杜仲、山楂和陳皮混合湯劑對營養型肥胖大鼠減肥降脂的作用

林園園 熊義濤

[摘要]目的 探究陳皮、杜仲以及山楂3種中草藥混合湯劑對高脂高糖誘導的肥胖大鼠的減肥降脂作用。方法 選取高脂飼料飼養的50只Wistar雄性大鼠作為研究對象，制備肥胖大鼠模型。將造模后的大鼠隨機分為模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組各10只。另外選取給予基礎飼料飼養的10只大鼠作為對照組。低劑量組、中劑量組、高劑量組每天分別灌胃1 ml/100 g、2 ml/100 g、4 ml/100 g的中草藥混合湯劑，陽性對照組大鼠灌胃奧利司他懸浮液60 mg/（kg·d）。均連續灌胃8周。模型組和對照組以相同方法灌胃生理鹽水。用酶聯免疫法檢測各組血清中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固（LDL-C）的含量及肝臟中脂肪酸合成酶（FAS）、提高?；o酶A氧化酶（ACO）的含量，比較各組大鼠的各類腸道菌群數量。結果 模型組大鼠的體重、Lee′s指數、TG、TC、LDL-C、FAS含量均顯著高于對照組，HDL-C、ACO低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。高劑量組大鼠的體重和Lee′s指數、TG、TC、LDL-C、FAS含量顯著低于模型組，HDL-C、ACO水平顯著高于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。高劑量組大鼠腸道內的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數量多于模型組，大腸埃希菌數量少于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。高劑量組大鼠的Lee′s指數、TG、TC、LDL-C、FAS、ACO含量與陽性對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。結論 陳皮、杜仲和山楂3種草藥混合湯劑可以抑制FAS活性、促進ACO活性、提高益生菌數量，對高脂飲食誘導的肥胖大鼠具有顯著的減肥降脂作用。

[關鍵詞]肥胖；杜仲；山楂；三酰甘油；?；o酶A氧化酶

[中圖分類號] R258.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）6（b）-0020-05

Effects of Hawthorn，Eucommia and Tangerine Peel mixture decoction on reducing fat in obese rats induced by high fat diet

LIN Yuan-yuan XIONG Yi-tao

Department of Pharmaceutical Affairs，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430074，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of Tangerine Peel，Eucommia and Hawthorn mixture decoction on reducing fat in obese rats induced by high fat diet.Methods A total of 50 Wistar male rats who fed with high fat diet to establish the rat model of obesity were selected as subjects，which were divided into model group，positive group，low-dose group，middle-dose group and high-dose group randomly，10 rats in each groups.In addition，10 normal feeding rats were selected as the control group.The low-dose group，the middle-dose group and the high-dose group were treated with 1 ml/100 g，2 ml/100 g，4 ml/100 g herbal mixture decoction respectively each day.The rats in the positive group were intragastric Orlistat Suspension 60 mg/kg by gavage.All were treated continuously for 8 weeks.The model group and the control group were given normal saline by gavage with the same method.The content of serum triglyceride （TG），total cholesterol （TC），high density lipoprotein cholesterol （HDL-C），low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） in serum and the contend of fatty acid synthase （FAS），acyl coenzyme A oxidase （ACO） in liver were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.The number of intestinal flora of rats in each group were compared.Results The weight，Lee′s index，TG，TC，LDL-C and FAS contents of the rats in the model group were significantly higher than those in the control group，and HDL-C and ACO of the rats in the model group were lower than those in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.The weight and Lee′s index，TG，TC，LDL-C and FAS contents of the rats in the high-dose group were significantly lower than those in the model group，and the levels of HDL-C and ACO of the rats in the high-dose group were significantly higher than those in the model group，the differences were statistically significant （P<0.05）.The number of bifidobacterium，lactobacillus and enterococcus in the intestinal tract of rats in high-dose group were higher than those in the model group，and the number of escherichia coli was less than that of the model group，the differences were statistically significant （P<0.05）.There were no statistically significant differences in Lee′s index，TG，TC，LDL-C，FAS and ACO of rats in high-dose group compared with the positive group （P>0.05）.Conclusion The three herbs mixed decoction of Tangerine Peel，Eucommia and Hawthorn can inhibit the activity of FAS，promote the activity of ACO and increase the number of probiotics.It had a significant effect on reducing weight and blood lipids in obese rats induced by high fat diet.

[Key words]Obesity；Eucommia；Hawthorn；Triglyceride；Acyl coenzyme A oxidase

肥胖癥是一種常見的代謝癥群，它與糖尿病、高血壓、血脂異常、癌癥等慢性病密切相關[1]。20世紀80年代以來，隨著人們生活水平的逐漸提高以及生活方式的改變，肥胖癥的發病率也逐漸上升[2]，肥胖癥可能會對健康和壽命產生明顯影響[3]。因此如何有效地預防及治療肥胖癥已成為現今較為熱門的研究問題。奧利司他（Orlistat）為目前少數被批準用于治療肥胖癥的藥物，據研究，其對肥胖癥有顯著療效[4-5]，但是有較多報道提及奧利司他的副作用，提示奧利司他可能影響胃腸道健康和肝臟功能，而且當停藥時，則產生體重反彈。目前對奧利司他的安全性存在爭議[5-9]。因此，對于治療肥胖癥并且副作用小的藥物的探索十分迫切[10]。山楂、杜仲和陳皮是日常生活中常見的中草藥，杜仲和山楂有影響膽固醇的代謝，抑制脂肪肝形成的功效[11-12]，陳皮對動物腸道菌群的分布有一定的調節作用，能干擾脂肪和膽固醇的吸收，抑制胰脂酶活動，促使甘油三酯從糞便中排出[13]。但是其對肥胖癥的預防及治療報道較少，本研究通過建立高脂飲食誘導的肥胖大鼠模型，以3種中藥物混合治療肥胖大鼠，取得了較顯著的療效，現報道如下。

1材料與方法

1.1試劑與動物

三酰甘油（TG）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：A110-1）；總膽固醇（TC）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：A111-1）；低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（江萊生物科技有限公司，貨號：JL12049）；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：A112-1）；脂肪酸合成酶（FAS）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：H231）；高?；o酶A氧化酶（ACO）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：M020）；MRS瓊脂培養基（青島海博生物科技有限公司）；BBL瓊脂培養基（青島海博生物科技有限公司）；伊紅美藍瓊脂培養基（青島海博生物科技有限公司）；腸球菌培養基（青島海博生物科技有限公司）；奧利司他（國藥準字H20030586，上海羅氏有限公司）。

Wistar雄性大鼠，SPF級，體重（151.12±25.64）g，購于常州卡文斯實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（蘇）2011-0003。

1.2分組與給藥

60只Wistar雄性大鼠經過5 d的適應性飼養后，隨機抽取50只大鼠進行高脂肥胖造模，給予高脂飼料（主要成分包含：自制豬油11.0%，蛋黃8.0%，膽固醇1.5%及基礎飼料80.5%），連續4周。將造模成功的大鼠隨機分為5組，分別為：高脂組、低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組，每組各10只。

另外選取給予基礎飼料飼養的10只大鼠作為對照組。中藥低、中、高劑量組在給予高脂飼料的同時，按照大鼠體重比，每天分別灌胃1.0 ml/100 g、2.0 ml/100 g、4.0 ml/100 g的中草藥混合湯劑，陽性對照組大鼠灌胃奧利司他懸浮液60 mg/（kg·d）。混合湯劑的主要成分為：杜仲20 g、山楂20 g、陳皮15 g、苦蕎5 g、澤瀉5 g，加入清水煎煮并濃縮至1000 ml。

在后續的治療過程中，模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組均仍給予高脂飼料，空白組給予基礎飼料，模型組和對照組以相同方法灌胃2.0 ml生理鹽水。所有大鼠連續治療8周。

1.3觀察指標及檢測方法

1.3.1 Lee′s指數的測定

分別于治療前后測量大鼠的體重以及鼻尖至肛門的長度，計算Lee′s指數。Lee′s指數反映大鼠的肥胖程度，Lee′s指數=/體長。

1.3.2血液指標及肝臟指標的測定

給藥結束后，所有大鼠禁食不禁水過夜，10%水合氯醛腹腔注射（100 μl/10 g）麻醉，采集大鼠血液，室溫放置30 min后，3000 r/min離心10 min，收集血清于-80℃保存；取肝臟組織樣本保存在生理鹽水中，于-80℃保存；用Elisa試劑盒檢測血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量及肝臟中FAS、ACO的含量。

1.3.3腸道菌群的培養和計數

取1 g新鮮糞便于無菌離心管中，按照1：9（質量：體積）加入無菌PBS緩沖液稀釋，渦旋混勻儀混勻，獲得10-1稀釋液。再將10-1稀釋液進行梯度稀釋，直至獲得10-4、10-5及10-6稀釋液。分別取100 μl的10-4、10-5及10-6三種梯度稀釋液涂布于伊紅美藍瓊脂培養基（大腸埃希菌）、MRS 瓊脂培養基（乳酸菌）、腸球菌瓊脂培養基（腸球菌）、BBL瓊脂培養基（雙歧桿菌）上，每個稀釋度做3個平行實驗，整個過程30 min中內完成。37℃孵育48 h，之后進行菌落計數，結果表示為CFU/ml（菌落計數前，首先挑取特征菌落，進行生態生化試驗，鑒定該菌屬）。

1.4統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1各組大鼠治療前后體重及Lee′s指數的比較

治療前后，模型組大鼠的體重和Lee′s指數均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。治療后，高劑量組大鼠的體重和Lee′s指數顯著低于模型組，中劑量組大鼠的體重低于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05），低劑量組大鼠的體重、Lee′s指數及中劑量組的Lee′s指數與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。低劑量組大鼠的體重高于陽性對照組（P<0.05），但中、高劑量組大鼠的體重和Lee′s指數與陽性對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）（表1）。

2.2各組大鼠血清血脂各指標水平的比較

治療結束后，模型組大鼠的TG、TC、LDL-C均顯著高于對照組，HDL-C低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。治療后，高劑量組大鼠的TG、TC、LDL-C水平顯著低于模型組，HDL-C水平顯著高于模型組，中劑量組的TG顯著低于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05），低劑量組大鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及中劑量組大鼠的TC、LDL-C、HDL-C與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。低劑量組大鼠的TG高于陽性對照組，HDL-C水平顯著低于陽性對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），但中、高劑量組大鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C與陽性對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）（表2）。

2.3各組大鼠肝臟FAS及ACO含量的比較

模型組大鼠的FAS含量顯著高于對照組，ACO含量顯著低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。高劑量組大鼠的FAS含量顯著低于模型組，ACO含量均顯著高于模型組，差異有統計學意義（P<0.05）。中劑量組大鼠的ACO含量顯著高于模型組，差異有統計學意義（P<0.05）。低劑量組大鼠的ACO及低、中劑量組大鼠的FAS含量與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）（表3）。

2.4各組大鼠各類腸道菌群數量的比較

模型組大鼠腸道內的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數量少于對照組，大腸埃希菌數量多于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。高劑量組大鼠腸道內的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數量多于模型組，大腸埃希菌數量少于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。中劑量組大鼠腸道內的雙歧桿菌、腸球菌數量多于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。中劑量組大鼠腸道內的乳酸菌、大腸埃希菌數量及低劑量組大鼠腸道內的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌、大腸埃希菌數量與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）（表4）。

3討論

目前最常用來研究的肥胖模型是營養性肥胖大鼠，因為與人類飲食引起的肥胖癥有很多相似的特征，所以目前被廣泛應用于肥胖癥治療的試驗研究中[14]，一般將模型組與空白組體重比較，差異有統計學意義視為造模成功[15]。本研究采用雄性Wistar大鼠，飼以高脂營養性飼料8周后，模型組大鼠的體重顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），成功得到營養性肥胖大鼠模型。實驗開始前和結束時分別測定大鼠的TG、TC、LDL-C水平，本研究結果提示，治療后，模型組大鼠的Lee′s指數、TG、TC、LDL-C含量均顯著高于對照組，HDL-C低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），提示出現血脂代謝紊亂。Mansuri等[15]研究了油麻藤種子提取物對營養性肥胖的大鼠的作用，結果表明油麻藤種子提取物能顯著降低大鼠的血脂水平。在本實驗中，高劑量組大鼠的Lee′s指數、TG、TC、LDL-C、FAS、ACO含量與陽性對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），說明杜仲、山楂和陳皮在一定程度上抑制了血脂代謝紊亂。

動物脂肪代謝與脂肪酸的合成、分解等過程息息相關，其中FAS是肝臟脂肪酸合成的關鍵因子[16-18]。ACO是在過氧化物酶體中對中、長鏈脂肪酸進行氧化的限速酶[19]。Barb等[20]研究發現，通過12周的高脂喂養大鼠后，大鼠肝臟內的成分含量顯著升高。本實驗結果提示，治療后，模型組大鼠的FAS含量顯著高于對照組，ACO低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），表明在3種混合中藥的調控下，FAS顯著降低，ACO含量顯著升高，減緩了脂肪的累積。

腸道菌群的種類和數量水平微妙地影響著肥胖和心腦血管健康[21]，Turnbaugh等[22]將肥胖小鼠的菌群轉移給無菌小鼠后，無菌小鼠脂肪量顯著增加，并認為腸道內的菌群的差異可能是導致肥胖的因素之一。攝入適當益生菌能促進宿主的健康，令腸道內形成有益優勢菌群，如乳酸菌能控制血清膽固醇水平，調節脂質的平衡[23]。本研究結果提示，模型組大鼠腸道內的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數量少于對照組，大腸埃希菌數量多于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。高劑量組大鼠腸道內的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數量多于模型組，大腸埃希菌數量少于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。說明杜仲、山楂、陳皮混合藥劑具有調節腸道菌群的功能，從而一定程度抑制血脂的紊亂。

綜上所述，杜仲、山楂、陳皮混合使用與治療營養性肥胖的大鼠有較顯著療效，降低大鼠血清中的血脂水平，調節肝臟中酶活性，并調節腸道中的菌群分布，有效降低機體的脂肪含量，達到降脂減肥的作用。

[參考文獻]

[1]Kopelman PG.Obesity as a medical problem[J].Nature，2000，404（6778）：635-643.

[2]Lobstein T，Jackson-Leach R，Moodie ML，et al.Child and adolescent obesity：part of a bigger picture[J].Lancet，2015， 385（9986）：2510-2520.

[3]Organization WH.WHO Obesity and overweight[M].Springer New York，2015.

[4]劉井如，季宇彬，陳明蒼.奧利司他對營養性肥胖大鼠的減肥作用[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（7）：186-188.

[5]Halpern B，Halpern A.Safety assessment of FDA-approved （orlistat and lorcaserin） anti-obesity medications[J].Expert Opin Drug Saf，2015，14（2）：305-315.

[6]訾梅，李祥霞.奧利司他的不良反應及安全應用[J].藥物不良反應雜志，2007，9（3）：182-185.

[7]陳曦，梁冰，王一歌，等.奧利司他對肥胖伴非酒精性脂肪性肝病的作用及危險因素的影響[J].臨床肝膽病雜志，2006， 22（2）：123-124.

[8]馬凌悅，周穎，崔一民.奧利司他的不良反應與藥物間相互作用研究[J].中國藥房，2012，23（22）：2090-2092.

[9]Cahill A，Lean ME.Review article：malnutrition and maltreatment——a comment on Orlistat for the treatment of obesity[J].Aliment Pharmacol Ther，2015，13（8）：997-1002.

[10]Yanovski SZ，Yanovski JA.Long-term drug treatment for obesity：a systematic and clinical review[J].JAMA，2014，311（1）：74-86.

[11]Hao S，Xiao Y，Lin Y，et al.Chlorogenic acid-enriched extract from Eucommia ulmoides leaves inhibits hepatic lipid accumulation through regulation of cholesterol metabolism in HepG2 cells[J].Pharm Biol，2015，54（2）：1-9.

[12]Kausar S，Zaheer Z，Saqib M，et al.Role of crataegus （hawthorn） extract on obesity in hyperlipidemic albino rats[J].Pak J Med Sci，2012，6（1）：100-103.

[13]陳琛，江振友，宋克玉，等.中草藥對小鼠腸道菌群影響的實驗研究[J].中國微生態學雜志，2011，23（1）：15-17.

[14]Samout N，Ettaya A，Bouzenna H，et al.Beneficial effects of Plantago albicans on high-fat diet-induced obesity in rats[J].Biomed Pharmacother，2016，84（2）：1768-1775.

[15]Mansuri J，Paranjape A.Evaluation of anti-obesity effect of aqueous extract of mucuna pruriens seeds on rats[J].Int J Pharm Pharm Sci，2017，9（3）：111-115.

[16]陳光亮，李莉，嚴尚學，等.鹽酸西布曲明對營養性肥胖大鼠的減肥作用[J].中國臨床藥理學與治療學，2003，8（1）：55-58.

[17]Peng I C，Chen Z，Sun W，et al.Glucagon regulates ACC activity in adipocytes through the CAMKKβ/AMPK pathway[J].Am J Physiol Endocrinol Metab，2012，302（12）：1560-1568.

[18]Qiu W，Kohen-Avramoglu R，Mhapsekar S，et al.Glucosamine-induced endoplasmic reticulum stress promotes ApoB100 degradation：evidence for Grp78-mediated targeting to proteasomal degradation[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005， 25（3）：571-577.

[19]Karbowska J，Kochan Z.Effect of DHEA on endocrine functions of adipose tissue，the involvement of PPAR gamma[J].Biomed Pharmacother，2005，70（2）：249-257.

[20]Barb D，Portillo-Sanchez P，Cusi K.Pharmacological management of nonalcoholic fatty liver disease[J].Metabolism，2016，65（8）：1183-1195.

[21]Henaomejia J，Elinav E，Jin C，et al.Inflammasome-mediated dysbiosis regulates progression of NAFLD and obesity[J].Nature，2012，482（7384）：179-185.

[22]Turnbaugh PJ，Ley RE，Mahowald MA，et al.An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest[J].Nature，2006，444（7122）：1027-1031.

[23]黃小瓊，劉盛來，鄭佳林，等.合生元益生菌沖劑對小鼠腸道菌群調節作用的研究[J].中國比較醫學雜志，2011，21（10）：127-130.

（收稿日期：2018-03-12 本文編輯：孟慶卿）