聚乙二醇干擾素治療非活動性HBsAg攜帶者血清MIP-1β水平變化趨勢

曹振環，柳雅立，馬麗娜，鄭燕紅，王 群，王俊麗，吳芳芳，陳新月

非活動性HBsAg攜帶者（inactive hepatitis B surface antigen carrier, IHC）是指HBsAg陽性＞6個月，HBeAg陰性，抗-HBe陽性，HBV DNA低水平或檢測不到，ALT正常，肝組織學檢查病變輕微的患者[1]。通常IHC被認為處于機體的“免疫控制期”，但其仍存在潛在的危險，可逆轉為HBeAg陽性及陰性慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB），導致ALT升高，肝臟炎癥再度活動。有報道稱IHC肝炎復發率在5、10、15、20和25年分別為 10.2%、17.4%、19.3%、20.2%和20.2%[2]。另外，IHC的肝癌發生率也遠高于正常人[3]；IHC使用化療藥物、糖皮質激素等免疫抑制劑時，極易發生HBV再激活，甚至肝衰竭[4-6]。我們之前對IHC進行了聚乙二醇干擾素（pegylated-interferon,Peg-IFN）治療，HBsAg清除率達到44.7%[7]，為這類人群的治療提供了可靠的臨床依據。但目前尚缺乏Peg-IFN治療IHC獲得HBsAg清除的相關免疫學研究。巨噬細胞炎性蛋白1β（macrophage inflammatory protein-1β, MIP-1β）是一種趨化因子，可以趨化T淋巴細胞、NK細胞、單核細胞和未成熟樹突狀細胞（dendritic cell, DC）在炎癥部位和腫瘤局部發揮作用。有報道稱在HBV感染過程中，MIP-1β不利于機體快速清除病毒，導致慢性持續性肝炎，另外可誘發免疫損傷，促進肝臟纖維化[8-9]。但MIP-1β與HBsAg清除，尤其是與經過Peg-IFN治療的IHC獲得HBsAg清除的關系還未見報道。

1 對象與方法

1.1 對象 2013年1月—2016年1月就診于首都醫科大學附屬北京佑安醫院門診的IHC 20例。IHC診斷符合2015年《慢性乙型肝炎防治指南》，入組標準：①HBsAg陽性＞6個月，HBeAg陰性、抗-HBe陽 性、 抗 -HBc陽 性，HBV DNA＜ 20 IU/ml，ALT正常；②HBsAg定量＜1000 IU/ml；③TBIL＜25 μmol/L，ALB＞40 g/L，INR 0.8～1.2；④WBC（4～ 10）×109/L，PLT（100～ 300）×109/L；⑤FibroScan：E值＜6.4 kPa；⑥未接受過抗病毒治療；⑦排除重疊HIV、HCV感染，自身免疫性疾病，肝硬化，肝癌，肝功能失代償，嚴重代謝性疾病及合并其他系統腫瘤等。另納入健康人11例（HBsAg陰性，抗-HBs＞200 IU/ml）。

1.2 治療方法與療效 20例IHC接受Peg-IFNα-2a 135 μg，1次/周，皮下注射。13例治療24周后獲得HBsAg清除，設為應答組（R組），7例治療24周后未獲得HBsAg清除，設為無應答組（NR組）。

1.3 標本 采集20例IHC基線、12周、24周的血清及11例健康者的血清進行MIP-1β檢測。

1.4 實驗室方法 細胞因子檢測：采用Luminex（液相芯片技術）檢測血清MIP-1β水平，儀器為美國Bio-Rad公司Bio-Plex 200 system。HBsAg、抗-HBs定量：應用HBsAg quantitative Elecsys（Roche Diagnostics GmbH, German）檢測，HBsAg定量檢測下限為0.05 IU/ml，抗-HBs＞10 IU/ml為陽性。HBV DNA定量：采用RT-PCR，儀器為Roche Cobas/Taqman Real-Time PCR2.0 System，德國羅氏公司試劑盒，檢測下限為20 IU/ml。肝功能檢測：采用脫氫酶法、溴甲酚綠法、循環酶法氧化酶法、肌氨酸氧化酶法等，儀器為Olympus AU5400全自動生物化學分析儀，試劑為上海科華東菱公司相關試劑盒。

1.5 統計學處理 應用SPSS 13.0軟件進行統計分析。正態分布的計量資料以±s表示；3組間比較用單因素方差分析（組間方差齊），兩兩比較用q檢驗。2組間比較用t檢驗。計量資料不同時間點比較用單因素重復測量的方差分析。多組間計數資料比較采用R×Cχ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般資料及基線特征 本研究共入組20例IHC，R組13例，NR組7例，同時納入11例健康人為HC組。3組在性別、年齡、ALT水平上無明顯差異。R組基線HBsAg定量低于NR組，但差異無統計學意義（t=3.684，P=0.067）。見表1。

表1 一般資料及基線特征Table 1 General data and baseline characteristics of the patients

2.2 3組間基線血清MIP-1β水平比較 R組基線MIP-1β水平為（102.25±72.09）pg/ml，NR 組為（80.49±57.82）pg/ml，HC 組 為（87.46±52.74）pg/ml，雖然R組MIP-1β水平較高，但可能由于樣本量較小，3組之間差異無統計學意義（F=0.320，P=0.729）。見圖1。

圖1 3組血清MIP-1β水平比較Figure 1 Comparison of serum MIP-1β levels among 3 groups

2.3 R組抗病毒治療后MIP-1β水平變化 R組抗病毒治療后MIP-1β水平明顯下降，基線為（102.25±72.09）pg/ml，12 周 降 至（59.19±31.05）pg/ml，24周降至（48.95±26.91）pg/ml（F=4.532，P=0.018）。基線與12周、24周相比，差異均有統計學意義（P=0.028，P=0.007）。見圖2。

圖2 R組抗病毒治療后MIP-1β水平變化情況Figure 2 Changes of MIP-1β level after antiviral treatment in R group

2.4 NR組抗病毒治療后MIP-1β水平變化 NR組中大部分患者MIP-1β呈下降趨勢或水平波動。各時間點平均值無明顯變化，基線為（80.49±57.82）pg/ml，12周為（76.16±64.32）pg/ml，24周為（69.48±40.71）pg/ml（F=0.071，P=0.932）。見圖3。

圖3 NR組抗病毒治療后MIP-1β水平變化情況Figure 3 Changes of MIP-1β level after antiviral treatment in NR group

3 討 論

IHC是HBV感染者中最大的一個群體[10-11]。多項在高加索人群中進行10年以上的隨訪數據顯示，與HBeAg陽性或HBeAg陰性的CHB患者相比，IHC預后好，發生HCC幾率較低[12]。但亞洲人群與高加索人群不同，亞洲的IHC可能存在HCC高風險。臺灣的一項研究對1965例IHC進行了平均11.5年的隨訪，結果顯示16%的患者出現病毒再激活，25年肝硬化累積發生率達到15%，病毒再激活者20年肝硬化累積發生率更是高達46%[13]。另一項臺灣研究對1932例IHC進行了平均13.1年的隨訪，結果發現這些IHC的肝癌和肝癌相關死亡風險是非HBV攜帶者的4.6倍（HR=4.6，95%CI：2.5～8.3）和2.1倍（HR=2.1，95%CI：1.1～4.1）[14]。由此可見，我們不應該把IHC作為“健康攜帶者”對待，探索其治愈方案對于改善其預后仍具有非常重要的意義。本課題組在前期應用Peg-IFN治療IHC，獲得了較高的HBsAg清除率，為進一步的基礎研究提供了寶貴的臨床資源。

MIP-1β是一種趨化因子，表達于單核細胞，巨噬細胞，NK細胞，T、B淋巴細胞及內皮細胞。MIP-1β對T淋巴細胞、NK細胞、單核細胞和未成熟DC均具有很強的趨化能力。但MIP-1β水平與CHB患者抗病毒療效的相關性報道甚少，尤其是與HBsAg清除的相關性尚未見報道。

本研究選取了前期部分獲得HBsAg清除的IHC病例，初步檢測了基線及治療過程中血清27種細胞因子水平，包括IL-1、IL-2、IL-17、IL-22、MIP-1β等。結果發現IHC在Peg-IFN治療后，其MIP-1β水平下降明顯。為此，本文進一步分析了血清MIP-1β水平與HBsAg清除的相關性，結果顯示HBsAg清除者MIP-1β水平下降明顯，而未清除者則無此現象。既往研究表明病毒性肝炎患者血清MIP-1β表達升高，其可介導CCR5HIGH的T細胞進入門脈區，發揮免疫效應，導致機體不能迅速清除病毒，而發展為慢性持續性肝炎[14]。本研究的結果提示Peg-IFN治療IHC，可一定程度降低MIP-1β水平，使之發揮疾病慢性化的作用減弱，這可能有利于疾病的治愈——獲得HBsAg清除。