二妙散免煎顆粒與傳統飲片中有效成分含量對比分析

劉德志，張世亮，章飛霞，林 君

(蒼南縣中醫院，浙江 蒼南 325800)

“二妙散”出自《丹溪心法》卷4，是由黃柏和蒼術組成的藥方，其中，黃柏擅清下焦濕熱，蒼術擅燥濕健脾助運，兩者相輔相成。中藥免煎顆粒作為一種新劑型，其有效成分含量測定是臨床應用的關鍵。本研究旨在通過分析二妙散免煎顆粒與傳統飲片中有效成分的含量差異，為二妙散的臨床應用提供參考。

一、材料

(一)儀器。

LC-2010A型高效液相色譜儀，HS6150型超聲波清洗器，CP225D分析天平。

(二)藥品與試劑。

黃柏飲片、麩炒蒼術飲片、二妙散免煎顆粒劑、鹽酸小檗堿對照品、蒼術素對照品、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

二、方法與結果

(一)色譜條件。

1.鹽酸小檗堿。以十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)為填充劑，乙腈-0.1%磷酸溶液(50：50)為流動相，檢測波長265 nm，柱溫25℃，流速1 ml/L，進樣量10 μL，理論塔板數≥4000。

2.蒼術素。以ODS為填充劑，甲醇-水(79：21)為流動相，檢測波長340 nm，柱溫25 ℃，流速1 ml/L，進樣量10 μL，理論塔板數≥5000。

(二)溶液的制備。

1.對照品溶液的制備。取鹽酸小檗堿和蒼術素適量，精密稱定，加甲醇溶液溶解，制成1.17 mg/ml的鹽酸小檗堿混合溶液和21.65 μg/ml的蒼術素混合溶液，二者在2.1色譜條件下均可完全出峰，且對稱性較好(見圖1、圖2)。

2.供試品溶液制備。①二妙散湯劑：取黃柏飲片、麩炒蒼術飲片各50 g，浸泡30 min，頭煎加水500 ml煎汁約200 ml，二煎加水300 ml煎汁約200 ml，洗滌藥渣，兩煎混合后，定容至500 ml，既得。②二妙散免煎顆粒劑：取等效劑量免煎顆粒(黃柏的飲片與免煎顆粒比為12∶1，麩炒蒼術的飲片與免煎顆粒比為4.5∶1)，兩者混合，加入40-50℃溫水溶解，并溫水定容至500 ml，既得。

圖1 鹽酸小檗堿對照品色譜圖

(三)方法學考察。

1.線性關系考察。精密吸取適量對照品溶液進樣5次，鹽酸小檗堿的進樣量依次為1μL、2μL、4μL、6μL、10μL，蒼術素的進樣量依次為1μL、2μL、5μL、10μL、15μL，以各對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，鹽酸小檗堿的回歸方程為Y=7132.5X+676.89(R=0.999)，蒼術素的回歸方程為Y=215751X-9672.7(R=0.999)。結果顯示，鹽酸小檗堿為1.021 mg-10.21 mg時與峰面積呈良好的線性關系，蒼術素為0.53μg-10.68μg時與峰面積呈良好的線性關系。

2.精密度試驗。精密吸取對照品溶液10μL，連續進樣6次，測定峰面積。結果顯示，鹽酸小檗堿峰面積的RSD為1.14%，蒼術素峰面積的RSD為0.973%，二者均小于3%，表明該方法的精密度良好。

3.穩定性試驗。精密吸取供試品溶液適量，分別于0h、2h、6h、8h、12h時進行測定，記錄峰面積。結果顯示，二妙散湯劑中鹽酸小檗堿和蒼術素峰面積的RSD分別為0.532%和1.157%，二妙散免蒸顆粒劑中鹽酸小檗堿和蒼術素峰面積的RSD為0.639%和1.113%，表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

4.重復性試驗。精密稱取二妙散傳統飲片5份，每份2 g，測定并得到峰面積。結果顯示，鹽酸小檗堿和蒼術素峰面積的RSD分別為0.450%和1.322%，二者均小于3%，表明該方法的重復性較好。

5．加樣回收試驗。精密稱取黃柏和蒼術飲片各50 g及同等劑量二妙散免煎顆粒，蒸煮后各取1 ml，加入等量的鹽酸小檗堿對照品和蒼術素對照品，按要求制成供試品溶液，測定6次，計算加樣回收率。結果顯示，二妙散湯劑中鹽酸小檗堿和蒼術素的平均回收率分別為98.96%和99.03%，RSD分別為0.210%和1.523%，二妙散免煎顆粒劑中鹽酸小檗堿和蒼術素的平均回收率分別為98.73%和99.11%，RSD分別為0.131%和1.148%。

(四)樣品含量測定。

取黃柏飲片、蒼術飲片及二妙散免煎顆粒各4批，制成供試品溶液，測定二妙散免煎顆粒及傳統飲片中的鹽酸小檗堿和蒼術素含量(見附表)。

三、討 論

(一)色譜條件的選擇。

2015版《中國藥典》中對鹽酸小檗堿的紫外掃描采用265 nm或345 nm波長測定，蒼術中的蒼術素為340 nm。本研究前期對鹽酸小檗堿進行紫外掃描發現，當波長為265 nm時，鹽酸小檗堿吸收良好且峰形對稱性較好，故選擇265 nm作為鹽酸小檗堿的測定波長，340 nm作為蒼術素的測定波長。同時，參考相關文獻[1]，初步選擇鹽酸小檗堿和蒼術素的流動相，通過對比出峰情況發現，以乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)為鹽酸小檗堿流動相，以甲醇-水(79∶21)為蒼術素流動相，可較好分離樣品中的主峰與雜峰，靈敏度高且保留時間短，因此，本法可作為質量控制標準。

附表 含量測定結果(mg/g)

(二)研究意義。

本研究發現，二妙散免煎顆粒中的鹽酸小檗堿和蒼術素含量雖略高于傳統飲片，但無明顯差異。因此，研究者推測，二妙散免煎顆粒與傳統飲片具有同等療效[2]。但由于中藥成分相對復雜，傳統飲片共煎過程中有效成分會發生一系列絡合作用，可減毒增效，而免煎顆粒只是單味中藥的提取濃縮，因此，僅靠有效含量的檢測并不能完全肯定其藥效優劣。