL，之后輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 min；每孔加終止液50μL，以終止反應；以空白孔調零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應在加終止液后15min內進行；以標準物濃度為坐標，OD值為橫坐標，計算出標準曲線的多項式二次回歸方程，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

監測項目：患者CIK治療前及治療后1—2d分別抽血檢測IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-dα，觀察其變化。

統計學方法：所有統計分析將采用sPSS 19.O統計分析軟件進行計算。所有的統計檢驗均采用雙側檢驗，P≤0.05為差異有統計意義。

結果

CIK治療后IL-2、IL-6、IL-8、1L-10、TNF-α的變化：應用酶聯免疫吸附劑測定（ELISA）方法測定各項細胞因子，CIK治療后1～2 dIL-2、TN F-α數值下降，IL-8數值升高，差異有統計學意義。Thl/Th2比值失衡得到糾正，見表1。

討論

肺癌患者免疫功能低下，術后、放化療后其免疫功能進一步破壞，免疫功能抑制是影響臨床療效及生活質量的重要因素之一，因此提高患者機體免疫力是臨床治療中亟待解決的問題。機體抗腫瘤免疫機制分為細胞免疫和體液免疫兩方面。根據分泌細胞因子的不同，T輔助細胞分為Thl和Th2兩個不同功能的亞群，兩類細胞在發揮功能過程中，分泌不同細胞因子，發揮著協調作用[2]。其中Thl細胞分泌IL-2、TNF-α等細胞因子，Th2細胞分泌IL-6、IL-8、IL-10等細胞因子。Thl細胞主要介導機體的細胞免疫反應，Th2細胞主要介導體液免疫反應。

本研究顯示，經CIK治療后1～2dIL-2、TNF-α濃度較前降低，IL-8、IL-10水平在CIK治療后較前升高。從而使CIK治療后患者外周血Thl/Th2細胞因子平衡紊亂明顯改善。對照組Thl/Th2細胞因子平衡紊亂糾正不明顯。

本研究結果與其他CIK治療研究不同。葉聯華等研究顯示[3]，經CIK治療后2周，外周血IL-2明顯升高，IL-10于CIK治療后2周下降。試驗結果不同可能與CIK治療后采血時間有關，本試驗是CIK治療后1～2d采血，與葉聯華等實驗ClK治療后2周、4周、8周時間點采血不同。至于CIK治療后1～2d，與治療后2周細胞因子變化如此明顯，其中原因還不是很清楚，需要進一步研究。

總之，晚期肺癌患者存在Thl/Th2細胞因子失衡，相對于單純化療患者，加用CIK治療后可早期改善Thl/Th2平衡紊亂。化療期間合理應用CIK治療對改善預后會有一定幫助。

參考文獻

[1]Waiker S.Updaies in non-small cell lungcancer[J]. Clinj Oncol Nurs， 2008， 12（4）：587-596.

[2] Hsieh CH，Wang CH，Kuo HP.Astham controlin asthmaLic patients treated for lung cancer[J].Chang Cung Med J，2011，34（1）：35-43.

[3]葉聯華，黃云超，趙光強，等.細胞因子誘導的殺傷細胞免疫治療對非小細胞肺癌患者術后免疫功能的影響[J].中國胸心血管外科雜志，2008，15（2）：96-99.